接触性泻剂损伤小肠传输功能的实验研究
1兰州军区总医院普外科 甘肃省兰州市 730050
2第三军医大学大坪医院普外科 重庆市 400042
3兰州军区后勤部门诊部 甘肃省兰州市 730000
高峰，男，1965-02-18生，陕西省米脂县人，汉族. 1989年延安医学院医疗系毕业，学士，1994年第三军医大学硕士，主治医师，主要从事肛肠外科疾病的诊治研究，发表论文25篇.
重庆市科委中青年科技专家基金资助项目， No.950016
项目负责人 高峰，730050，甘肃省兰州市小西湖西街58号，兰州军区总医院普外科.
, http://www.100md.com
Supported by Chongqing Yong Scientists Foundation, No.950016
Correspondence to Mr. Feng Gao, Department of General Surgery, Chinese PLA General Hospital of Lanzhou Command Area, 58 Xiaoxihu Xijie, Lanzhou 730050, Gansu Province, China
Tel. +86·931·2340036或8975301, Fax. +86·931·2340036
收稿日期 1999-04-28 接收日期 1999-07-14
An experiment study of the small intestinal transit injuried by contact laxatives
, 百拇医药
Feng Gao1, Sheng-Ben Zhang2, Lian-Yang Zhang2, Liu Feng3, Wei-Dong Tong2 and Fa-Zhi Li1
Department of General Surgery, Chinese PLA General Hospital of Lanzhou Command Area, Lanzhou 730050, Gansu Province, China
Abstract
AIM To investigate the effect of contact laxatives on small intestinal transit and its pathologic mechanism.
, http://www.100md.com
METHODS Experimented Wistar rats were fed with contact laxatives, rhubarb and phenophthalein, to make the rats have diarrhoea. The laxatives were stopped after 45 days and the rats small intestinal transit change was meassured after 52 days. By using immunohist-ochemistry, the quantitative changes of vasoactive intestinal peptide (VIP), substance P (SP) and S-100 protein in the small intestinal myenteric plexus were studied.
RESULTS The small intestinal transit was markedly injuried, manifesting the slow transit, by the contact laxatives abused for a long time. The content of SP and S-100 protein were increased in the myenteric plexus and the VIP was remained unchanged.
, 百拇医药
CONCLUSION The small intestinal transit may be injuried by the contact laxatives abused, its mechanism was probably as a result of the small intestinal myenteric plexus damaged.
Subject headings laxatives; small intestine; pathology; diarrhoea
Gao F, Zhang SB, Zhang LY, Liu F, Tong WD, Li FZ. An experiment study of the small intestinal transit injuried by contact laxatives.
, http://www.100md.com
Shijie Huaren Xiaohua Zazhi,1999;7(8):659-660
摘要
目的 探讨接触性泻剂对小肠传输功能的影响及其病理学机制.
方法 采用给大鼠饲料里添加接触性泻剂的方法使大鼠发生腹泻,45d后停止给药,52d后测量大鼠小肠传输功能的改变;并应用免疫组化的方法测定小肠肌间神经丛内血管活性肠肽(VIP)、P物质和S-100蛋白的含量变化.
结果 长期大剂量服用接触性泻剂可明显损伤小肠的传输功能,使小肠传输减慢;小肠肌间神经丛内SP和S-100蛋白的含量增加,而VIP无明显变化.
, http://www.100md.com
结论 长期服用接触性泻剂可明显损害小肠的传输功能,其机制可能是由于接触性泻剂损伤小肠肌间神经丛而致.
主题词 泻剂;小肠;病理学;腹泻
高峰, 张胜本, 张连阳, 刘峰, 童卫东, 李发智.接触性泻剂损伤小肠传输功能的实验研究.世界华人消化杂志,1999;7(8):659-660
0 引言
接触性泻剂主要作用于结肠肠神经系统，刺激结肠蠕动，并使结肠对水电解质的吸收减少；一般说来接触性泻剂对小肠的作用不大[1]. 我们应用给大鼠饲料里添加接触性泻剂的方法，研究了接触性泻剂对小肠传输功能的影响，并进一步观察了小肠肌间神经丛内血管活性肠肽(VIP)、P物质(SP)及S-100蛋白的变化，以期阐明其病理学机制.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 实验材料 实验动物36只Wistar成年健康大鼠，雌雄各半，体重140g～280g. 由第三军医大学大坪医院实验动物中心提供. 粗制大黄粉(第三军医大学大坪医院药房提供)；酚酞(重庆东方试剂公司)；兔抗鼠SP多克隆抗体(Zymed 美国)；兔抗鼠VIP多克隆抗体(Zymed 美国)；兔抗牛S-100蛋白多克隆抗体(Zymed 美国)；SPtm试剂盒(Zymed 美国)；Tiger 920微机医学图象分析仪(重庆大学研制).
1.2 方法 将36只大鼠随机分为甲、乙、丙3组，每组12只，♀6只，♂6只. 甲组为正常对照组，乙组为饲养大黄组，丙组为饲养酚酞组. 各组大鼠的雄雌性分笼饲养，给药以大鼠的每公斤体重计算. 甲组饲以普通软饲料(由第三军医大学大坪医院动物室配制). 乙组饲以添加有粗制生大黄粉的上述软饲料，开始时给药的剂量为100mg/(kg·d)，以后每日在前1d的基础上加倍，直到出现半数粪便变稀；保持此剂量直至80%的稀便消失；然后再在此基础上加倍给药，又出现半数粪便变稀. 如此程序循环3次，待最后一次80%的稀便消失1wk后停止给药，饲以普通软饲料待处理. 丙组饲以添加有酚酞的上述软饲料，开始给药的剂量亦为100mg/(kg·d)，并按照乙组的方法调整剂量及停止给药. 本实验给药的时间为45d.
, 百拇医药
1.2.1 小肠传输功能测定 停药1wk后的大鼠禁食24h，用10%的活性炭混悬液1mL～2mL灌胃，灌胃30min后以颈椎脱臼法处死. 立即剖腹，摘出从幽门到直肠末端的全部肠道，在完全松弛状态下测量其肠道全长、活性炭混悬液的肠道内运行的长度，并计算活性炭混悬液运行长度占肠道全长的百分比(黑染肠管长度/肠管总长度)，最后计算每组的平均值.
1.2.2 小肠肌间神经丛免疫组化研究 大鼠剖腹后立即取距回盲部20cm处的一段小肠，固定、包埋同常规的HE染色程序. 采用过氧化酶标记的链酶卵白素(streptavidin-peroxidase)法进行染色，切片厚5μm，主要观察肌间神经丛内VIP，SP和S-100蛋白的免疫反应性强弱. 应用Tiger 920微机医学图象分析仪分析免疫组化染色结果：每组选5例标本，每例随机选4个视野，共20个视野. 测量每视野下肌间神经丛神经节内免疫组化阳性染色区的面积，最后计算每组的平均值(平均值=目标总面积/统计场总面积/20).
, http://www.100md.com
统计学处理 结果以平均值±标准差(x±s)表示，组间数据比较采用两样本均数t检验. P<0.05表示相差显著，P<0.01表示相差非常显著.
2 结果
2.1 小肠传输功能 应用活性炭混悬液推进法测定各组大鼠小肠传输功能，结果显示乙组和丙组大鼠小肠传输显著慢于甲组(P<0.01和P<0.001，表1). 说明长期应用接触性泻剂可明显损伤小肠的传输功能.
表1 大鼠肠管全长及其与活性炭悬液推进长度之比(x±s, cm)
, 百拇医药
bP<0.01 vs甲组.
2.2 肌间神经丛内VIP，SP，S-100蛋白的含量变化 与甲组相比，结果可见乙组和丙组小肠肌间神经丛内SP和S-100蛋白的免疫反应性明显增强(P<0.05和P<0.01)；而VIP免疫反应性无明显改变(表2).
表2 小肠肌间神经丛VIP，SP和S-100蛋白免疫组化图象分析(x±s)
, 百拇医药
aP<0.05 vs 甲组，bP<0.01 vs甲组.
3 讨论
接触性泻剂及其对小肠传输功能的影响 接触性泻剂一般分为蒽醌类和二苯甲烷类，其代表药分别为大黄和酚酞. 它们能通过结肠粘膜作用于肠神经丛，既能减少结肠的分节运动，又可增加其周期性蠕动，从而加速大肠内容物的运行. 早已证明长期应用接触性泻剂，特别是蒽醌类接触性泻剂可以损伤结肠粘膜、神经丛及其肌层，造成泻剂结肠[2，3]. 一般认为接触性泻剂对小肠无明显作用[1]，但我们发现长期大剂量服用接触性泻剂亦可明显损伤小肠的传输功能，且蒽醌类和二苯甲烷类对小肠传输功能都有同样的损害作用. 接触性泻剂损伤小肠传输功能的详细机制不清，本研究提示这种传输功能减弱与小肠肌间神经丛受损有关. 在肠肌间神经丛内，S-100蛋白主要存在于神经胶质细胞和Schwann细胞中，本研究发现乙组和丙组大鼠小肠肌间神经丛内S-100蛋白的免疫反应性较甲组明显增强，说明胶质细胞和Schwann细胞有增生性反应，这可能是神经细胞受损后神经组织的一种修复代偿性机制. 这种改变与泻剂所致结肠肌间神经丛损伤后Schwann细胞增生之变化相似[2，4]，说明接触性泻剂对小肠肌间神经丛有损害作用.
, 百拇医药
VIP，SP是在肠神经系统中调节肠道运动的最主要的肽能神经递质，由于接触性泻剂损伤小肠肌间神经丛，使二者比例失调，破坏了二者在维持肠道正常运动时的平衡和协调性[5]，从而导致小肠传输功能减弱. SP含量增加也可能是肠蠕动减弱后神经组织反馈性合成过多的兴奋性神经递质的表现.
4 参考文献
1 李家泰. 临床药理学. 北京：人民卫生出版社，1998：1167-1168
2 Riemann JF, Schmidt H. Ultrastructural changes in the gut autonomic nervous system following laxative abuse and in other
, http://www.100md.com conditions. Scand J Gastroenterol, 1982; Suppl 71:111-124
3 Tzavell K, Schenkirsch G, Riepl RL, Odenthat KP, Leng-Peschlow E, Muller-Lissner SA. Effects of long-term treatment with
anthranoids and sodium picosulphate on the contents of vasoactive intestinal polypeptide, somatostatin and substance P in the
rat colon. Eur J Gastroenterol Hepatol,1995；7：13-20
4 Gao F, Zhang SB, Zhang LY, Chen L. An immunohistochemical study of colonic vasoactive intestinal peptide, subtance P and
S-100 protein in slow transit constipation. Xin Xiaohua Bingxue Zazhi, 1997；5：141-143
5 Grider JR, Makhlouf GM. Colonic peristaltic reflex: identification of descending relaxation. Am J Physiol, 1986;250:G40-45, 百拇医药(高峰1 张胜本2 张连阳2 刘峰3 童卫东2 李发智1)
2第三军医大学大坪医院普外科 重庆市 400042
3兰州军区后勤部门诊部 甘肃省兰州市 730000
高峰，男，1965-02-18生，陕西省米脂县人，汉族. 1989年延安医学院医疗系毕业，学士，1994年第三军医大学硕士，主治医师，主要从事肛肠外科疾病的诊治研究，发表论文25篇.
重庆市科委中青年科技专家基金资助项目， No.950016
项目负责人 高峰，730050，甘肃省兰州市小西湖西街58号，兰州军区总医院普外科.
, http://www.100md.com
Supported by Chongqing Yong Scientists Foundation, No.950016
Correspondence to Mr. Feng Gao, Department of General Surgery, Chinese PLA General Hospital of Lanzhou Command Area, 58 Xiaoxihu Xijie, Lanzhou 730050, Gansu Province, China
Tel. +86·931·2340036或8975301, Fax. +86·931·2340036
收稿日期 1999-04-28 接收日期 1999-07-14
An experiment study of the small intestinal transit injuried by contact laxatives
, 百拇医药
Feng Gao1, Sheng-Ben Zhang2, Lian-Yang Zhang2, Liu Feng3, Wei-Dong Tong2 and Fa-Zhi Li1
Department of General Surgery, Chinese PLA General Hospital of Lanzhou Command Area, Lanzhou 730050, Gansu Province, China
Abstract
AIM To investigate the effect of contact laxatives on small intestinal transit and its pathologic mechanism.
, http://www.100md.com
METHODS Experimented Wistar rats were fed with contact laxatives, rhubarb and phenophthalein, to make the rats have diarrhoea. The laxatives were stopped after 45 days and the rats small intestinal transit change was meassured after 52 days. By using immunohist-ochemistry, the quantitative changes of vasoactive intestinal peptide (VIP), substance P (SP) and S-100 protein in the small intestinal myenteric plexus were studied.
RESULTS The small intestinal transit was markedly injuried, manifesting the slow transit, by the contact laxatives abused for a long time. The content of SP and S-100 protein were increased in the myenteric plexus and the VIP was remained unchanged.
, 百拇医药
CONCLUSION The small intestinal transit may be injuried by the contact laxatives abused, its mechanism was probably as a result of the small intestinal myenteric plexus damaged.
Subject headings laxatives; small intestine; pathology; diarrhoea
Gao F, Zhang SB, Zhang LY, Liu F, Tong WD, Li FZ. An experiment study of the small intestinal transit injuried by contact laxatives.
, http://www.100md.com
Shijie Huaren Xiaohua Zazhi,1999;7(8):659-660
摘要
目的 探讨接触性泻剂对小肠传输功能的影响及其病理学机制.
方法 采用给大鼠饲料里添加接触性泻剂的方法使大鼠发生腹泻,45d后停止给药,52d后测量大鼠小肠传输功能的改变;并应用免疫组化的方法测定小肠肌间神经丛内血管活性肠肽(VIP)、P物质和S-100蛋白的含量变化.
结果 长期大剂量服用接触性泻剂可明显损伤小肠的传输功能,使小肠传输减慢;小肠肌间神经丛内SP和S-100蛋白的含量增加,而VIP无明显变化.
, http://www.100md.com
结论 长期服用接触性泻剂可明显损害小肠的传输功能,其机制可能是由于接触性泻剂损伤小肠肌间神经丛而致.
主题词 泻剂;小肠;病理学;腹泻
高峰, 张胜本, 张连阳, 刘峰, 童卫东, 李发智.接触性泻剂损伤小肠传输功能的实验研究.世界华人消化杂志,1999;7(8):659-660
0 引言
接触性泻剂主要作用于结肠肠神经系统，刺激结肠蠕动，并使结肠对水电解质的吸收减少；一般说来接触性泻剂对小肠的作用不大[1]. 我们应用给大鼠饲料里添加接触性泻剂的方法，研究了接触性泻剂对小肠传输功能的影响，并进一步观察了小肠肌间神经丛内血管活性肠肽(VIP)、P物质(SP)及S-100蛋白的变化，以期阐明其病理学机制.
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 实验材料 实验动物36只Wistar成年健康大鼠，雌雄各半，体重140g～280g. 由第三军医大学大坪医院实验动物中心提供. 粗制大黄粉(第三军医大学大坪医院药房提供)；酚酞(重庆东方试剂公司)；兔抗鼠SP多克隆抗体(Zymed 美国)；兔抗鼠VIP多克隆抗体(Zymed 美国)；兔抗牛S-100蛋白多克隆抗体(Zymed 美国)；SPtm试剂盒(Zymed 美国)；Tiger 920微机医学图象分析仪(重庆大学研制).
1.2 方法 将36只大鼠随机分为甲、乙、丙3组，每组12只，♀6只，♂6只. 甲组为正常对照组，乙组为饲养大黄组，丙组为饲养酚酞组. 各组大鼠的雄雌性分笼饲养，给药以大鼠的每公斤体重计算. 甲组饲以普通软饲料(由第三军医大学大坪医院动物室配制). 乙组饲以添加有粗制生大黄粉的上述软饲料，开始时给药的剂量为100mg/(kg·d)，以后每日在前1d的基础上加倍，直到出现半数粪便变稀；保持此剂量直至80%的稀便消失；然后再在此基础上加倍给药，又出现半数粪便变稀. 如此程序循环3次，待最后一次80%的稀便消失1wk后停止给药，饲以普通软饲料待处理. 丙组饲以添加有酚酞的上述软饲料，开始给药的剂量亦为100mg/(kg·d)，并按照乙组的方法调整剂量及停止给药. 本实验给药的时间为45d.
, 百拇医药
1.2.1 小肠传输功能测定 停药1wk后的大鼠禁食24h，用10%的活性炭混悬液1mL～2mL灌胃，灌胃30min后以颈椎脱臼法处死. 立即剖腹，摘出从幽门到直肠末端的全部肠道，在完全松弛状态下测量其肠道全长、活性炭混悬液的肠道内运行的长度，并计算活性炭混悬液运行长度占肠道全长的百分比(黑染肠管长度/肠管总长度)，最后计算每组的平均值.
1.2.2 小肠肌间神经丛免疫组化研究 大鼠剖腹后立即取距回盲部20cm处的一段小肠，固定、包埋同常规的HE染色程序. 采用过氧化酶标记的链酶卵白素(streptavidin-peroxidase)法进行染色，切片厚5μm，主要观察肌间神经丛内VIP，SP和S-100蛋白的免疫反应性强弱. 应用Tiger 920微机医学图象分析仪分析免疫组化染色结果：每组选5例标本，每例随机选4个视野，共20个视野. 测量每视野下肌间神经丛神经节内免疫组化阳性染色区的面积，最后计算每组的平均值(平均值=目标总面积/统计场总面积/20).
, http://www.100md.com
统计学处理 结果以平均值±标准差(x±s)表示，组间数据比较采用两样本均数t检验. P<0.05表示相差显著，P<0.01表示相差非常显著.
2 结果
2.1 小肠传输功能 应用活性炭混悬液推进法测定各组大鼠小肠传输功能，结果显示乙组和丙组大鼠小肠传输显著慢于甲组(P<0.01和P<0.001，表1). 说明长期应用接触性泻剂可明显损伤小肠的传输功能.
表1 大鼠肠管全长及其与活性炭悬液推进长度之比(x±s, cm)
| 组别 | n | 肠管总长 | 小肠黑染长度 | 百分比(%) |
| 甲组 | 11 | 125±14 | 87±23 | 69±13 |
| 乙组 | 12 | 120±9 | 61±13b | 51±12b |
| 丙组 | 11 | 120±13 | 57±15b | 47±11b |
, 百拇医药
bP<0.01 vs甲组.
2.2 肌间神经丛内VIP，SP，S-100蛋白的含量变化 与甲组相比，结果可见乙组和丙组小肠肌间神经丛内SP和S-100蛋白的免疫反应性明显增强(P<0.05和P<0.01)；而VIP免疫反应性无明显改变(表2).
表2 小肠肌间神经丛VIP，SP和S-100蛋白免疫组化图象分析(x±s)
| 组别 | VIP | SP | S-100 |
| 甲组 | 1.14±0.53 | 0.34±0.22 | 0.26±0.16 |
| 乙组 | 1.07±0.49 | 0.59±0.35a | 0.55±0.35b |
| 丙组 | 1.16±0.78 | 0.60±0.37a | 0.74±0.59b |
, 百拇医药
aP<0.05 vs 甲组，bP<0.01 vs甲组.
3 讨论
接触性泻剂及其对小肠传输功能的影响 接触性泻剂一般分为蒽醌类和二苯甲烷类，其代表药分别为大黄和酚酞. 它们能通过结肠粘膜作用于肠神经丛，既能减少结肠的分节运动，又可增加其周期性蠕动，从而加速大肠内容物的运行. 早已证明长期应用接触性泻剂，特别是蒽醌类接触性泻剂可以损伤结肠粘膜、神经丛及其肌层，造成泻剂结肠[2，3]. 一般认为接触性泻剂对小肠无明显作用[1]，但我们发现长期大剂量服用接触性泻剂亦可明显损伤小肠的传输功能，且蒽醌类和二苯甲烷类对小肠传输功能都有同样的损害作用. 接触性泻剂损伤小肠传输功能的详细机制不清，本研究提示这种传输功能减弱与小肠肌间神经丛受损有关. 在肠肌间神经丛内，S-100蛋白主要存在于神经胶质细胞和Schwann细胞中，本研究发现乙组和丙组大鼠小肠肌间神经丛内S-100蛋白的免疫反应性较甲组明显增强，说明胶质细胞和Schwann细胞有增生性反应，这可能是神经细胞受损后神经组织的一种修复代偿性机制. 这种改变与泻剂所致结肠肌间神经丛损伤后Schwann细胞增生之变化相似[2，4]，说明接触性泻剂对小肠肌间神经丛有损害作用.
, 百拇医药
VIP，SP是在肠神经系统中调节肠道运动的最主要的肽能神经递质，由于接触性泻剂损伤小肠肌间神经丛，使二者比例失调，破坏了二者在维持肠道正常运动时的平衡和协调性[5]，从而导致小肠传输功能减弱. SP含量增加也可能是肠蠕动减弱后神经组织反馈性合成过多的兴奋性神经递质的表现.
4 参考文献
1 李家泰. 临床药理学. 北京：人民卫生出版社，1998：1167-1168
2 Riemann JF, Schmidt H. Ultrastructural changes in the gut autonomic nervous system following laxative abuse and in other
, http://www.100md.com conditions. Scand J Gastroenterol, 1982; Suppl 71:111-124
3 Tzavell K, Schenkirsch G, Riepl RL, Odenthat KP, Leng-Peschlow E, Muller-Lissner SA. Effects of long-term treatment with
anthranoids and sodium picosulphate on the contents of vasoactive intestinal polypeptide, somatostatin and substance P in the
rat colon. Eur J Gastroenterol Hepatol,1995；7：13-20
4 Gao F, Zhang SB, Zhang LY, Chen L. An immunohistochemical study of colonic vasoactive intestinal peptide, subtance P and
S-100 protein in slow transit constipation. Xin Xiaohua Bingxue Zazhi, 1997；5：141-143
5 Grider JR, Makhlouf GM. Colonic peristaltic reflex: identification of descending relaxation. Am J Physiol, 1986;250:G40-45, 百拇医药(高峰1 张胜本2 张连阳2 刘峰3 童卫东2 李发智1)