急性胰腺炎大鼠肺内TNF-α基因表达与肺损伤的关系
1四川省人民医院肝胆外科 四川省成都市 610071华西医科大学附属第一医院 2普外科 3中医科
项目负责人 张刚四川省人民医院肝胆外科 四川省成都市 610071
收稿日期 1999-10-03 接收日期 1999-12-02
Subject headings pancreatitis; tumor necrosis factor; gene expression; endotoxin
主题词 胰腺炎；肿瘤坏死因子；基因表达；内毒素
肿瘤坏死因子(TNF)在多种病因导致急性肺损伤(ALI)或ARDS的进程中发挥着重要作用，但在急性坏死性胰腺炎(ANP)时肺内TNF-α基因的过度表达与并发肺损伤的关系尚未获确切证据[1]. 我们拟从分子水平探讨急性胰腺炎时肺内TNF-α基因转录与蛋白表达状况在肺损伤发病机制中的意义.
, 百拇医药
1 材料和方法
SD大鼠90只随机分为A，B，C三组，A组以5g/L牛磺胆酸钠胰胆管内逆行注射制成急性水肿性胰腺炎(AEP)模型，B组同法以50g/L牛磺胆酸钠制成ANP模型，C组为假手术对照组. 各组动物分别于预定时点处死，测定血淀粉酶、内毒素(ET)及TNF-α水平；以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肺组织中TNF-α mRNA含量了解基因转录水平，以免疫组织化学(IHC)检测其蛋白的表达；同时在光镜下观察肺组织病变情况并行分级评分.
2 结果
以5g/L牛磺胆酸钠逆行注射至胰胆管内可在大鼠诱导出典型的AEP模型. ANP组大鼠血中ET含量在6h以后进行性增加，AEP组与对照组ET水平变化不大. 对照组大鼠肺内未能检测到TNF-α mRNA；诱导AEP后肺内TNF-α mRNA的表达呈短暂的一过性增强；这种表达在ANP组则更为强烈与持久，自6h起明显高于AEP组相应水平，持至12h仍保持较高水平. 但ANP组TNF-α mRNA水平和血中ET含量的增加无线性相关. 血中TNF-α水平以及IHC检测到的肺组织中巨噬细胞表达TNF-α的情况与前述TNF-α mRNA表达的变化基本一致. ANP组肺损伤明显较AEP组重，对照组大鼠肺内无明显病变. 经多元逐步回归分析，ANP组肺损伤的严重程度与血中ET，TNF-α含量以及肺内TNF-α mRNA水平均存在相关(γ分别为0.93，0.79及0.83，P<0.01，0.05及0.05；在AEP组肺损伤的状况亦与血中TNF-α水平及肺内TNF-α mRNA表达水平有关(γ均为0.77，P<0.05).
, 百拇医药
3 讨论
大量证据表明，TNF直接参与了其他多种病因(如脓毒症、创伤以及缺血/再灌注损伤等)引起的ALI或ARDS进程. 近年研究发现，AP的多种动物模型及临床患者血中TNF水平也较正常时增高，ANP时肺内较多中性粒细胞和巨噬细胞表达TNF-α蛋白[2]. 夏庆et al[3]的研究表明，肺泡支气管灌洗液中TNF活性水平升高可能与ANP并发肺损伤有关. 最近国外学者还发现诱导AP后肺组织中TNF-α基因的转录水平上调，但上述现象在肺损伤发病机制中的意义尚未明确[1]. 我们进一步证实诱导AP后肺内TNF-α基因的转录与蛋白表达水平上调，TNF-α主要由巨噬细胞表达. 我们还发现ANP大鼠肺内TNF-α基因的转录与蛋白表达水平上调较AEP大鼠更为显著与持久，且与前者并发明显肺损伤有关. 肺内TNF-α基因的上调表达可能系机体对胰腺炎症的全身反应，它在AEP时呈自限性，并不能导致明确的肺损伤. 但ANP时肺内TNF-α基因的表达强烈而且持久，代表着一种过度的全身炎症反应即SIRS，它可能最终导致了ALI或ARDS 的发生，这种机制与目前对MODS的认识是符合的[4]. 实验结果还表明，内毒素血症不是TNF-α生成的始动因素，但ANP时肺内TNF-α基因的过度表达可能部分依赖于内毒素血症的刺激.
, 百拇医药
鉴于肺内TNF-α基因的过度转录与表达和肺损伤的发生密切相关，在分子水平上能自动地调控TNF-α的生成，可能在防治ANP并发ARDS方面具有重要的治疗意义.
4 参考文献
1 Norman J. The role of cytokines in pathogenesis of acute pancreatitis. Am J Surg， 1998;175:76-83
2 倪泉兴，张妞，张群华，张延龄，向阳，郑颂国，罗建民. 生长抑素和生长激素联合防治急性坏死性胰腺炎肺损伤的研究.
中华实验外科杂志，1998；15：404-406
3 夏庆，蒋俊明. TNF在犬急性胰腺炎早期肺损害中的作用及通里攻下法的影响. 中国中西医结合外科杂志，1997；3：336-338
4 Goris RJA. MODS/SIRS: result of an overwhelming inflammatory response World J Surg， 1996;20:418-421, http://www.100md.com(张 刚1 张肇达2 刘续宝2 田伯乐2 胡伟明2 蒋俊明3)
项目负责人 张刚四川省人民医院肝胆外科 四川省成都市 610071
收稿日期 1999-10-03 接收日期 1999-12-02
Subject headings pancreatitis; tumor necrosis factor; gene expression; endotoxin
主题词 胰腺炎；肿瘤坏死因子；基因表达；内毒素
肿瘤坏死因子(TNF)在多种病因导致急性肺损伤(ALI)或ARDS的进程中发挥着重要作用，但在急性坏死性胰腺炎(ANP)时肺内TNF-α基因的过度表达与并发肺损伤的关系尚未获确切证据[1]. 我们拟从分子水平探讨急性胰腺炎时肺内TNF-α基因转录与蛋白表达状况在肺损伤发病机制中的意义.
, 百拇医药
1 材料和方法
SD大鼠90只随机分为A，B，C三组，A组以5g/L牛磺胆酸钠胰胆管内逆行注射制成急性水肿性胰腺炎(AEP)模型，B组同法以50g/L牛磺胆酸钠制成ANP模型，C组为假手术对照组. 各组动物分别于预定时点处死，测定血淀粉酶、内毒素(ET)及TNF-α水平；以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肺组织中TNF-α mRNA含量了解基因转录水平，以免疫组织化学(IHC)检测其蛋白的表达；同时在光镜下观察肺组织病变情况并行分级评分.
2 结果
以5g/L牛磺胆酸钠逆行注射至胰胆管内可在大鼠诱导出典型的AEP模型. ANP组大鼠血中ET含量在6h以后进行性增加，AEP组与对照组ET水平变化不大. 对照组大鼠肺内未能检测到TNF-α mRNA；诱导AEP后肺内TNF-α mRNA的表达呈短暂的一过性增强；这种表达在ANP组则更为强烈与持久，自6h起明显高于AEP组相应水平，持至12h仍保持较高水平. 但ANP组TNF-α mRNA水平和血中ET含量的增加无线性相关. 血中TNF-α水平以及IHC检测到的肺组织中巨噬细胞表达TNF-α的情况与前述TNF-α mRNA表达的变化基本一致. ANP组肺损伤明显较AEP组重，对照组大鼠肺内无明显病变. 经多元逐步回归分析，ANP组肺损伤的严重程度与血中ET，TNF-α含量以及肺内TNF-α mRNA水平均存在相关(γ分别为0.93，0.79及0.83，P<0.01，0.05及0.05；在AEP组肺损伤的状况亦与血中TNF-α水平及肺内TNF-α mRNA表达水平有关(γ均为0.77，P<0.05).
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3 讨论
大量证据表明，TNF直接参与了其他多种病因(如脓毒症、创伤以及缺血/再灌注损伤等)引起的ALI或ARDS进程. 近年研究发现，AP的多种动物模型及临床患者血中TNF水平也较正常时增高，ANP时肺内较多中性粒细胞和巨噬细胞表达TNF-α蛋白[2]. 夏庆et al[3]的研究表明，肺泡支气管灌洗液中TNF活性水平升高可能与ANP并发肺损伤有关. 最近国外学者还发现诱导AP后肺组织中TNF-α基因的转录水平上调，但上述现象在肺损伤发病机制中的意义尚未明确[1]. 我们进一步证实诱导AP后肺内TNF-α基因的转录与蛋白表达水平上调，TNF-α主要由巨噬细胞表达. 我们还发现ANP大鼠肺内TNF-α基因的转录与蛋白表达水平上调较AEP大鼠更为显著与持久，且与前者并发明显肺损伤有关. 肺内TNF-α基因的上调表达可能系机体对胰腺炎症的全身反应，它在AEP时呈自限性，并不能导致明确的肺损伤. 但ANP时肺内TNF-α基因的表达强烈而且持久，代表着一种过度的全身炎症反应即SIRS，它可能最终导致了ALI或ARDS 的发生，这种机制与目前对MODS的认识是符合的[4]. 实验结果还表明，内毒素血症不是TNF-α生成的始动因素，但ANP时肺内TNF-α基因的过度表达可能部分依赖于内毒素血症的刺激.
, 百拇医药
鉴于肺内TNF-α基因的过度转录与表达和肺损伤的发生密切相关，在分子水平上能自动地调控TNF-α的生成，可能在防治ANP并发ARDS方面具有重要的治疗意义.
4 参考文献
1 Norman J. The role of cytokines in pathogenesis of acute pancreatitis. Am J Surg， 1998;175:76-83
2 倪泉兴，张妞，张群华，张延龄，向阳，郑颂国，罗建民. 生长抑素和生长激素联合防治急性坏死性胰腺炎肺损伤的研究.
中华实验外科杂志，1998；15：404-406
3 夏庆，蒋俊明. TNF在犬急性胰腺炎早期肺损害中的作用及通里攻下法的影响. 中国中西医结合外科杂志，1997；3：336-338
4 Goris RJA. MODS/SIRS: result of an overwhelming inflammatory response World J Surg， 1996;20:418-421, http://www.100md.com(张 刚1 张肇达2 刘续宝2 田伯乐2 胡伟明2 蒋俊明3)