进展期胃癌组织中CD68，iNOS及TNFα阳性细胞的分布
1 张家口医学院第一附属医院消化内科 河北省张家口市 075000
2 河北医科大学第四临床学院 河北省石家庄市 050000
河北省卫生厅基金资助课题，No.96014
项目负责人 杨路亭 张家口医学院第一附属医院消化内科 河北省张家口市 075000
Tel. +86-313-8030639
收稿日期 1999-08-11 接收日期 1999-11-15
, 百拇医药
Subject headings stomach neoplasms; CD68; nitric oxide synthase; tumor necrosis factor
主题词 胃肿瘤；一氧化氮合酶；肿瘤坏死因子
近年研究发现，在人结肠癌、乳腺癌、头颈部鳞癌等组织中，均有iNOS表达，且可表现出促进肿瘤生长、血管形成和肿瘤细胞浸润的作用[1，2]. TNFα在某些肿瘤组织中具有促进其生长转移的作用[3]. 为探明胃癌局部组织中的免疫状态，我们对CD68，iNOS，TNFα阳性细胞在胃癌组织中的分布进行了研究.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 我科内镜及活检病理诊断为进展期胃癌18例，常规行根治性胃大部切除. 术后大体标本经生理盐水充分冲洗后，分别于癌灶中心(中心区)、边缘(边缘区)及距癌灶边缘6cm以外(远癌区)取1.0cm×0.5cm全层胃壁组织一块，立即置于100mL/L中性福尔马林溶液中固定48h～72h. 常规石蜡包埋切片，备用CD68单抗为美国Zymed公司产品. iNOS，TNFα多抗为美国Santa Cruz公司产品. SP染色试剂为Zymed公司最新推出的第2代SP试剂盒Histostain-plus kit.
1.2 方法 实验中CD68单抗以1∶40稀释，TNFα，iNOS多抗均以1∶50比例稀释，免疫组化染色参照中山生物技术有限公司Catalog’98 53页实验技术资料. 阴性对照为替代实验，与CD68,iNOS，TNFα免疫组化同时进行，用抗体稀释液代Ⅰ抗，用PBS分别代替Ⅱ，Ⅲ抗. 阳性对照参照Santa Cruz和Zymed公司提供的阳性对照片，将染好的切片逐一进行显微镜下观察，然后选择各区中各种阳性细胞染色理想的切片各一张，每张分别选取胃壁浅层(相当于粘膜和粘膜下层)，深层(相当于肌层和浆膜层)两个视野，用北航医学图象分析系统软件进行图象分析.
, 百拇医药
统计学处理 采用新复极差法，分别对3种阳性细胞数图象分析结果进行统计分析.
2 结果
图象分析及统计分析结果见表1～3，阴性对照片中未见阳性细胞.
表1 CD68阳性细胞数在胃壁中的分布
, 百拇医药
aP<0.05，bP<0.01，vs 远癌区；cP<0.05，vs 中心区.
表2 iNOS阳性细胞在胃壁中的分布
, 百拇医药
aP<0.05，vs 远癌区；cP<0.05，vs 边缘区.
表3 TNFα阳性细胞在胃壁中的分布
bP<0.01，vs 远癌区；cP<0.05，vs 边缘区.
, http://www.100md.com
3 讨论
尽管许多实验认为M具有明显的抗瘤作用，本研究也显示胃癌组织中由远及近有明显增多之势，但为何肿瘤仍进展不止呢Gardner et al[4]实验发现，在荷瘤宿主中，腹腔和脾脏Ⅰa表达降低，PGE2产生显著增加，腹腔M产生的超氧化物明显减少而脾脏产生明显增加. 在腹腔M中NO产生也明显受抑制. PGE2可抑制M表面Ⅰa分子表达，从而抑制其效应功能. 因此，在荷瘤宿主中M的抗瘤作用呈抑制状态，在癌灶中心浅层，M较深层明显减少，可能与组织缺血坏死有关. 动物实验证明[5]，肿瘤组织中大量产生的NO能导致代谢抑制和细胞凋亡，而且肿瘤组织产生的NO与其转移和恶性度呈负相关. 而在人体中，NO抗癌作用机制尚不清楚. 从我们的研究中可以发现，于癌灶中心、边缘及远癌区胃壁中均有iNOS活性的表达，而且其表达在中心区有减少趋势，尤其在胃壁浅层这种变化较明显. 在肿瘤进展期NO之所以能促进肿瘤生长转移，可能与病灶边缘的肿瘤细胞产生大量NO有关. TNF与γ干扰素结合体外可选择性杀伤多种瘤细胞株而在体内则具有抗瘤活性，其抗瘤作用主要机制之一是诱导细胞内线粒体产生活性氧递质，从而发挥细胞毒作用[6]. TNFα在肿瘤免疫中的作用也具有双重性，在某些肿瘤中具有促进肿瘤转移作用[3]，还可引起晚期肿瘤患者发生恶液质. 我们的免疫组化研究显示，TNFα阳性细胞在胃癌组织局部有较广泛的分布，而且由远及近有增多趋势，但其确切作用尚待进一步阐明.
, 百拇医药
4 参考文献
1 刘艺萍. 巨噬细胞的抗肿瘤效应. 国外医学免疫学分册，1998；21：207-210
2 Rosbe KW, Prazma J, Petrusz P, Mims W, Ball SS, Weissler MC. Immunohistochemical characterization of nitric oxide synthase
activity in squamous cell carcinoma of the head and neck. Otolaryngol Head Neck Surg, 1995;113:541-549
3 Peter D, Achim K, Marcus H. Promotion of experimental liver metastasis by tumor necrosis factor. Int J Cancer, 1995;60:867-871
, 百拇医药
4 Gardner TE, Naama H, Daly JM. Peritoneal and splenic macrophage functions in the tumor-bearing host. J Surg Res,
1995;59:305-310
5 Iishi H, Tatsuta M, Baba M, Yamamoto R, Uehara H, Nakaizumi A. Inhibition of experimental gastric carcinogenesis, induced by MNNG
in rats by SNP, a nitric oxide generator. Eur J Cancer, 1998;34:554-557
6 Vera G, Johon G, Kurt DV, Walter F. Direct evidence for tumon necrosis factor-induced mitochondrial reactive oxygen
intermediates and their involovement in cytotoxity. Proc Natl Acad Sci USA, 1995;92:8115-8119, http://www.100md.com(杨路亭1 邹玉安1 吴晓萱1 姚树坤2)
2 河北医科大学第四临床学院 河北省石家庄市 050000
河北省卫生厅基金资助课题，No.96014
项目负责人 杨路亭 张家口医学院第一附属医院消化内科 河北省张家口市 075000
Tel. +86-313-8030639
收稿日期 1999-08-11 接收日期 1999-11-15
, 百拇医药
Subject headings stomach neoplasms; CD68; nitric oxide synthase; tumor necrosis factor
主题词 胃肿瘤；一氧化氮合酶；肿瘤坏死因子
近年研究发现，在人结肠癌、乳腺癌、头颈部鳞癌等组织中，均有iNOS表达，且可表现出促进肿瘤生长、血管形成和肿瘤细胞浸润的作用[1，2]. TNFα在某些肿瘤组织中具有促进其生长转移的作用[3]. 为探明胃癌局部组织中的免疫状态，我们对CD68，iNOS，TNFα阳性细胞在胃癌组织中的分布进行了研究.
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 材料 我科内镜及活检病理诊断为进展期胃癌18例，常规行根治性胃大部切除. 术后大体标本经生理盐水充分冲洗后，分别于癌灶中心(中心区)、边缘(边缘区)及距癌灶边缘6cm以外(远癌区)取1.0cm×0.5cm全层胃壁组织一块，立即置于100mL/L中性福尔马林溶液中固定48h～72h. 常规石蜡包埋切片，备用CD68单抗为美国Zymed公司产品. iNOS，TNFα多抗为美国Santa Cruz公司产品. SP染色试剂为Zymed公司最新推出的第2代SP试剂盒Histostain-plus kit.
1.2 方法 实验中CD68单抗以1∶40稀释，TNFα，iNOS多抗均以1∶50比例稀释，免疫组化染色参照中山生物技术有限公司Catalog’98 53页实验技术资料. 阴性对照为替代实验，与CD68,iNOS，TNFα免疫组化同时进行，用抗体稀释液代Ⅰ抗，用PBS分别代替Ⅱ，Ⅲ抗. 阳性对照参照Santa Cruz和Zymed公司提供的阳性对照片，将染好的切片逐一进行显微镜下观察，然后选择各区中各种阳性细胞染色理想的切片各一张，每张分别选取胃壁浅层(相当于粘膜和粘膜下层)，深层(相当于肌层和浆膜层)两个视野，用北航医学图象分析系统软件进行图象分析.
, 百拇医药
统计学处理 采用新复极差法，分别对3种阳性细胞数图象分析结果进行统计分析.
2 结果
图象分析及统计分析结果见表1～3，阴性对照片中未见阳性细胞.
表1 CD68阳性细胞数在胃壁中的分布
| 部位 | 浅层 | 深层 |
| 远癌区 | 25.3±16.5 | 3.7±2.3 |
| 边缘区 | 27.0±21.6a | 82.8±75.9b |
| 中心区 | 69.8±22.9ac | 172.0±48.5bc |
, 百拇医药
aP<0.05，bP<0.01，vs 远癌区；cP<0.05，vs 中心区.
表2 iNOS阳性细胞在胃壁中的分布
| 部位 | 浅层 | 深层 |
| 远癌区 | 415.0±162.8 | 99.0±75.5 |
| 边缘区 | 346.6±101.0a | 267.7±59.5a |
| 中心区 | 205.6±74.8ac | 279.0±41.0a |
, 百拇医药
aP<0.05，vs 远癌区；cP<0.05，vs 边缘区.
表3 TNFα阳性细胞在胃壁中的分布
| 部位 | 浅层 | 深层 |
| 远癌区 | 186.6±30.2 | 61.7±23.5 |
| 边缘区 | 219.4±30.8b | 255.0±17.8b |
| 中心区 | 342.6±86.2bc | 252.0±21.4b |
bP<0.01，vs 远癌区；cP<0.05，vs 边缘区.
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3 讨论
尽管许多实验认为M具有明显的抗瘤作用，本研究也显示胃癌组织中由远及近有明显增多之势，但为何肿瘤仍进展不止呢Gardner et al[4]实验发现，在荷瘤宿主中，腹腔和脾脏Ⅰa表达降低，PGE2产生显著增加，腹腔M产生的超氧化物明显减少而脾脏产生明显增加. 在腹腔M中NO产生也明显受抑制. PGE2可抑制M表面Ⅰa分子表达，从而抑制其效应功能. 因此，在荷瘤宿主中M的抗瘤作用呈抑制状态，在癌灶中心浅层，M较深层明显减少，可能与组织缺血坏死有关. 动物实验证明[5]，肿瘤组织中大量产生的NO能导致代谢抑制和细胞凋亡，而且肿瘤组织产生的NO与其转移和恶性度呈负相关. 而在人体中，NO抗癌作用机制尚不清楚. 从我们的研究中可以发现，于癌灶中心、边缘及远癌区胃壁中均有iNOS活性的表达，而且其表达在中心区有减少趋势，尤其在胃壁浅层这种变化较明显. 在肿瘤进展期NO之所以能促进肿瘤生长转移，可能与病灶边缘的肿瘤细胞产生大量NO有关. TNF与γ干扰素结合体外可选择性杀伤多种瘤细胞株而在体内则具有抗瘤活性，其抗瘤作用主要机制之一是诱导细胞内线粒体产生活性氧递质，从而发挥细胞毒作用[6]. TNFα在肿瘤免疫中的作用也具有双重性，在某些肿瘤中具有促进肿瘤转移作用[3]，还可引起晚期肿瘤患者发生恶液质. 我们的免疫组化研究显示，TNFα阳性细胞在胃癌组织局部有较广泛的分布，而且由远及近有增多趋势，但其确切作用尚待进一步阐明.
, 百拇医药
4 参考文献
1 刘艺萍. 巨噬细胞的抗肿瘤效应. 国外医学免疫学分册，1998；21：207-210
2 Rosbe KW, Prazma J, Petrusz P, Mims W, Ball SS, Weissler MC. Immunohistochemical characterization of nitric oxide synthase
activity in squamous cell carcinoma of the head and neck. Otolaryngol Head Neck Surg, 1995;113:541-549
3 Peter D, Achim K, Marcus H. Promotion of experimental liver metastasis by tumor necrosis factor. Int J Cancer, 1995;60:867-871
, 百拇医药
4 Gardner TE, Naama H, Daly JM. Peritoneal and splenic macrophage functions in the tumor-bearing host. J Surg Res,
1995;59:305-310
5 Iishi H, Tatsuta M, Baba M, Yamamoto R, Uehara H, Nakaizumi A. Inhibition of experimental gastric carcinogenesis, induced by MNNG
in rats by SNP, a nitric oxide generator. Eur J Cancer, 1998;34:554-557
6 Vera G, Johon G, Kurt DV, Walter F. Direct evidence for tumon necrosis factor-induced mitochondrial reactive oxygen
intermediates and their involovement in cytotoxity. Proc Natl Acad Sci USA, 1995;92:8115-8119, http://www.100md.com(杨路亭1 邹玉安1 吴晓萱1 姚树坤2)