人参皂甙Rg1对脂多糖/D-氨基半乳糖诱导的小鼠 肝炎及一氧化氮合酶的影响
1昆明医学院医学基础部药理教研室 云南省昆明市 650031
2云南省天然药物药理重点实验室 云南省昆明市 650031
3云南省药品检验所 云南省昆明市 650011
本课题由云南省重点学科科研基金资助，No. KY-98012
项目负责人 王国燕昆明医学院医学基础部药理教研室 云南省昆明市 650031
Tel. 0086-871-5328883
Email.gywang@public.km.yn.cn
, http://www.100md.com
收稿日期 2000-05-12 接受日期 2000-05-16
Subject headings ginseng; lipopolysaccharides; amino sugars; hepatitis; nitric oxide synthase; saponins; serodiagnosis; mice
主题词 人参；脂多糖类；氨基糖类；肝炎；一氧化氮合酶；皂苷类；血清诊断；小鼠
王国燕, 邓学端, 何永蜀, 陈静, 后文静, 陈林芳. 人参皂甙Rg1对脂多糖/D-氨基半乳糖诱导的小鼠肝炎及一氧化氮合酶的影响.
世界华人消化杂志，2000；8(11)：1317
, 百拇医药
脂多糖(LPS)能诱导D-氨基半乳糖致敏小鼠坏死性肝炎. LPS的毒性是因其作用于靶细胞引起内源性递质释放而触发的. 一氧化氮(NO)作为一种信使或调质，它既有利于机体的自身免疫防御能力，又具有潜在的毒性. NO的作用和信使功能主要受一氧化氮合酶(NOS)调控. LPS作用于小鼠枯否细胞和巨噬细胞而产生大量的NO是其诱导病理性肝损伤的重要递质[1-3]. 三七是一种名贵中药材用于止血、强心和消炎等
[4，5]. 人参皂甙Rg1是从三七中分离提取的一种主要活性成分. 现报道人参皂甙Rg1对LPS诱导D-氨基半乳糖致敏小鼠坏死性肝炎和血清一氧化氮、一氧化氮合酶及谷丙转氨酶活性影响.
1 材料和方法
1.1 材料 Rg1, 纯度为96.5%的淡黄色结晶粉末，由昆明医学院化学教研室提供. LPS购于美国Sigma公司. D-GaIL，NO，NOS和ALT试剂盒购自于南京聚力生物医学工程研究所. ICR小鼠雌雄兼用，质量18g～22g，由云南省天然药物药理重点实验室提供，合格证号：9806.
, 百拇医药
1.2 方法 小鼠致死性肝炎模型：ICR小鼠ip D-GaIN(700mg·kg-1)和LPS(1mg·kg-1)后24h摘眼球取血，用于NO, NOS和ALT活性测定[6]. 肝脏组织用10mL·L-1的福尔马林固定，石蜡包埋切片后苏木精和四溴荧光素染色作组织学检查. 为观察Rg1对坏死性肝炎的影响，小鼠预先灌胃给予Rg1(0, 30, 90, 180mg·kg-1·d-1,连续7d). 于末次灌胃后1h D-GaIN和LPS. 血清NO和NOS检测采用比色法.
统计学处理 计量资料用x±s表示，并与对照组相比较.
2 结果
, 百拇医药
2.1 Rg1对小鼠血清ALT活性和死亡率的影响 小鼠ip LPS 1μg·kg-1和D-GaIN 700mg·kg-1后，血清ALT水平高达13336nkat·L-1，死亡率高于50%，肝组织出现大片状出血性坏死. Rg1于ip LPS和D-GaIN前给予Rg1 30, 90, 180mg·kg-1可明显降低血清ALT水平并降低小鼠的死亡率(表1).
2.2 Rg1对小鼠血清NO和NOS的影响 小鼠ip LPS 1μg·kg-1和D-GaIN 700mg·kg-1后，血清NO和NOS含量分别为0.55±0.20和0.43±0.09(A540). 在ip LPS 1μg·kg-1和D-GalN 700mg·kg-1之前给予Rg1 90, 180mg·kg-1可明显降低血清NO含量，Rg1 30, 90mg·kg-1还可降低血清NOS的活性(表2).
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表1 Rg1对LPS和D-GaIN诱导肝炎小鼠的血清ALT活性和死亡率的影响(n=28,x±s)
aP<0.05, bP<0.01 vs 0 control.
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表2 Rg1对LPS和D-GaIN诱导肝炎小鼠血清NO和NOS活性影响(n=12, x±s)
, 百拇医药
aP<0.05, bP<0.01 vs 0 control.
3 讨论
本研究表明LPS具有致死性毒性并可诱导D-GalN致敏小鼠肝脏大片状出血性坏死，该结果与文献报道一致[6，7]. 预先给予Rg1可减轻D-GalN致敏小鼠对LPS的致死性毒性的反应，防止肝组织进行性损伤. Rg1能降低LPS和D-GaIN所致肝炎小鼠血清NO和NOS活性. 已证实，大量产生的NO是LPS诱导病理性肝损伤的主要介导者，而Rg1对NO的产生进行抑制，可能是其对抗LPS肝毒性的机制所在. 动物和人体研究已表明特异性的NOS合酶抑制剂可以用于各种与NO大量产生有关的疾病的治疗.
总之，我们目前的研究结果表明，人参皂甙Rg1对LPS/D-GaIN引起的致死性小鼠肝炎具有一定的保护作用，并抑制LPS诱导的NO产生，而NO在LPS所介导的反应中起了至关重要的作用.
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致谢 对昆明医学院化学教研室詹尔益和杨荫康两位教授的支持表示感谢!
4 参考文献
1 Satre T, Gundersen Y, Thiemermann C, Lilleaasen P, Aasen AO. Aminoethyl-isothiourea, a selective inhibitor of inducible
nitric-oxide synthase activity, improves liver circulation and oxygen metabolism in a porcine model of endotoxemia.
, http://www.100md.com
Shock, 1998;9:109-115
2 Moncada S, Palmer RMJ, Higgs EA. Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology. Pharmacol Rev,1991;43:109-142
3 Geller LA, lowenstein CJ, Shapiro RA, Nussler AK, Silvio MD, Wang SC. Molecular cloning and expression of inducible
nitric-oxide synthase from human hepatocytes. Proc Natl Acad Sci USA, 1993;90:3491-3495
, 百拇医药 4 Hua G, Fengzhen W, Eric JL, Melvin DT. Immunostimulating Polysaccharides from Panax notoginseng. Pharm Res,1996;13:1196-1200
5 Li JQ, Zhang XG, Zhang JT. Study on the anti-apoptotic mechanism of Ginsenoside Rg1 in cultured cortical neurons.
Acta Pharm Sin, 1997;32:406-410
6 Tiegs G, Wolter M, Wendel A. Tumor necrosis factor is a terminal mediator in galactosamine/endotoxin-induced heatitis in
mice. Biochem Pharmacol, 1989;38:627-631
7 Lehmann V, Freudenberg MA, Galanos C. Lethal toxicity of lipopolysaccharide and tumor necrosis factor in normal
and D-galactosamine-treated mice. J Exo Med, 1987;165:657-663, 百拇医药(王国燕1 邓学端1 何永蜀1 陈 静2 后文静1 陈林芳3)
2云南省天然药物药理重点实验室 云南省昆明市 650031
3云南省药品检验所 云南省昆明市 650011
本课题由云南省重点学科科研基金资助，No. KY-98012
项目负责人 王国燕昆明医学院医学基础部药理教研室 云南省昆明市 650031
Tel. 0086-871-5328883
Email.gywang@public.km.yn.cn
, http://www.100md.com
收稿日期 2000-05-12 接受日期 2000-05-16
Subject headings ginseng; lipopolysaccharides; amino sugars; hepatitis; nitric oxide synthase; saponins; serodiagnosis; mice
主题词 人参；脂多糖类；氨基糖类；肝炎；一氧化氮合酶；皂苷类；血清诊断；小鼠
王国燕, 邓学端, 何永蜀, 陈静, 后文静, 陈林芳. 人参皂甙Rg1对脂多糖/D-氨基半乳糖诱导的小鼠肝炎及一氧化氮合酶的影响.
世界华人消化杂志，2000；8(11)：1317
, 百拇医药
脂多糖(LPS)能诱导D-氨基半乳糖致敏小鼠坏死性肝炎. LPS的毒性是因其作用于靶细胞引起内源性递质释放而触发的. 一氧化氮(NO)作为一种信使或调质，它既有利于机体的自身免疫防御能力，又具有潜在的毒性. NO的作用和信使功能主要受一氧化氮合酶(NOS)调控. LPS作用于小鼠枯否细胞和巨噬细胞而产生大量的NO是其诱导病理性肝损伤的重要递质[1-3]. 三七是一种名贵中药材用于止血、强心和消炎等
[4，5]. 人参皂甙Rg1是从三七中分离提取的一种主要活性成分. 现报道人参皂甙Rg1对LPS诱导D-氨基半乳糖致敏小鼠坏死性肝炎和血清一氧化氮、一氧化氮合酶及谷丙转氨酶活性影响.
1 材料和方法
1.1 材料 Rg1, 纯度为96.5%的淡黄色结晶粉末，由昆明医学院化学教研室提供. LPS购于美国Sigma公司. D-GaIL，NO，NOS和ALT试剂盒购自于南京聚力生物医学工程研究所. ICR小鼠雌雄兼用，质量18g～22g，由云南省天然药物药理重点实验室提供，合格证号：9806.
, 百拇医药
1.2 方法 小鼠致死性肝炎模型：ICR小鼠ip D-GaIN(700mg·kg-1)和LPS(1mg·kg-1)后24h摘眼球取血，用于NO, NOS和ALT活性测定[6]. 肝脏组织用10mL·L-1的福尔马林固定，石蜡包埋切片后苏木精和四溴荧光素染色作组织学检查. 为观察Rg1对坏死性肝炎的影响，小鼠预先灌胃给予Rg1(0, 30, 90, 180mg·kg-1·d-1,连续7d). 于末次灌胃后1h D-GaIN和LPS. 血清NO和NOS检测采用比色法.
统计学处理 计量资料用x±s表示，并与对照组相比较.
2 结果
, 百拇医药
2.1 Rg1对小鼠血清ALT活性和死亡率的影响 小鼠ip LPS 1μg·kg-1和D-GaIN 700mg·kg-1后，血清ALT水平高达13336nkat·L-1，死亡率高于50%，肝组织出现大片状出血性坏死. Rg1于ip LPS和D-GaIN前给予Rg1 30, 90, 180mg·kg-1可明显降低血清ALT水平并降低小鼠的死亡率(表1).
2.2 Rg1对小鼠血清NO和NOS的影响 小鼠ip LPS 1μg·kg-1和D-GaIN 700mg·kg-1后，血清NO和NOS含量分别为0.55±0.20和0.43±0.09(A540). 在ip LPS 1μg·kg-1和D-GalN 700mg·kg-1之前给予Rg1 90, 180mg·kg-1可明显降低血清NO含量，Rg1 30, 90mg·kg-1还可降低血清NOS的活性(表2).
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表1 Rg1对LPS和D-GaIN诱导肝炎小鼠的血清ALT活性和死亡率的影响(n=28,x±s)
| Rg1 (mg·kg-1) | Plasma ALT(nkat·L-1) | 死亡率(%) |
| 0 | 14386±4135 | 54 |
| 30 | 8933±6136a | 32 |
| 90 | 7355±3067b | 25 |
| 180 | 8146±4962b | 18 |
aP<0.05, bP<0.01 vs 0 control.
, http://www.100md.com
表2 Rg1对LPS和D-GaIN诱导肝炎小鼠血清NO和NOS活性影响(n=12, x±s)
| Rg1 (mg·kg-1) | NO (A540) | NOS (A540) |
| 0 | 0.55±0.20 | 0.43±0.09 |
| 30 | 0.39±0.20 | 0.32±0.08b |
| 90 | 0.36±0.10b | 0.33±0.09a |
| 180 | 0.37±0.14a | 0.35±0.10 |
, 百拇医药
aP<0.05, bP<0.01 vs 0 control.
3 讨论
本研究表明LPS具有致死性毒性并可诱导D-GalN致敏小鼠肝脏大片状出血性坏死，该结果与文献报道一致[6，7]. 预先给予Rg1可减轻D-GalN致敏小鼠对LPS的致死性毒性的反应，防止肝组织进行性损伤. Rg1能降低LPS和D-GaIN所致肝炎小鼠血清NO和NOS活性. 已证实，大量产生的NO是LPS诱导病理性肝损伤的主要介导者，而Rg1对NO的产生进行抑制，可能是其对抗LPS肝毒性的机制所在. 动物和人体研究已表明特异性的NOS合酶抑制剂可以用于各种与NO大量产生有关的疾病的治疗.
总之，我们目前的研究结果表明，人参皂甙Rg1对LPS/D-GaIN引起的致死性小鼠肝炎具有一定的保护作用，并抑制LPS诱导的NO产生，而NO在LPS所介导的反应中起了至关重要的作用.
, http://www.100md.com
致谢 对昆明医学院化学教研室詹尔益和杨荫康两位教授的支持表示感谢!
4 参考文献
1 Satre T, Gundersen Y, Thiemermann C, Lilleaasen P, Aasen AO. Aminoethyl-isothiourea, a selective inhibitor of inducible
nitric-oxide synthase activity, improves liver circulation and oxygen metabolism in a porcine model of endotoxemia.
, http://www.100md.com
Shock, 1998;9:109-115
2 Moncada S, Palmer RMJ, Higgs EA. Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology. Pharmacol Rev,1991;43:109-142
3 Geller LA, lowenstein CJ, Shapiro RA, Nussler AK, Silvio MD, Wang SC. Molecular cloning and expression of inducible
nitric-oxide synthase from human hepatocytes. Proc Natl Acad Sci USA, 1993;90:3491-3495
, 百拇医药 4 Hua G, Fengzhen W, Eric JL, Melvin DT. Immunostimulating Polysaccharides from Panax notoginseng. Pharm Res,1996;13:1196-1200
5 Li JQ, Zhang XG, Zhang JT. Study on the anti-apoptotic mechanism of Ginsenoside Rg1 in cultured cortical neurons.
Acta Pharm Sin, 1997;32:406-410
6 Tiegs G, Wolter M, Wendel A. Tumor necrosis factor is a terminal mediator in galactosamine/endotoxin-induced heatitis in
mice. Biochem Pharmacol, 1989;38:627-631
7 Lehmann V, Freudenberg MA, Galanos C. Lethal toxicity of lipopolysaccharide and tumor necrosis factor in normal
and D-galactosamine-treated mice. J Exo Med, 1987;165:657-663, 百拇医药(王国燕1 邓学端1 何永蜀1 陈 静2 后文静1 陈林芳3)