食管癌p53和PCNA的表达与局部体液免疫
新乡医学院第一附属医院 河南省卫辉市 453100
项目负责人 赵光明新乡医学院第一附属医院 河南省卫辉市 453100
收稿日期 2001-02-20 接受日期 2001-03-18
主题词 食管肿瘤/代谢；食管肿瘤/免疫学；蛋白质p53/生物合成；蛋白质p53/分析；增殖细胞核抗原/生物合成；增殖细胞核抗原/分析；IGG/分析；预后
赵光明, 赵卫星, 和瑞芝, 苏蔚, 张丽娟. 食管癌p53和PCNA的表达与局部体液免疫. 世界华人消化杂志，2001；9(6)：714-715
食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一[1]，尤其以我国豫北太行山一带为高发病区[2-8]. 食管癌的临床治疗虽有进步，但效果仍然令人沮丧，5年生存率不到10%，严重威协着人民的生命与健康[9-15]. 因此，预防发病、发病后及早治疗、检测局部免疫及基因表达水平、控制癌肿的发展、延长患者的生存期将是21世纪食管癌研究的重点[16-20].
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 收集新乡医学院一附院病理科1985/1997年食管癌标本80例，标本经40g·L-1中性甲醛固定，石蜡包埋，连续切片4μm厚，HE染色. 观察组织切片根据食管癌浸润深度分为浸润至食管粘膜下层以内和肌层至外膜两组；根据局部淋巴结转移情况分为淋巴结转移阳性和淋巴结转移阴性两组.
1.2 方法 采用SP法作免疫组化染色，所用试剂盒、DAB显色剂及抗P53, PCNA蛋白均购自北京中山生物技术有限公司，每批实验均设阴阳性组作对照分析，P53. PCNA均以细胞核着色呈棕黄色为阳性细胞(+)，否则为阴性细胞(-). 采用直接免疫荧光染色法，异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗人IgG，由北京生物制品研究所提供. 所染切片在OLYMPUS-BHF型荧光显微镜下观察结果，细胞轮廓清楚，呈亮绿荧光的细胞作为阳性细胞. 每张切片在荧光显微镜下随机观察10个视野，无荧光着色细胞为阴性(-)，具有荧光着色细胞的为阳性(+).
, 百拇医药
统计学分析 采用χ2及相关性检验.
2 结果
2.1 p53表达与IgG表达的相关性 38例p53表达阳性的病例中，只有15例IgG阳性表达(39%), p53阴性的42例中，IgG阳性表达的有30例(71%)，二者比较有显著性差异(χ2=8.278, P<0.05，表1)；同时p53阳性IgG阴性的23例中，侵及肌层以外者为19例(83%)；淋巴结发生转移者高达20例(87%)；而p53阴性IgG阳性的30例中，侵及肌层以外者仅3例(10%)，发生淋巴结转移的仅为4例(13%). 两者之间具有显著性差异(P<0.01，表2).
2.2 PCNA表达与IgG表达的相关性 PCNA阳性的41例中，IgG阳性的16例(39%)，而PCNA阴性的39例中IgG阳性表达的为29例
, 百拇医药
(74%)，两者之间具有显著性差异(χ2=10.140，P<0.01)，PCNA阳性IgG阴性的25例中侵及肌层以外者达20例(80%)，淋巴结发生转移者高达23例(92%)PCNA表达阴性，IgG阳性的29例中，侵及肌层以外者仅4例(14%)，发生淋巴结转移的仅为3例(10%)，两者之间具有显著性差异(P<0.01，表1，2).
表1 食管癌浸润癌间质IgG表达与p53,PCNA表达的关系
, 百拇医药
表2 食管癌p53, PCNA阳性表达及IgG阴性与浸润深度及淋巴结转移的关系
, 百拇医药
3 讨论
p53是一种抑癌基因[21]. 有野生型和突变型两种亚型，免疫组化所检测到的主要为突变型. 正常细胞中野生型P53蛋白对细胞的增殖有重要的调节作用，它可以抑制癌基因转化的细胞的生长，甚至可以使肿瘤细胞的肿瘤性生长特性消失[22,23];而突变型p53基因蛋白不但失去对细胞增殖的抑制，而且部分出现与癌基因蛋白类似的促细胞生长作用；亦即当它与不同的蛋白结合时所产生的生物功能不同，具有转录调控，参与细胞癌变或染色体损伤修复及细胞凋亡[24,25]. 本文中P53蛋白的阳性表达与浸润深度和淋巴结转移呈正相关，说明P53蛋白过度表达对癌细胞增殖的抑制作用减弱，起到了促进癌细胞的浸润和扩散，则预后不良. PCNA(Proliferating cell nuclear antigen, 增殖细胞核抗原)是近年发现的原位检测细胞增殖活性的新型指标，表达于细胞周期的G1期，S期达高峰，G2-M期下降，其变化能反映细胞的增殖活性[26-29]. 本文中PCNA的阳性表达与淋巴结转移与浸润深度有关提示肿瘤细胞增殖活性越高，肿瘤细胞的侵袭力越强. 亦易引起淋巴结转移，同时p53基因蛋白表达阳性的癌组织的PCNA表达明显高于p53阴性的癌组织；证实了突变型p53可促进细胞生长增殖作用，因此可认为p53基因蛋白与PCNA同时高表达的肿瘤易扩散转移，PCNA是判断细胞增殖及恶性程度的一项指标. 抗体产生细胞即用免疫细胞化学方法对组织切片进行染色，分泌相应免疫球蛋白的细胞，这些细胞胞质丰富，明亮着色，多为幼浆细胞、过度型浆细胞和典型浆细胞，它们均有合成免疫球蛋白的功能，故统称为免疫球蛋白产生细胞(immunoglobulin-producing cell)即抗体产生细胞. 在肿瘤组织中不与癌细胞直接接触，主要依靠其产生的抗肿瘤抗体参与体液免疫[30-31]，从而达到阻止肿瘤生长的目的.
, 百拇医药
我们发现，p53, PCNA的表达与IgG产生细胞的表达呈负相关，即IgG在组织中表达越高，p53, PCNA表达越低；反之亦然，并且IgG阳性而p53, PCNA阴性的病例，淋巴结转移及肿瘤浸润程度下降，表明IgG的产生可抑制p53基因的突变和降低PCNA的活性，从而达到抑制肿瘤细胞肿瘤性生长的特性，减少淋巴结转移、减轻肿瘤浸润程度. 综上所述可说明， p53基因蛋白、PCNA, IgG产生细胞的联合检测可作为评估食管癌患者预后及临床治疗方面具有积极指导意义的指标.
4 参考文献
1 同济医科大学病理学教研室主编. 外科病理学. 第2版. 湖北：湖北科学技术出版社，1999：84-91
2 朱向会, 杨中华, 杨琳. 胃癌、食管癌发生与吸烟的关系及临床影象学研究. 世界华人消化杂志，2000;8(特刊8):43
, 百拇医药
3 潘琳娜, 赵洪清. 反流性食管炎的病因及食管pH测定和X线检查的诊断价值. 世界华人消化杂志，2000;8:1135-1136
4 吕宗舜, 黄象谦. 食管癌的诊断进展. 世界华人消化杂志，2000;8:1017-1019
5 王东旭, 李伟. 食管癌病因学进展. 世界华人消化杂志，2000;8:1029-1030
6 李健, 赵治国, 冯常炜, 周琦, 王立东. 中国河南林州市食管鳞状细胞癌组织中Ras蛋白的表达. 世界华人消化杂志, 1999;7:714
7 邹建湘, 王立东, Xing EP, Nie Yan, 白永敏, Yang CS. 河南食管癌高发区居民食管癌组织p15INK4b和p16INK4a基因变化的研究.
, 百拇医药 世界华人消化杂志, 1999;7:272-273
8 王建华, 杨道科, 吴维平. 多种肿瘤标志物在食管癌中的血清学测定. 华人消化杂志, 1998;6:573
9 刘心娟, 王帮茂. 食管癌的生物治疗. 世界华人消化杂志，2000;8:1027-1029
10 林军, 邓长生, 孙洁, 周燕, 熊平, 汪亚平. 湖北食管癌HLA-DQB1的基因多态性. 世界华人消化杂志，2000;8:965-968
11 方桢. 食管癌的内镜治疗. 世界华人消化杂志，2000;8:1026-1027
12 李方儒. 食管癌的放射治疗和化学治疗. 世界华人消化杂志，2000;8:1024-1026
, http://www.100md.com
13 郑光礼. 食管癌的序列内镜诊断. 世界华人消化杂志，2000;8:1019-1020
14 王苑本, 余国行, 高友芝. 食管癌的治疗方法和实施原则. 世界华人消化杂志，2000;8:1021-1023
15 陈克能, 徐光炜. 食管癌的诊断和治疗. 世界华人消化杂志， 2000;8:196-202
16 任占平，石吉，陈蔚，唐德艳，李俊杰，戴文斌. 食管癌中HPV16, 18感染与多癌基因产物表达的研究.
中国肿瘤临床，1999；12：905-907
17 赵璐, 施开炯, 王衡. 食管癌根治术后预防性放疗的临床研究. 世界华人消化杂志，2000;8(特刊8):17
, 百拇医药
18 谭黎杰, 蒋伟, 张农, 张秀荣, 仇德惠. 食管鳞癌及不典型增生组织Fas/FasL的表达. 世界华人消化杂志，2001；9：15-19
19 李铭, 王灏, 郁宝铭, 郑民华. p53基因突变和肿瘤标志物对大肠癌患者预后的影响. 世界华人消化杂志, 1999;7:425-426
20 和瑞芝，苏蔚，房成，赵卫星. 食管癌变过程中抗体产生细胞的免疫组化研究. 新乡医学院学报，2000；5：315-317
21 纪小龙，施作霖. 诊断免疫组织化学. 北京：军事医学科学出版社，1997：62-66
22 高华, 袁媛, 吴烨秋, 王兰, 董明, 张忠. 根除Hp对增殖细胞核抗原P53蛋白表达的影响. 世界华人消化杂志, 1999;7:995-996
, 百拇医药
23 Shi ST, Yang GY, Wang LD. Role of p53 gene mutations in human esophageal carcinogenesis. Results from immunohistochemical
and mutation analyses of carcinomas and nearby non-cancerous lesions. Carcinogenesis, 1999;20:591-597
24 赵光明，张龙功，赵卫星，和瑞芝. P53和c-myc蛋白在食管癌及癌前病变中的表达意义. 新乡医学院学报，2001；1：10-11
25 郭小红，罗荣，顾依群，李宁，高子芬. P53蛋白和增殖细胞核抗原在非霍奇金淋巴瘤中的表达及意义. 中国肿瘤临床，1999；9：650-653
, http://www.100md.com
26 黄杰雄，黄致治. 增殖细胞核抗原的研究进展. 国外医学生理病理学科与临床分册，1994；1：9-11
27 向明亮. PCNA、P53的过度表达与喉鳞癌预后的关系. 肿瘤防治研究，1998；5：361-362
28 刘复兴. 食管癌前后阶段病变PCNA表达的研究. 肿瘤防治研究，1998；2：102-103
29 Loachim HL. The immune response at the tumor site in lung carcinoma. Cancer, 1991;38:2296-2302
30 张霞, 耿明, 王要军, 曹永成. 表皮生长因子受体和PCNA在食管癌及癌前病变组织中的表达意义. 华人消化杂志, 1998;6:229-230
31 冯新海, 刘锟, 王忠华, 邹赛英, 唐新萍. PCNA在食管鳞癌中的表达及其意义. 世界华人消化杂志, 1999;7:190, http://www.100md.com(赵光明 赵卫星 和瑞芝 苏 蔚 张丽娟)
项目负责人 赵光明新乡医学院第一附属医院 河南省卫辉市 453100
收稿日期 2001-02-20 接受日期 2001-03-18
主题词 食管肿瘤/代谢；食管肿瘤/免疫学；蛋白质p53/生物合成；蛋白质p53/分析；增殖细胞核抗原/生物合成；增殖细胞核抗原/分析；IGG/分析；预后
赵光明, 赵卫星, 和瑞芝, 苏蔚, 张丽娟. 食管癌p53和PCNA的表达与局部体液免疫. 世界华人消化杂志，2001；9(6)：714-715
食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一[1]，尤其以我国豫北太行山一带为高发病区[2-8]. 食管癌的临床治疗虽有进步，但效果仍然令人沮丧，5年生存率不到10%，严重威协着人民的生命与健康[9-15]. 因此，预防发病、发病后及早治疗、检测局部免疫及基因表达水平、控制癌肿的发展、延长患者的生存期将是21世纪食管癌研究的重点[16-20].
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 收集新乡医学院一附院病理科1985/1997年食管癌标本80例，标本经40g·L-1中性甲醛固定，石蜡包埋，连续切片4μm厚，HE染色. 观察组织切片根据食管癌浸润深度分为浸润至食管粘膜下层以内和肌层至外膜两组；根据局部淋巴结转移情况分为淋巴结转移阳性和淋巴结转移阴性两组.
1.2 方法 采用SP法作免疫组化染色，所用试剂盒、DAB显色剂及抗P53, PCNA蛋白均购自北京中山生物技术有限公司，每批实验均设阴阳性组作对照分析，P53. PCNA均以细胞核着色呈棕黄色为阳性细胞(+)，否则为阴性细胞(-). 采用直接免疫荧光染色法，异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗人IgG，由北京生物制品研究所提供. 所染切片在OLYMPUS-BHF型荧光显微镜下观察结果，细胞轮廓清楚，呈亮绿荧光的细胞作为阳性细胞. 每张切片在荧光显微镜下随机观察10个视野，无荧光着色细胞为阴性(-)，具有荧光着色细胞的为阳性(+).
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统计学分析 采用χ2及相关性检验.
2 结果
2.1 p53表达与IgG表达的相关性 38例p53表达阳性的病例中，只有15例IgG阳性表达(39%), p53阴性的42例中，IgG阳性表达的有30例(71%)，二者比较有显著性差异(χ2=8.278, P<0.05，表1)；同时p53阳性IgG阴性的23例中，侵及肌层以外者为19例(83%)；淋巴结发生转移者高达20例(87%)；而p53阴性IgG阳性的30例中，侵及肌层以外者仅3例(10%)，发生淋巴结转移的仅为4例(13%). 两者之间具有显著性差异(P<0.01，表2).
2.2 PCNA表达与IgG表达的相关性 PCNA阳性的41例中，IgG阳性的16例(39%)，而PCNA阴性的39例中IgG阳性表达的为29例
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(74%)，两者之间具有显著性差异(χ2=10.140，P<0.01)，PCNA阳性IgG阴性的25例中侵及肌层以外者达20例(80%)，淋巴结发生转移者高达23例(92%)PCNA表达阴性，IgG阳性的29例中，侵及肌层以外者仅4例(14%)，发生淋巴结转移的仅为3例(10%)，两者之间具有显著性差异(P<0.01，表1，2).
表1 食管癌浸润癌间质IgG表达与p53,PCNA表达的关系
| IgG | p53 | P | PCNA | P | ||
| + | - | + | - | |||
| + | 15 | 30 | <0.05 | 16 | 29 | <0.01 |
| - | 23 | 12 | 25 | 10 |
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表2 食管癌p53, PCNA阳性表达及IgG阴性与浸润深度及淋巴结转移的关系
| 指标 | n | p53(+) | p53(-) | P | PCNA(+) | IgG(-) | P |
| IgG(-) | IgG(+) | PCNA(-) | IgG(+) | ||||
| 浸润深度 | |||||||
| 粘膜下层 | 33 | 4 | 27 | <0.01 | 5 | 25 | <0.01 |
| 肌层 | 47 | 19 | 3 | 20 | 4 | ||
| 淋巴转移 | |||||||
| 阴性 | 37 | 3 | 26 | <0.01 | 2 | 26 | <0.01 |
| 阳性 | 43 | 20 | 4 | 23 | 3 |
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3 讨论
p53是一种抑癌基因[21]. 有野生型和突变型两种亚型，免疫组化所检测到的主要为突变型. 正常细胞中野生型P53蛋白对细胞的增殖有重要的调节作用，它可以抑制癌基因转化的细胞的生长，甚至可以使肿瘤细胞的肿瘤性生长特性消失[22,23];而突变型p53基因蛋白不但失去对细胞增殖的抑制，而且部分出现与癌基因蛋白类似的促细胞生长作用；亦即当它与不同的蛋白结合时所产生的生物功能不同，具有转录调控，参与细胞癌变或染色体损伤修复及细胞凋亡[24,25]. 本文中P53蛋白的阳性表达与浸润深度和淋巴结转移呈正相关，说明P53蛋白过度表达对癌细胞增殖的抑制作用减弱，起到了促进癌细胞的浸润和扩散，则预后不良. PCNA(Proliferating cell nuclear antigen, 增殖细胞核抗原)是近年发现的原位检测细胞增殖活性的新型指标，表达于细胞周期的G1期，S期达高峰，G2-M期下降，其变化能反映细胞的增殖活性[26-29]. 本文中PCNA的阳性表达与淋巴结转移与浸润深度有关提示肿瘤细胞增殖活性越高，肿瘤细胞的侵袭力越强. 亦易引起淋巴结转移，同时p53基因蛋白表达阳性的癌组织的PCNA表达明显高于p53阴性的癌组织；证实了突变型p53可促进细胞生长增殖作用，因此可认为p53基因蛋白与PCNA同时高表达的肿瘤易扩散转移，PCNA是判断细胞增殖及恶性程度的一项指标. 抗体产生细胞即用免疫细胞化学方法对组织切片进行染色，分泌相应免疫球蛋白的细胞，这些细胞胞质丰富，明亮着色，多为幼浆细胞、过度型浆细胞和典型浆细胞，它们均有合成免疫球蛋白的功能，故统称为免疫球蛋白产生细胞(immunoglobulin-producing cell)即抗体产生细胞. 在肿瘤组织中不与癌细胞直接接触，主要依靠其产生的抗肿瘤抗体参与体液免疫[30-31]，从而达到阻止肿瘤生长的目的.
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我们发现，p53, PCNA的表达与IgG产生细胞的表达呈负相关，即IgG在组织中表达越高，p53, PCNA表达越低；反之亦然，并且IgG阳性而p53, PCNA阴性的病例，淋巴结转移及肿瘤浸润程度下降，表明IgG的产生可抑制p53基因的突变和降低PCNA的活性，从而达到抑制肿瘤细胞肿瘤性生长的特性，减少淋巴结转移、减轻肿瘤浸润程度. 综上所述可说明， p53基因蛋白、PCNA, IgG产生细胞的联合检测可作为评估食管癌患者预后及临床治疗方面具有积极指导意义的指标.
4 参考文献
1 同济医科大学病理学教研室主编. 外科病理学. 第2版. 湖北：湖北科学技术出版社，1999：84-91
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6 李健, 赵治国, 冯常炜, 周琦, 王立东. 中国河南林州市食管鳞状细胞癌组织中Ras蛋白的表达. 世界华人消化杂志, 1999;7:714
7 邹建湘, 王立东, Xing EP, Nie Yan, 白永敏, Yang CS. 河南食管癌高发区居民食管癌组织p15INK4b和p16INK4a基因变化的研究.
, 百拇医药 世界华人消化杂志, 1999;7:272-273
8 王建华, 杨道科, 吴维平. 多种肿瘤标志物在食管癌中的血清学测定. 华人消化杂志, 1998;6:573
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10 林军, 邓长生, 孙洁, 周燕, 熊平, 汪亚平. 湖北食管癌HLA-DQB1的基因多态性. 世界华人消化杂志，2000;8:965-968
11 方桢. 食管癌的内镜治疗. 世界华人消化杂志，2000;8:1026-1027
12 李方儒. 食管癌的放射治疗和化学治疗. 世界华人消化杂志，2000;8:1024-1026
, http://www.100md.com
13 郑光礼. 食管癌的序列内镜诊断. 世界华人消化杂志，2000;8:1019-1020
14 王苑本, 余国行, 高友芝. 食管癌的治疗方法和实施原则. 世界华人消化杂志，2000;8:1021-1023
15 陈克能, 徐光炜. 食管癌的诊断和治疗. 世界华人消化杂志， 2000;8:196-202
16 任占平，石吉，陈蔚，唐德艳，李俊杰，戴文斌. 食管癌中HPV16, 18感染与多癌基因产物表达的研究.
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17 赵璐, 施开炯, 王衡. 食管癌根治术后预防性放疗的临床研究. 世界华人消化杂志，2000;8(特刊8):17
, 百拇医药
18 谭黎杰, 蒋伟, 张农, 张秀荣, 仇德惠. 食管鳞癌及不典型增生组织Fas/FasL的表达. 世界华人消化杂志，2001；9：15-19
19 李铭, 王灏, 郁宝铭, 郑民华. p53基因突变和肿瘤标志物对大肠癌患者预后的影响. 世界华人消化杂志, 1999;7:425-426
20 和瑞芝，苏蔚，房成，赵卫星. 食管癌变过程中抗体产生细胞的免疫组化研究. 新乡医学院学报，2000；5：315-317
21 纪小龙，施作霖. 诊断免疫组织化学. 北京：军事医学科学出版社，1997：62-66
22 高华, 袁媛, 吴烨秋, 王兰, 董明, 张忠. 根除Hp对增殖细胞核抗原P53蛋白表达的影响. 世界华人消化杂志, 1999;7:995-996
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23 Shi ST, Yang GY, Wang LD. Role of p53 gene mutations in human esophageal carcinogenesis. Results from immunohistochemical
and mutation analyses of carcinomas and nearby non-cancerous lesions. Carcinogenesis, 1999;20:591-597
24 赵光明，张龙功，赵卫星，和瑞芝. P53和c-myc蛋白在食管癌及癌前病变中的表达意义. 新乡医学院学报，2001；1：10-11
25 郭小红，罗荣，顾依群，李宁，高子芬. P53蛋白和增殖细胞核抗原在非霍奇金淋巴瘤中的表达及意义. 中国肿瘤临床，1999；9：650-653
, http://www.100md.com
26 黄杰雄，黄致治. 增殖细胞核抗原的研究进展. 国外医学生理病理学科与临床分册，1994；1：9-11
27 向明亮. PCNA、P53的过度表达与喉鳞癌预后的关系. 肿瘤防治研究，1998；5：361-362
28 刘复兴. 食管癌前后阶段病变PCNA表达的研究. 肿瘤防治研究，1998；2：102-103
29 Loachim HL. The immune response at the tumor site in lung carcinoma. Cancer, 1991;38:2296-2302
30 张霞, 耿明, 王要军, 曹永成. 表皮生长因子受体和PCNA在食管癌及癌前病变组织中的表达意义. 华人消化杂志, 1998;6:229-230
31 冯新海, 刘锟, 王忠华, 邹赛英, 唐新萍. PCNA在食管鳞癌中的表达及其意义. 世界华人消化杂志, 1999;7:190, http://www.100md.com(赵光明 赵卫星 和瑞芝 苏 蔚 张丽娟)