清肝饮对大鼠肝纤维化N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性的影响
郭传勇，申振宇，钟敏章，钱珍华，同济大学附属铁路医院消化科 上海市 200072
项目负责人 郭传勇，200072，上海市，同济大学附属铁路医院消化科. guochuanyong@hotmail
基金项目:铁道部科学基金课题(No：B96029)
电话：021-56770588转3504
收稿日期 2001-08-26 接受日期 2001-09-06
郭传勇，申振宇，钟敏章，钱珍华.清肝饮对大鼠肝纤维化N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性的影响. 世界华人消化杂志 2002;10(2):237-238
0 引言各种慢性肝病的主要病理转归为肝硬化，肝纤维化则是其前期病变，能否阻止或逆转肝纤维 化是治疗各种慢性肝病的关键[1-6].肝纤维化是一种异常的修复过程，为细胞外 基质主要是胶原成份异常生成和积累的结果[7-11].清肝饮是由黄芪、虎杖、赤芍 和丹参等组成的纯中药复方制剂，在临床上对慢性肝炎肝纤维化有一定的疗效，对成纤维细胞和Ito细胞具有显著的抑制DNA合成和细胞增生作用[12-16]. 为了进一步阐明清 肝饮治疗肝纤维化的作用以及作用机制，我们用CCl4造成大鼠肝纤维化，并分别在损伤的 早期和晚期口服清肝饮，通过对其肝脏N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(NAG)和透明质酸( HA)的检测，进一步观察其对肝纤维化的影响及其作用机制.
1 材料和方法
1.1 材料 精制茶油配制400mL.L-1CCl4；HA分析药盒 ，第二军医大学长征医院提供；NAG基质溶液，取对硝基苯N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷(PN P-NAG；上海科技大学生物工程系产品)171.2mg，用pH4.6柠檬酸缓冲液溶解并稀释至100ml 制成；SCR20BA型低温高速离心机，日立公司产品；FMJ-182型放射免疫γ计数器，中科院 上海原子核研究所日环仪器厂产品；200A型双光束分光光度计，日立公司产品.Wistar♂大鼠48只，重量(200±20)g，由中国科学院上海实验动物中心提供.随机分成6组(n＝8)，即早期及晚期正常对照组、早期及晚期模型组和早期及晚期治疗组.造模组采用CCl42.5 mL.Kg-1(首剂加倍)，每隔3d一次，共15次.正常对照组则用同样方法注射等量的精 制茶油.清肝饮由黄芪、虎杖、赤芍和丹参等组方的水煎醇提法制取，每毫升相当于10mg生 药(粗品).早期治疗组于第2次注射CCl4的同时，用清肝饮1mL灌胃，每日1次，共42次；造 型对照组和正常对照组用等量蒸馏水按同样条件灌胃.晚期治疗组的给药则在最后一次注射C Cl4的同时，其给药方法、条件和时间及对照组的处理均同早期治疗组.动物处死后，新鲜肝组织立即浸入40g.L-1甲醛，经石蜡包埋，切片作HE染色观察组织病理变化，另作Masson三色胶原染色，按如下半定量标准判定胶原纤维增生程度：(-)示正常肝组织，无胶原增生；(+)示胶原明显增生，从汇管区或中央静脉呈星状向外延伸，无纤维隔形成；(2+)示胶原明显增多，形成彼此不连接的不完全性纤维隔；(3+)示胶原细胞增多形成 完全的相互连接的纤维隔分隔肝实质.
1.2 方法1.2.1 肝组织N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性测定 取肝组织小块用冷细胞提取液洗2次，至无色或粉红色.在滤纸上吸干水分后称量1.0g，加 提取液6.0mL，用电动匀浆器置冰水中匀浆，1000r.min-1，上下移动10次，将提取 液加至10mL.再取肝匀浆6mL转入10mL离心管中，用低温高速离心机700g离心10min，收集沉淀物为细胞器.再取上清10000g离心10min，收集沉淀物为线粒体.继续取其上清20000g离心10min，收集沉淀物为溶酶体.再继续取其上清105000g离心60min，收集沉淀物为微粒体.所剩上清为胞质.取各细胞器成份液20μL，加预温(37℃)的NAG基质溶液1mL(空白管加硼酸缓冲液4mL)，37℃水溶10min后取出，加硼酸缓冲液4mL(空白管加NAG基质液4mL)，混匀终止酶反应，匀浆液需离心(2000g)10min后取上清液.用空白管凋零，在波长400nm，光径1cm条件下用分光光度计比色.根据标准曲线查酶的活性，单位为nKat.g-1.
1.2.2 肝组织透明质酸测定 取肝组织小块，经生理盐 水充分洗涤后，在滤纸上吸干表面水分后称量1.0g，加消化液5mL消化，用聚四氯乙烯匀浆器(置冰浴中)匀浆，1000r.min-1上下10次(光镜下观察95%以上细胞均已破碎).放置60℃水浴24h，再加新鲜消化液1.0mL，继续水浴24h.加冰乙酸1mL，置4℃冰箱3h以终止消化.调整pH7.0～7.5，加蒸馏水至10mL，离心(700g)10min，取上清液2ml，加蒸馏水至5mL.用FMJ-182型放射免疫γ计数器测定各管放射性(cpm)，并计算B/Bo=各管cpm/零管cpm×100%.以HA标准浓度为横坐标，相应的B/Bo为纵坐标作标准曲线图，由标准曲线查得各样本的HA浓度，再乘以0.5.
统计学处理 计量资料用t检验，使用Statpal医用软件包； 计数资料用Ridit检验法.
2 结果晚期造型组和晚期治疗组大鼠各死亡1只，其余各组大鼠均存活.其中，造型组大鼠肝肿大，肝表面结节形成率显著高于清肝饮治疗组(P<0.05)，治疗组与正常对照组则无显著差异.另外，正常组大鼠肝脏无异常病变；早期造型组大鼠肝小叶失去正常结构，肝板排列紊乱 ，肝细胞普遍变性，大多数为脂肪变性，坏死及炎症明显，汇管区纤维组织增生，形成纤维分割包绕肝小叶；晚期造型组可见肝细胞再生及假小叶形成；而清肝饮治疗组早期细胞变性程度及晚期纤维结缔组织增生程度明显减轻.
2.1 肝总NAG活性和HA含量 与造形对照组比较，清肝 饮的早期和晚期治疗组HA含量和NAG活性均明显降低(P<0.05，表1).
表1 清肝饮对实验性肝纤维化肝总NAG活性和HA含量的影响
aP<0.05 vs 正常组; cP<0.05 vs 造型组.
2.2 肝纤维化细胞器的NAG活性的影响 与造型组比较 ，清肝饮治疗后肝纤维化大鼠肝细胞器中溶酶体和线粒体的NAG显著下降(P<0.01，表2 )，而细胞核和微粒体的NAG活性无明显变化(P>0.05).
表2 清肝饮对大鼠肝纤维化细胞器的NAG活性的影响(nkat. g-1)
bP<0.05 vs 正常组; dP<0.05 vs 造型组.
3 讨论NAG活性的升降和肝纤维化程度有直接关系.而且，肝细胞器中NAG的变化较总NAG的变化更敏 感.实验发现，NAG改变主要集中在线粒体和溶酶体这两个多酶系统.清肝饮治疗后肝纤维化大鼠肝细胞器中溶酶体和线粒体的NAG显著下降，提示清肝饮能降低肝纤维化的活跃和进展程度.另外，HA参与形成蛋白聚糖多聚体，是结缔组织基质的重要成分，具有维持组织形态、体积和保持抗压缩性及张力等效应，并影响细胞迁移和细胞分化.业已证明，HA是反映肝内皮细胞功能和肝纤维化程度的有实用价值的新指标，其敏感性和准确性均十分可靠[ 17-19].实验发现，无论清肝饮早期治疗组还是晚期治疗组，与对照组比较，其HA含量 均有明显减少(P<0.05).提示清肝饮对大鼠肝纤维化时的HA含量有明显的降低作用.我们以前的实验证实了清肝饮对肝脏内产生胶原的主要细胞贮脂细胞的增生有明显抑制作用 ，说明清肝饮的抗纤维化机制之一是通过贮脂细胞的增生而实现的[12-16].当然 ，体内的情况不象体外培养如此简单，各种细胞与细胞之间、细胞与细胞外基质之间的相互 影响和调节亦错综复杂[20-31]，故不可简单地将体外实验类推于整体水平.因此 ，本实验又进一步从病理组织改变上反映了清肝饮抗肝纤维化的良好效果，较完整地说明了 清肝饮对肝纤维化的影响.结果提示清肝饮具有延缓肝纤维化进程，减轻肝纤维化程度的作 用.
4 参考文献1 Friedman SL. Molecular mechanisms of hepatic fibrosis and principles of therapy. J Gastroenterol 1997;32:424-427
2 蒋树林，姚希贤，孙玉凤.肝纤维化的治疗.世界华人消化杂志 2000；8：684-686
3 郭传勇,钱珍华,李定国,田字彬,陆汉明.维拉帕米对内皮素促细胞增值效应阻断作用.胃肠病学和肝病学杂志 1998;7:324-329
4 Du WD, Zhang YE, Zhai WR, Zhou XM. Dynamic changes of type Ⅰ, Ⅲ and Ⅳ collagen synthesis and distribution of
collagen-producing cells in carbon tetrachl oride-induced rat liver fibrosis. World J Gastroenterol 1999;5:397-403
5 Arthur MJ, Mann DA, Iredale JP. Tissue inhibitors of metalloproteinases, hepa tic stellate cells and liver fibrosis.
Gastroenterol Hepatol 1998;13(Suppl) :S33-S38
6 Wang YJ, Sun ZQ, Quan QZ, Yu JJ. Fat-storing cells and liver fibrosis. Ch ina Natl J New Gastroenterol 1996;2:58-60
7 郭传勇,王炳芳,李定国,钱珍华,钟敏章,陆汉明.硝苯吡啶和维拉帕米治疗肝纤维化细胞 学研究.上海铁道大学学报 1997;11:270-272
8 李兵顺, 王继, 甄彦君, 刘金星, 魏梅新, 孙树强, 王淑琴. 血清纤维化指标与肝组织 病理和肝组织纤维定量关系的实验研究.
世界华人消化杂志 1999;7:1031-1034
9 Xu LM, Liu C, Liu P. Effect of amygdalin on proliferation of rat hepat ic fat-storing cells and collagen production in vitro.
China Natl J New Gastroenterol 1997;3:103
10 Wang YD, Jia LW, Li CM. Hepatic content of collagens and lam inin in rat model of experimental liver fibrosis.
World J Gastroenterol 2000 ;6(Suppl 3):73
11 Rockey DC. Gene therapy for hepatic fibrosisa2bringing treatment into the new millennium. Hepatology 1999;30:816-818
12 郭传勇,李定国,田字彬,刘树人,王炳芳,陆汉明.丹参及川芎嗪对人成纤维细胞DN A和胶原合成的影响.上海第二医科大学学报
1996;16:217-218
13 郭传勇,钱珍华,胡泉林.中药防治肝纤维化研究现状.上海铁道大学学报 1998;19 :77-79
14 郭传勇,钟敏章,黄培新,刘恒辂,钱珍华.MTT法分析清肝饮对Ito细胞和成纤维细 胞的调控作用.上海铁道大学学报 1998;19:9-11
15 郭传勇,申振宇,钟敏章,沈迎春,钱珍华,黄培新.中药清肝饮对大鼠肝贮脂细胞和 成纤维细胞增值效应的调控作用.
中国中医药科技 2000;5:285-286
16 郭传勇,申振宇,钟敏章,黄培新,刘恒辂,沈迎春.清肝饮对大鼠肝纤维化模型胶原 纤维和网状纤维的影响.上海铁道大学学报 2000;21:1-4
17 张永宏, 周力, 卢源, 张涛. 肝硬变患者前列腺素E1治疗后血清HA，PⅢP，CⅣ 的变化. 华人消化杂志 1998;6:485-487
18 Friedman SL. Molecular regulation of hepatic fibrosis, an integrated c ellular response to tissue injury. J Biol Chem 2000;275:2247-2250
19 Shetty K, Wu GY, Wu CH. Gene therapy of hepatic diseases: prospects fo r the new millennium. Gut 2000;46:136-139
20 郭传勇,钟敏章,黄培新,王炳芳,李定国,陆汉明,钱珍华.MTT法分析内皮素对Ito 细胞和成纤维细胞的调控作用.肝脏 1998;3:145-147
21 Cales P. Apoptosis and liver fibrosis: antifibrotic strategies. Biom ed & Pharmacother 1998;52:259-263
22 向德栋, 魏永利, 李奇芬. 转化生长因子β-1对Ito细胞作用的分子机制. 世 界华人消化杂志 1999;7:980-981
23 Jia JB, Han DW, Xu RL, Gao F, Zhao LF, Zhao YC, Yan JP, Ma XH. Effect of endotoxin on fibronectin synthesis of rat primary
cultured hepatocytes. Wor ld J Gastroenterol 1998;4:329-331
24 Cales P. Apoptosis and liver antifibrotic strategies. Biomed Pharmac other 1998;52:259
25 黄新,李定国,王志荣,魏红山,程计林,展玉涛,徐芹芳,陆汉明.卵泡抑素 对肝纤维化大鼠细胞增生及激活素A的影响.
世界华人消化杂志 2000;8:993-997
26 王宇, 高毅, 黄宇琦, 俞金龙, 方石岗. 明胶酶原A在实验性肝纤维化过程中表 达变化. 世界华人消化杂志 2000;8:165-167
27 Liu C, Liu P, Liu CH, Zhu XQ, Ji G.Effects of Fuzhenghuayu decoction o n collagen synthesis of cultured hepatic stellate cells,hepatocytes and fibrobl asts in rats.World J Gastroenterol 1998;4:548-549
28 Gao ZL, Li DG, Lu HM, Gu XH. The effect of retinoic acid on Ito cell p roliferation and content of DNA and RNA.
World J Gastroenterol 1999;5:443-4 44
29 陆雄, 刘成海, 徐光福, 陈文慧, 刘平. 大鼠肝纤维化形成中肝窦壁层粘连蛋白 及Ⅳ型胶原蛋白的变化.
世界华人消化杂志 2001；9：260-262
30 Walsh KM, Timms P, Campbell S, MacSween RN, Morris AJ. Plasma levels o f matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and tissue inhibitors
of metalloproteinas es 1 and 2 (TIMP-1 and TIMP-2) as noninvasive markers of liver disease in chronic hepatitis C: comparison
using ROC analysis. Dig Dis Sci 1999;44:624-630
31 Wu CH. Fibrodynamics-elucidation of the mechanisms and sites of liver fibrogenesis. World J Gastroenterol 1999;5:388-390, 百拇医药
项目负责人 郭传勇，200072，上海市，同济大学附属铁路医院消化科. guochuanyong@hotmail
基金项目:铁道部科学基金课题(No：B96029)
电话：021-56770588转3504
收稿日期 2001-08-26 接受日期 2001-09-06
郭传勇，申振宇，钟敏章，钱珍华.清肝饮对大鼠肝纤维化N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性的影响. 世界华人消化杂志 2002;10(2):237-238
0 引言各种慢性肝病的主要病理转归为肝硬化，肝纤维化则是其前期病变，能否阻止或逆转肝纤维 化是治疗各种慢性肝病的关键[1-6].肝纤维化是一种异常的修复过程，为细胞外 基质主要是胶原成份异常生成和积累的结果[7-11].清肝饮是由黄芪、虎杖、赤芍 和丹参等组成的纯中药复方制剂，在临床上对慢性肝炎肝纤维化有一定的疗效，对成纤维细胞和Ito细胞具有显著的抑制DNA合成和细胞增生作用[12-16]. 为了进一步阐明清 肝饮治疗肝纤维化的作用以及作用机制，我们用CCl4造成大鼠肝纤维化，并分别在损伤的 早期和晚期口服清肝饮，通过对其肝脏N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(NAG)和透明质酸( HA)的检测，进一步观察其对肝纤维化的影响及其作用机制.
1 材料和方法
1.1 材料 精制茶油配制400mL.L-1CCl4；HA分析药盒 ，第二军医大学长征医院提供；NAG基质溶液，取对硝基苯N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷(PN P-NAG；上海科技大学生物工程系产品)171.2mg，用pH4.6柠檬酸缓冲液溶解并稀释至100ml 制成；SCR20BA型低温高速离心机，日立公司产品；FMJ-182型放射免疫γ计数器，中科院 上海原子核研究所日环仪器厂产品；200A型双光束分光光度计，日立公司产品.Wistar♂大鼠48只，重量(200±20)g，由中国科学院上海实验动物中心提供.随机分成6组(n＝8)，即早期及晚期正常对照组、早期及晚期模型组和早期及晚期治疗组.造模组采用CCl42.5 mL.Kg-1(首剂加倍)，每隔3d一次，共15次.正常对照组则用同样方法注射等量的精 制茶油.清肝饮由黄芪、虎杖、赤芍和丹参等组方的水煎醇提法制取，每毫升相当于10mg生 药(粗品).早期治疗组于第2次注射CCl4的同时，用清肝饮1mL灌胃，每日1次，共42次；造 型对照组和正常对照组用等量蒸馏水按同样条件灌胃.晚期治疗组的给药则在最后一次注射C Cl4的同时，其给药方法、条件和时间及对照组的处理均同早期治疗组.动物处死后，新鲜肝组织立即浸入40g.L-1甲醛，经石蜡包埋，切片作HE染色观察组织病理变化，另作Masson三色胶原染色，按如下半定量标准判定胶原纤维增生程度：(-)示正常肝组织，无胶原增生；(+)示胶原明显增生，从汇管区或中央静脉呈星状向外延伸，无纤维隔形成；(2+)示胶原明显增多，形成彼此不连接的不完全性纤维隔；(3+)示胶原细胞增多形成 完全的相互连接的纤维隔分隔肝实质.
1.2 方法1.2.1 肝组织N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性测定 取肝组织小块用冷细胞提取液洗2次，至无色或粉红色.在滤纸上吸干水分后称量1.0g，加 提取液6.0mL，用电动匀浆器置冰水中匀浆，1000r.min-1，上下移动10次，将提取 液加至10mL.再取肝匀浆6mL转入10mL离心管中，用低温高速离心机700g离心10min，收集沉淀物为细胞器.再取上清10000g离心10min，收集沉淀物为线粒体.继续取其上清20000g离心10min，收集沉淀物为溶酶体.再继续取其上清105000g离心60min，收集沉淀物为微粒体.所剩上清为胞质.取各细胞器成份液20μL，加预温(37℃)的NAG基质溶液1mL(空白管加硼酸缓冲液4mL)，37℃水溶10min后取出，加硼酸缓冲液4mL(空白管加NAG基质液4mL)，混匀终止酶反应，匀浆液需离心(2000g)10min后取上清液.用空白管凋零，在波长400nm，光径1cm条件下用分光光度计比色.根据标准曲线查酶的活性，单位为nKat.g-1.
1.2.2 肝组织透明质酸测定 取肝组织小块，经生理盐 水充分洗涤后，在滤纸上吸干表面水分后称量1.0g，加消化液5mL消化，用聚四氯乙烯匀浆器(置冰浴中)匀浆，1000r.min-1上下10次(光镜下观察95%以上细胞均已破碎).放置60℃水浴24h，再加新鲜消化液1.0mL，继续水浴24h.加冰乙酸1mL，置4℃冰箱3h以终止消化.调整pH7.0～7.5，加蒸馏水至10mL，离心(700g)10min，取上清液2ml，加蒸馏水至5mL.用FMJ-182型放射免疫γ计数器测定各管放射性(cpm)，并计算B/Bo=各管cpm/零管cpm×100%.以HA标准浓度为横坐标，相应的B/Bo为纵坐标作标准曲线图，由标准曲线查得各样本的HA浓度，再乘以0.5.
统计学处理 计量资料用t检验，使用Statpal医用软件包； 计数资料用Ridit检验法.
2 结果晚期造型组和晚期治疗组大鼠各死亡1只，其余各组大鼠均存活.其中，造型组大鼠肝肿大，肝表面结节形成率显著高于清肝饮治疗组(P<0.05)，治疗组与正常对照组则无显著差异.另外，正常组大鼠肝脏无异常病变；早期造型组大鼠肝小叶失去正常结构，肝板排列紊乱 ，肝细胞普遍变性，大多数为脂肪变性，坏死及炎症明显，汇管区纤维组织增生，形成纤维分割包绕肝小叶；晚期造型组可见肝细胞再生及假小叶形成；而清肝饮治疗组早期细胞变性程度及晚期纤维结缔组织增生程度明显减轻.
2.1 肝总NAG活性和HA含量 与造形对照组比较，清肝 饮的早期和晚期治疗组HA含量和NAG活性均明显降低(P<0.05，表1).
表1 清肝饮对实验性肝纤维化肝总NAG活性和HA含量的影响
| 分组 | 总NAG(nKat·g-1) | HA含量(mg·g-1) |
| 早期正常 | 74.68±14.84 | 85.6±14.8 |
| 早期造型 | 80.85±11.00a | 237.9±29.2a |
| 早期治疗 | 66.18±16.17c | 139.9±17.8c |
| 晚期正常 | 61.18±17.01 | 72.2±12.8 |
| 晚期造型 | 89.35±14.00a | 184.4±11.3a |
| 晚期治疗 | 75.35±15.50c | 153.5±48.5c |
aP<0.05 vs 正常组; cP<0.05 vs 造型组.
2.2 肝纤维化细胞器的NAG活性的影响 与造型组比较 ，清肝饮治疗后肝纤维化大鼠肝细胞器中溶酶体和线粒体的NAG显著下降(P<0.01，表2 )，而细胞核和微粒体的NAG活性无明显变化(P>0.05).
表2 清肝饮对大鼠肝纤维化细胞器的NAG活性的影响(nkat. g-1)
| 分组 | 细胞核 | 线粒体 | 溶酶体 | 微粒体 |
| 早期正常 | 8.00±0.50 | 5.33±0.83 | 11.17±1.50 | 11.67±1.33 |
| 早期造型 | 8.34±1.83 | 12.67±1.17b | 32.84±5.17b | 13.17±2.00 |
| 早期治疗 | 7.17±1.33 | 7.33±0.67d | 18.67±2.84d | 11.00±1.50 |
| 晚期正常 | 6.83±1.00 | 6.50±1.17 | 12.84±1.50 | 12.17±2.50 |
| 晚期造型 | 9.19±2.00 | 14.84±2.84b | 49.18±4.67b | 14.50±3.83 |
| 晚期治疗 | 7.33±1.50 | 9.17±1.33d | 18.00±2.83d | 15.00±2.84 |
bP<0.05 vs 正常组; dP<0.05 vs 造型组.
3 讨论NAG活性的升降和肝纤维化程度有直接关系.而且，肝细胞器中NAG的变化较总NAG的变化更敏 感.实验发现，NAG改变主要集中在线粒体和溶酶体这两个多酶系统.清肝饮治疗后肝纤维化大鼠肝细胞器中溶酶体和线粒体的NAG显著下降，提示清肝饮能降低肝纤维化的活跃和进展程度.另外，HA参与形成蛋白聚糖多聚体，是结缔组织基质的重要成分，具有维持组织形态、体积和保持抗压缩性及张力等效应，并影响细胞迁移和细胞分化.业已证明，HA是反映肝内皮细胞功能和肝纤维化程度的有实用价值的新指标，其敏感性和准确性均十分可靠[ 17-19].实验发现，无论清肝饮早期治疗组还是晚期治疗组，与对照组比较，其HA含量 均有明显减少(P<0.05).提示清肝饮对大鼠肝纤维化时的HA含量有明显的降低作用.我们以前的实验证实了清肝饮对肝脏内产生胶原的主要细胞贮脂细胞的增生有明显抑制作用 ，说明清肝饮的抗纤维化机制之一是通过贮脂细胞的增生而实现的[12-16].当然 ，体内的情况不象体外培养如此简单，各种细胞与细胞之间、细胞与细胞外基质之间的相互 影响和调节亦错综复杂[20-31]，故不可简单地将体外实验类推于整体水平.因此 ，本实验又进一步从病理组织改变上反映了清肝饮抗肝纤维化的良好效果，较完整地说明了 清肝饮对肝纤维化的影响.结果提示清肝饮具有延缓肝纤维化进程，减轻肝纤维化程度的作 用.
4 参考文献1 Friedman SL. Molecular mechanisms of hepatic fibrosis and principles of therapy. J Gastroenterol 1997;32:424-427
2 蒋树林，姚希贤，孙玉凤.肝纤维化的治疗.世界华人消化杂志 2000；8：684-686
3 郭传勇,钱珍华,李定国,田字彬,陆汉明.维拉帕米对内皮素促细胞增值效应阻断作用.胃肠病学和肝病学杂志 1998;7:324-329
4 Du WD, Zhang YE, Zhai WR, Zhou XM. Dynamic changes of type Ⅰ, Ⅲ and Ⅳ collagen synthesis and distribution of
collagen-producing cells in carbon tetrachl oride-induced rat liver fibrosis. World J Gastroenterol 1999;5:397-403
5 Arthur MJ, Mann DA, Iredale JP. Tissue inhibitors of metalloproteinases, hepa tic stellate cells and liver fibrosis.
Gastroenterol Hepatol 1998;13(Suppl) :S33-S38
6 Wang YJ, Sun ZQ, Quan QZ, Yu JJ. Fat-storing cells and liver fibrosis. Ch ina Natl J New Gastroenterol 1996;2:58-60
7 郭传勇,王炳芳,李定国,钱珍华,钟敏章,陆汉明.硝苯吡啶和维拉帕米治疗肝纤维化细胞 学研究.上海铁道大学学报 1997;11:270-272
8 李兵顺, 王继, 甄彦君, 刘金星, 魏梅新, 孙树强, 王淑琴. 血清纤维化指标与肝组织 病理和肝组织纤维定量关系的实验研究.
世界华人消化杂志 1999;7:1031-1034
9 Xu LM, Liu C, Liu P. Effect of amygdalin on proliferation of rat hepat ic fat-storing cells and collagen production in vitro.
China Natl J New Gastroenterol 1997;3:103
10 Wang YD, Jia LW, Li CM. Hepatic content of collagens and lam inin in rat model of experimental liver fibrosis.
World J Gastroenterol 2000 ;6(Suppl 3):73
11 Rockey DC. Gene therapy for hepatic fibrosisa2bringing treatment into the new millennium. Hepatology 1999;30:816-818
12 郭传勇,李定国,田字彬,刘树人,王炳芳,陆汉明.丹参及川芎嗪对人成纤维细胞DN A和胶原合成的影响.上海第二医科大学学报
1996;16:217-218
13 郭传勇,钱珍华,胡泉林.中药防治肝纤维化研究现状.上海铁道大学学报 1998;19 :77-79
14 郭传勇,钟敏章,黄培新,刘恒辂,钱珍华.MTT法分析清肝饮对Ito细胞和成纤维细 胞的调控作用.上海铁道大学学报 1998;19:9-11
15 郭传勇,申振宇,钟敏章,沈迎春,钱珍华,黄培新.中药清肝饮对大鼠肝贮脂细胞和 成纤维细胞增值效应的调控作用.
中国中医药科技 2000;5:285-286
16 郭传勇,申振宇,钟敏章,黄培新,刘恒辂,沈迎春.清肝饮对大鼠肝纤维化模型胶原 纤维和网状纤维的影响.上海铁道大学学报 2000;21:1-4
17 张永宏, 周力, 卢源, 张涛. 肝硬变患者前列腺素E1治疗后血清HA，PⅢP，CⅣ 的变化. 华人消化杂志 1998;6:485-487
18 Friedman SL. Molecular regulation of hepatic fibrosis, an integrated c ellular response to tissue injury. J Biol Chem 2000;275:2247-2250
19 Shetty K, Wu GY, Wu CH. Gene therapy of hepatic diseases: prospects fo r the new millennium. Gut 2000;46:136-139
20 郭传勇,钟敏章,黄培新,王炳芳,李定国,陆汉明,钱珍华.MTT法分析内皮素对Ito 细胞和成纤维细胞的调控作用.肝脏 1998;3:145-147
21 Cales P. Apoptosis and liver fibrosis: antifibrotic strategies. Biom ed & Pharmacother 1998;52:259-263
22 向德栋, 魏永利, 李奇芬. 转化生长因子β-1对Ito细胞作用的分子机制. 世 界华人消化杂志 1999;7:980-981
23 Jia JB, Han DW, Xu RL, Gao F, Zhao LF, Zhao YC, Yan JP, Ma XH. Effect of endotoxin on fibronectin synthesis of rat primary
cultured hepatocytes. Wor ld J Gastroenterol 1998;4:329-331
24 Cales P. Apoptosis and liver antifibrotic strategies. Biomed Pharmac other 1998;52:259
25 黄新,李定国,王志荣,魏红山,程计林,展玉涛,徐芹芳,陆汉明.卵泡抑素 对肝纤维化大鼠细胞增生及激活素A的影响.
世界华人消化杂志 2000;8:993-997
26 王宇, 高毅, 黄宇琦, 俞金龙, 方石岗. 明胶酶原A在实验性肝纤维化过程中表 达变化. 世界华人消化杂志 2000;8:165-167
27 Liu C, Liu P, Liu CH, Zhu XQ, Ji G.Effects of Fuzhenghuayu decoction o n collagen synthesis of cultured hepatic stellate cells,hepatocytes and fibrobl asts in rats.World J Gastroenterol 1998;4:548-549
28 Gao ZL, Li DG, Lu HM, Gu XH. The effect of retinoic acid on Ito cell p roliferation and content of DNA and RNA.
World J Gastroenterol 1999;5:443-4 44
29 陆雄, 刘成海, 徐光福, 陈文慧, 刘平. 大鼠肝纤维化形成中肝窦壁层粘连蛋白 及Ⅳ型胶原蛋白的变化.
世界华人消化杂志 2001；9：260-262
30 Walsh KM, Timms P, Campbell S, MacSween RN, Morris AJ. Plasma levels o f matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and tissue inhibitors
of metalloproteinas es 1 and 2 (TIMP-1 and TIMP-2) as noninvasive markers of liver disease in chronic hepatitis C: comparison
using ROC analysis. Dig Dis Sci 1999;44:624-630
31 Wu CH. Fibrodynamics-elucidation of the mechanisms and sites of liver fibrogenesis. World J Gastroenterol 1999;5:388-390, 百拇医药