胃黏膜不典型增生P53基因表达及其癌变率的研究 李晓清,郝丽萍,张小丽,龚飞跃,郭惠学,伍尤皇
李晓清,郝丽萍,张小丽,广东省珠海市拱北医院消化内科 广东省珠海市 519020
龚飞跃，广东省珠海市人民医院消化内科 广东省珠海市 519001
郭惠学，中山大学第五附属医院消化内科 广东省珠海市 519001
伍尤皇，南华大学第二附属医院病理科 湖南省衡阳市 421001
项目负责人 李晓清，519020，广东省珠海市，广东省珠海市拱北医院消化内科.
电话:0756-8885463
收稿日期 2002-07-02 接收日期 2002-08-13
, 百拇医药
摘要目的:利用免疫组化的方法探索P53基因在癌前病变到癌这一转化过程的重要作用以及在胃癌早期诊断中的意义.
方法:采用胃镜活检标本,选择胃黏膜不典型增生的病例,分出癌变组与未癌变组,利用免疫组化的方法检测P53基因蛋白表达情况.
结果:正常胃黏膜、轻、中、重度不典型增生的癌变率分别为0 %、3.4 %、10.7 %、16.7 %，随着不典型增生程度的增加其癌变率亦增加.在未癌变组中P53蛋白阳性表达中、重度不典型增生与正常胃黏膜、轻度不典型增生间有显著性差异(P <0.05),在癌变组中，轻、中、重度不典型增生与正常胃黏膜间有显著性差异(P <0.05),未癌变与癌变组间差异有显著性(P <0.05).
结论:不典型增生是一种重要的癌前病变，P53基因的变异在胃癌的发生、发展中起重要作用，对不典型增生胃黏膜进行P53基因检测有助于胃癌的早期诊断.
, 百拇医药
李晓清,郝丽萍,张小丽,龚飞跃,郭惠学,伍尤皇.胃黏膜不典型增生P53基因表达及其癌变率的研究.世界华人消化杂志
2002;10(10):1216-1217
0 引言一般认为，胃黏膜上皮细胞癌变并非由正常细胞一跃而变为癌细胞，而是一个渐进的过程.胃黏膜上皮的不典型增生是公认的癌前病变，他具有两向转化的特点，既可发展为癌，亦可恢复正常.报道其癌变率极不一致.恶性肿瘤发生是以多个原癌基因激活和抑癌基因失活为基础的多步骤多阶段过程，并通过其表达产物作用，使细胞生长分化及代谢过程发生改变，最终导致恶变.与胃癌的发生发展有关的P53在胃黏膜癌前病变中的表达及癌变率的关系尚少见报道[1] .本研究应用免疫组化方法检测P53蛋白的表达，研究胃黏膜不典型增生与胃癌的关系，从而判定不典型增生高危程度或癌变率.
1 材料和方法1.1 材料 本研究总病例117例，主要取自于1991年-1999年珠海市拱北医院，珠海市人民医院，中山大学第五附属医院,南华大学第二附属医院病理科胃镜活检标本.男性80例，女性37例，年龄27-77岁，平均年龄58.3岁.根据组织病理学诊断标准[2]，其中确诊基本正常胃黏膜27例，轻、中、重度胃黏膜异型分别为59例、28例、30例.首次胃镜病理诊断后，3-6 mo复查胃镜一次，每次活检病变黏膜4-6块，经病理诊断证实为癌变的10例，未癌变107例，随访时间6-74 mo，上述标本经10 %中性甲醛固定，石蜡包埋和连续切片.
, 百拇医药
1.2 方法 实验操作采用链霉素亲+生物素-过氧化酶联接法(S-P法)，检测P53基因蛋白表达.主要步骤：将石蜡块切成5mm的薄片，经脱蜡、水化，在试剂盒中依次加入过氧化酶阻断剂、正常动物血清一抗、生物素标记二抗、链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶,最后DAB显色.鼠抗人P53单克隆抗体购自DAKO公司
1.3 判断标准 阳性为胞核或胞质呈棕黄色至深棕色的细胞.P53蛋白阳性判断标准为：阴性(-):未见阳性细胞，阳性(+) <25%，阳性(++) 25-50%，阳性>50%(+++) ,用细胞免疫组织化学定量系统进行分析，每例随机数5个视野分布清晰的上皮细胞，计算其阳性细胞的比例.
统计学处理 采用c2 检验、P <0.05差异有显著性.
2 结果2.1 不同程度不典型增生胃黏膜的癌变情况 正常胃黏膜27例，未癌变27例，癌变0例，癌变率0 %.轻度不典型增生59例，未癌变57例，癌变2例，癌变率3.4 %.中度不典型增生28例，未癌变25例，癌变3例，癌变率10.7 %.重度不典型增生30例，未癌变25例，癌变5例，癌变率16.7 %.随着不典型增生的程度增加其癌变率增加.
, 百拇医药
2.2 不同程度不典型增生胃黏膜的P53蛋白表达情况及其与癌变的关系 P53基因蛋白的分布特征：P53蛋白免疫组化阳性物质分布于胞核，偶见胞质着色.未癌变组中正常胃黏膜、轻、中、重度不典型增生P53蛋白表达的阳性率分别为0 %、0 %、11.5 %、16.6 %，中、重度不典型增生与正常胃黏膜、轻度不典型增生间差异有显著性(P <0.05).其癌变组P53蛋白表达的阳性率为0 %、50 %、66.6 %、60 %，轻，中、重度不典型增生与正常胃黏膜间有显著性差异(P <0.05).轻、中、重度不典型增生中未癌变与癌变组间差异有显著性(P <0.05).随着不典型增生的程度增加P53蛋白表达率增加，而其癌变率也增加.(以上结果详见表1)
表1 胃黏膜不同程度不典型增生P53蛋白表达及其癌变率
, 百拇医药
aP <0.05 vs 正常胃黏膜组比较，cP <0.05 vs 未癌变组比较.
3 讨论P基因定位于染色体17 P，有11个外显子和10个内含子组成，编码393个氨基酸组成的胞核磷酸蛋白，分子量为53 KD，故称为P53蛋白.正常人体中P53基因为一抑癌基因(野生型)，其蛋白产物半衰期较短，免疫组化法难于检测，该基因失活后其编码产物半衰期较长，易于检测.若能检测到P53的存在则间接表明该基因已失活.失活的途径如下：突变，多集中于外显子4-8，为最常见的失活途径，基因缺失和插入而致移码突变，杂合性缺失，以上情况常相伴存在.失活后的P基因(突变型)，编码产物能提高细胞增生能力，在肿瘤形成中起重要作用.Shiao用免疫组化分析胃癌手术标本发现有60 %胃癌和60 %癌变不典型增生黏膜中有P53蛋白表达，而聚合酶链反应(PCR)，单链构象多态性(SSCP)和DNA测序显示，58.3 %癌变不典型增生有P53基因结构异常[3] .Craanen也发现胃黏膜不典型增生有P53阳性表达[4] .具有P53阳性表达的患者肿瘤易转移及预后差.在胃癌的组织发生过程中，不典型增生在胃癌的多阶段发生中有重要的意义，是肿瘤发生过程中的一个重要阶段，与胃癌发生具有密切关系[5, 6] ，胃黏膜不典型增生作为一种重要的癌前病变，癌变率与其不典型增生的轻、中、重程度有关[7].本研究利用前瞻性研究，随访不同程度的不典型增生的病例，发现随着不典型增生的程度增加其癌变率增加，轻、中、重度分别为：3.4 %、10.7 %、16.7 %，这与以前的研究结果是相一致的[7] .有研究显示P53基因在胃黏膜不典型增生中有表达，随着不典型增生程度的增加其P53蛋白表达率亦增加[8]，本研究结果也显示随着不典型增生程度的增加在未癌变和癌变组组其P53蛋白表达率增加(P <0.05).但是，不典型增生中癌变的和未癌变之间表达有无差别，本实验对这一问题进行探索，发现轻、中、重度不典型增生在未癌变与癌变组间有显著性差异(P <0.05).以上结果提示：P53基因的检测可以在一定程度上预测不典型增生的癌变趋向，特别是在中、重度不典型增生其阳性率高，其癌变率也高，有助于胃癌的早期诊断.
, 百拇医药
4 参考文献1 Maehara Y,Tomoda M,Hasuda S.Prognostic value of p53 protein expression for patients with gastric
cancer-a multivariate analysis.Br J Cancer 1999;79:1255-1261
2 张荫昌.胃黏膜病变的诊断标准.见：中华人民共和国卫生医政主编.中国常见恶性肿瘤诊治规范.第二版.北京医科大学中国协和
医科大学联合出版社，1991:34-42
3 Shiao YH,M Rugge,P Correa, Lehman HP, Scheer WD.P53 alteration in gastric precancerrous lesions. Am J
, 百拇医药
Path 1994;144:511-517
4 Craanen ME,Blok P,Dekker W,Offerhaus GJ , Tytgat GN.Chronology of p53 protein accumulation in gastric
carcinogenesis.Gut 1995;36:848-854
5 Lansdown M,Quiorke P,Dixon MF.High grade of dysplasia of the gastric mucosa:a marker for gastric
carcinoma.Gut 1990;31:977-983
6 马峻岭,刘伟东,张在臻,游伟程,张联，昌云生.胃癌与癌前病变关系的研究.世界华人消化杂志1998;6:222-223
7 FertittaAM,CominU,TerruzziV,MinoliG,ZambelliA.Clinical singnificance of gastric dysplasia:A multicenter follow-
up study.Endoscopy 1993;25:265
8 胡祥，刘革，毕伟，安伟德.胃癌多阶段发生与不典型增生关联的研究.中华消化杂志 2000;2:134-135, http://www.100md.com(胃黏膜不典型增生P53基因表达及其癌变率的研究 李晓清,郝丽萍,张小丽,龚飞跃,郭惠学,伍尤皇)
龚飞跃，广东省珠海市人民医院消化内科 广东省珠海市 519001
郭惠学，中山大学第五附属医院消化内科 广东省珠海市 519001
伍尤皇，南华大学第二附属医院病理科 湖南省衡阳市 421001
项目负责人 李晓清，519020，广东省珠海市，广东省珠海市拱北医院消化内科.
电话:0756-8885463
收稿日期 2002-07-02 接收日期 2002-08-13
, 百拇医药
摘要目的:利用免疫组化的方法探索P53基因在癌前病变到癌这一转化过程的重要作用以及在胃癌早期诊断中的意义.
方法:采用胃镜活检标本,选择胃黏膜不典型增生的病例,分出癌变组与未癌变组,利用免疫组化的方法检测P53基因蛋白表达情况.
结果:正常胃黏膜、轻、中、重度不典型增生的癌变率分别为0 %、3.4 %、10.7 %、16.7 %，随着不典型增生程度的增加其癌变率亦增加.在未癌变组中P53蛋白阳性表达中、重度不典型增生与正常胃黏膜、轻度不典型增生间有显著性差异(P <0.05),在癌变组中，轻、中、重度不典型增生与正常胃黏膜间有显著性差异(P <0.05),未癌变与癌变组间差异有显著性(P <0.05).
结论:不典型增生是一种重要的癌前病变，P53基因的变异在胃癌的发生、发展中起重要作用，对不典型增生胃黏膜进行P53基因检测有助于胃癌的早期诊断.
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李晓清,郝丽萍,张小丽,龚飞跃,郭惠学,伍尤皇.胃黏膜不典型增生P53基因表达及其癌变率的研究.世界华人消化杂志
2002;10(10):1216-1217
0 引言一般认为，胃黏膜上皮细胞癌变并非由正常细胞一跃而变为癌细胞，而是一个渐进的过程.胃黏膜上皮的不典型增生是公认的癌前病变，他具有两向转化的特点，既可发展为癌，亦可恢复正常.报道其癌变率极不一致.恶性肿瘤发生是以多个原癌基因激活和抑癌基因失活为基础的多步骤多阶段过程，并通过其表达产物作用，使细胞生长分化及代谢过程发生改变，最终导致恶变.与胃癌的发生发展有关的P53在胃黏膜癌前病变中的表达及癌变率的关系尚少见报道[1] .本研究应用免疫组化方法检测P53蛋白的表达，研究胃黏膜不典型增生与胃癌的关系，从而判定不典型增生高危程度或癌变率.
1 材料和方法1.1 材料 本研究总病例117例，主要取自于1991年-1999年珠海市拱北医院，珠海市人民医院，中山大学第五附属医院,南华大学第二附属医院病理科胃镜活检标本.男性80例，女性37例，年龄27-77岁，平均年龄58.3岁.根据组织病理学诊断标准[2]，其中确诊基本正常胃黏膜27例，轻、中、重度胃黏膜异型分别为59例、28例、30例.首次胃镜病理诊断后，3-6 mo复查胃镜一次，每次活检病变黏膜4-6块，经病理诊断证实为癌变的10例，未癌变107例，随访时间6-74 mo，上述标本经10 %中性甲醛固定，石蜡包埋和连续切片.
, 百拇医药
1.2 方法 实验操作采用链霉素亲+生物素-过氧化酶联接法(S-P法)，检测P53基因蛋白表达.主要步骤：将石蜡块切成5mm的薄片，经脱蜡、水化，在试剂盒中依次加入过氧化酶阻断剂、正常动物血清一抗、生物素标记二抗、链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶,最后DAB显色.鼠抗人P53单克隆抗体购自DAKO公司
1.3 判断标准 阳性为胞核或胞质呈棕黄色至深棕色的细胞.P53蛋白阳性判断标准为：阴性(-):未见阳性细胞，阳性(+) <25%，阳性(++) 25-50%，阳性>50%(+++) ,用细胞免疫组织化学定量系统进行分析，每例随机数5个视野分布清晰的上皮细胞，计算其阳性细胞的比例.
统计学处理 采用c2 检验、P <0.05差异有显著性.
2 结果2.1 不同程度不典型增生胃黏膜的癌变情况 正常胃黏膜27例，未癌变27例，癌变0例，癌变率0 %.轻度不典型增生59例，未癌变57例，癌变2例，癌变率3.4 %.中度不典型增生28例，未癌变25例，癌变3例，癌变率10.7 %.重度不典型增生30例，未癌变25例，癌变5例，癌变率16.7 %.随着不典型增生的程度增加其癌变率增加.
, 百拇医药
2.2 不同程度不典型增生胃黏膜的P53蛋白表达情况及其与癌变的关系 P53基因蛋白的分布特征：P53蛋白免疫组化阳性物质分布于胞核，偶见胞质着色.未癌变组中正常胃黏膜、轻、中、重度不典型增生P53蛋白表达的阳性率分别为0 %、0 %、11.5 %、16.6 %，中、重度不典型增生与正常胃黏膜、轻度不典型增生间差异有显著性(P <0.05).其癌变组P53蛋白表达的阳性率为0 %、50 %、66.6 %、60 %，轻，中、重度不典型增生与正常胃黏膜间有显著性差异(P <0.05).轻、中、重度不典型增生中未癌变与癌变组间差异有显著性(P <0.05).随着不典型增生的程度增加P53蛋白表达率增加，而其癌变率也增加.(以上结果详见表1)
表1 胃黏膜不同程度不典型增生P53蛋白表达及其癌变率
| 病变情况 | n | 未癌变数(P53阳性表达率) | 癌变数(P53阳性表达率) | 癌变率 |
| 正常胃黏膜 | 27 | 27(0 %) | 0(0 %) | 0 % |
| 轻度不典型增生 | 59 | 57(0 %) | 2(50 %)ac | 3.4 % |
| 中度不典型增生 | 28 | 25(11.5 %)a | 3(66.6 %)ac | 10.7 % |
| 重度不典型增生 | 30 | 24(16.6 %)a | 5(60 %)ac | 16.7 % |
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aP <0.05 vs 正常胃黏膜组比较，cP <0.05 vs 未癌变组比较.
3 讨论P基因定位于染色体17 P，有11个外显子和10个内含子组成，编码393个氨基酸组成的胞核磷酸蛋白，分子量为53 KD，故称为P53蛋白.正常人体中P53基因为一抑癌基因(野生型)，其蛋白产物半衰期较短，免疫组化法难于检测，该基因失活后其编码产物半衰期较长，易于检测.若能检测到P53的存在则间接表明该基因已失活.失活的途径如下：突变，多集中于外显子4-8，为最常见的失活途径，基因缺失和插入而致移码突变，杂合性缺失，以上情况常相伴存在.失活后的P基因(突变型)，编码产物能提高细胞增生能力，在肿瘤形成中起重要作用.Shiao用免疫组化分析胃癌手术标本发现有60 %胃癌和60 %癌变不典型增生黏膜中有P53蛋白表达，而聚合酶链反应(PCR)，单链构象多态性(SSCP)和DNA测序显示，58.3 %癌变不典型增生有P53基因结构异常[3] .Craanen也发现胃黏膜不典型增生有P53阳性表达[4] .具有P53阳性表达的患者肿瘤易转移及预后差.在胃癌的组织发生过程中，不典型增生在胃癌的多阶段发生中有重要的意义，是肿瘤发生过程中的一个重要阶段，与胃癌发生具有密切关系[5, 6] ，胃黏膜不典型增生作为一种重要的癌前病变，癌变率与其不典型增生的轻、中、重程度有关[7].本研究利用前瞻性研究，随访不同程度的不典型增生的病例，发现随着不典型增生的程度增加其癌变率增加，轻、中、重度分别为：3.4 %、10.7 %、16.7 %，这与以前的研究结果是相一致的[7] .有研究显示P53基因在胃黏膜不典型增生中有表达，随着不典型增生程度的增加其P53蛋白表达率亦增加[8]，本研究结果也显示随着不典型增生程度的增加在未癌变和癌变组组其P53蛋白表达率增加(P <0.05).但是，不典型增生中癌变的和未癌变之间表达有无差别，本实验对这一问题进行探索，发现轻、中、重度不典型增生在未癌变与癌变组间有显著性差异(P <0.05).以上结果提示：P53基因的检测可以在一定程度上预测不典型增生的癌变趋向，特别是在中、重度不典型增生其阳性率高，其癌变率也高，有助于胃癌的早期诊断.
, 百拇医药
4 参考文献1 Maehara Y,Tomoda M,Hasuda S.Prognostic value of p53 protein expression for patients with gastric
cancer-a multivariate analysis.Br J Cancer 1999;79:1255-1261
2 张荫昌.胃黏膜病变的诊断标准.见：中华人民共和国卫生医政主编.中国常见恶性肿瘤诊治规范.第二版.北京医科大学中国协和
医科大学联合出版社，1991:34-42
3 Shiao YH,M Rugge,P Correa, Lehman HP, Scheer WD.P53 alteration in gastric precancerrous lesions. Am J
, 百拇医药
Path 1994;144:511-517
4 Craanen ME,Blok P,Dekker W,Offerhaus GJ , Tytgat GN.Chronology of p53 protein accumulation in gastric
carcinogenesis.Gut 1995;36:848-854
5 Lansdown M,Quiorke P,Dixon MF.High grade of dysplasia of the gastric mucosa:a marker for gastric
carcinoma.Gut 1990;31:977-983
6 马峻岭,刘伟东,张在臻,游伟程,张联，昌云生.胃癌与癌前病变关系的研究.世界华人消化杂志1998;6:222-223
7 FertittaAM,CominU,TerruzziV,MinoliG,ZambelliA.Clinical singnificance of gastric dysplasia:A multicenter follow-
up study.Endoscopy 1993;25:265
8 胡祥，刘革，毕伟，安伟德.胃癌多阶段发生与不典型增生关联的研究.中华消化杂志 2000;2:134-135, http://www.100md.com(胃黏膜不典型增生P53基因表达及其癌变率的研究 李晓清,郝丽萍,张小丽,龚飞跃,郭惠学,伍尤皇)
