P16蛋白与C-erbB-2在胰腺癌组织中表达意义
徐永泉,王艳军,林艳,中国医科大学第二临床学院消化内科 辽宁省沈阳市 110004
刘香,沈阳市中心医院消化内科 辽宁省沈阳市 110024
项目负责人:徐永泉,110004,辽宁省沈阳市和平区三好街36号，中国医科大学第二临床学院消化内科.
收稿日期:2002-10-08 接受日期:2002-12-08
摘要
目的:分析胰腺癌组织中C-erbB-2、P16蛋白表达的临床意义，探讨诊治胰腺癌的有效方法.
方法:40例胰腺癌石蜡包埋标本连续5 mm切片，HE染色确定肿瘤分化程度，应用S-P法进行免疫组化染色，PBS代替一抗做阴性对照.
, http://www.100md.com
结果: C-erbB-2在胰腺癌组织中的阳性率为47.5 %(19/40).在高、中、低分化肿瘤中阳性率分别为38.89 %,50.00 %和60.00 %.经检验无显著性差异(P >0.05),但各级阳性表达率呈逐渐增高趋势.P16蛋白在胰腺癌组织中的缺失率为55 %,在高、中、低分化肿瘤中缺失率分别为27.78 %、66.67 %和90.00 %,经检验有非常显著性差异(P <0.01).P16蛋白和C-erbB-2蛋白的表达具有负相关性(P <0.05).
结论:检测胰腺癌组织中P16蛋白及C-erbB-2蛋白的表达可作为胰腺癌诊断的分子生物学手段，C-erbB-2蛋白的表达与肿瘤的恶性度有关; P16蛋白的表达可反映胰腺癌的恶性度，且同一肿瘤有多基因表达.
徐永泉,王艳军,林艳,刘香.P16蛋白与C-erbB-2在胰腺癌组织中表达意义.世界华人消化杂志 2003;11(1):110-111
, 百拇医药
0 引言胰腺癌是消化系统恶性肿瘤中较难早期诊断的癌肿,预后较差.近年来本症发病率有增高倾向.应用免疫组化方法分析胰腺癌组织中P16蛋白，C-erbB-2表达，探讨其临床意义及应用，指导临床治疗及对于预后的估计，提高胰腺癌诊断的准确性，改善本症存活率有着重要意义.
1 材料和方法
1.1 材料 收集我院外科1997-1999年手术切除并经病理证实为胰腺癌的标本40例，男29例，女11例，年龄24-72岁，平均年龄(57.33±11.98)岁.HE染色确定其分化程度，其中高分化18例，中分化12例和低分化10例.
1.2方法 采用S-P法,每例标本切片3张,其中2张列入实验组(加单抗C-erbB-2和P16多抗),另1张列入空白对照组(PBS代替一抗,余步骤同实验组).抗P21单克隆抗体、兔抗P16多克隆抗体和鼠抗C-erbB-2多克隆抗体均为Santa Cruz公司的产品,工作浓度分别为1:70，1:50和1:100.S-P试剂盒(Kit-9302)为Maxin公司产品.
, 百拇医药
1.3 结果判断 染色阳性标记为棕黄色.染色程度按以下标准划分:每张切片分别观察10个高倍视野，每个高倍视野计数100个肿瘤细胞内的免疫染色阳性细胞数，计算出每张切片的阳性细胞百分数，按阳性细胞百分数分为4个等级,低于1 %为阴性(-),1-10 %为(+),11-50 %为(++), 51 %以上为(+++).
统计学处理 采用x2检验、秩和检验.
2 结果
2.1 C-erbB-2和P16蛋白的表达 C-erbB-2蛋白的表达位于胰腺癌细胞的细胞质和胞膜，呈灶状和弥漫分布；P16蛋白的表达位于胰腺癌细胞质内，呈弥漫性或颗粒性分布，偶见细胞核内着色.C-erbB-2、P16蛋白在癌组织中的阳性率分别为47.5 %(19/40)和45.0 %(18/40).
, 百拇医药
2.2 癌基因蛋白的表达与病理组织学分级的关系 胰腺癌组织中C-erbB-2蛋白在高、中、低分化肿瘤中阳性率经c2检验无显著性差异(P >0.05)，但各级阳性表达率呈逐渐增高趋势.40例胰腺癌中有22例P16蛋白表达缺失，将高、中、低分化肿瘤中的P16蛋白缺失率比较，有非常显著性差异(秩和检验，P <0.01).
表1 胰腺癌中C-erbB-2的表达与病理分级的关系
, 百拇医药
表2胰腺癌中P16的表达与病理分级的关系
2.3胰腺癌组织中P16蛋白与C-erbB-2表达的关系 P16蛋白与C-erbB-2表达呈负相关性(P <0.05),说明同一肿瘤有多基因的表达.
, 百拇医药
3 讨论癌基因的活化与表达是肿瘤发生与发展中主要的病理基础，肿瘤的发生是多病因参与的多阶段过程，各种肿瘤应有1个癌基因谱的参与，不同肿瘤有所差异.目前发现的细胞癌基因都是单拷贝结构基因，都有编码产物，细胞癌基因通过其编码产物引起细胞增生.胰腺癌的发生、发展与原癌基因、抑癌基因的异常有关 ,本研究检测胰腺癌组织中C-erbB-2、P16蛋白的表达，证实了肿瘤的发生是多基因表达的癌基因谱的概念.
C-erbB-2癌基因又称为neu或HER-2，编码分子量为185 Ku的穿膜蛋白，与表皮生长因子同源，该蛋白可抑制酪氨酸激酶的活性.C-erbB-2的激活一般是通过基因扩增实现的，可见于多种肿瘤，其表达部位位于肿瘤细胞或非肿瘤细胞胞质和胞膜上.也有人认为P185蛋白表达以细胞膜型为主，尤其在乳腺肿瘤、胰腺癌及肺癌.根据肿瘤部位不同，P185阳性表达率差异较大，胰腺癌为47 %.几次大规模的实验均表明其过量表达与肿瘤的发生、分化程度和核分级密切相关[1].本结果阳性率为47.5%.C-erbB-2的表达与病理分级无关，但表达率随病理分级逐级提高而有明显增高趋势，提示与肿瘤的恶性度有关.
, http://www.100md.com
P16蛋白由P16基因编码的16KD蛋白分子，P16基因是近年发现的一种肿瘤抑制基因，又称MTS1，INK4，CDK4，CDK2基因.P16蛋白的主要作用是抑制依赖细胞激酶(cyclin-dependent kinase CDK)的活性.细胞进入增生周期,有赖于CDK的活性，而CDK必须与细胞周期蛋白(cyclin)结合形成cyclin复合体后才能被活化，后者使Rb蛋白产物P110Rb蛋白磷酸化，从而促进细胞进入增生周期的G1-S期.P16基因对细胞的生长起着十分重要的负调节作用，防止细胞的生长失控[2-4].当MTS1基因缺失或突变而不能正常表达时，P16蛋白就不能竞争结合CDK4阻止细胞进入有丝分裂，会增加周期蛋白D与CDK4的结合而增加CDK4的活性，促进细胞的有丝分裂，从而使细胞生长失控，导致进一步癌变[5,6].有报道胰腺癌P16蛋白的表达与胰腺癌的组织学分级无显著关系，但与胰腺癌有无淋巴结转移关系密切(P <0.01)，提示P16蛋白可能是预测胰腺癌患者预后的一个重要指标[1].也有报道癌组织中的P16基因变异与临床分期密切相关，提示P16基因在原发性胰腺癌的发生、发展过程中发挥着非常重要的作用[7] .本研究P16蛋白的缺失率为55.0 %,且在不同分化程度的肿瘤中缺失率有明显差异，肿瘤分化程度越低，其缺失率越高，P16蛋白的表达可反映肿瘤的恶性度，其可以与病理诊断同时进行，从而提供一种辅助诊断的方法，并且为估计患者的预后提供帮助.借助于P16基因及其产物的检测，可判断胰腺癌发展及评估其预后.P16靶基因治疗可能是治疗原发性胰腺癌的一条有效途径[8,9].P16蛋白和C-erbB-2蛋白之间表达存在的负相关性，说明胰腺癌的发生、发展与P16和C-erbB-2基因均有关系.
, 百拇医药
4 参考文献1 纪小龙,施作霖主编.诊断免疫组织化学.第1版.军事医学科学出版社，1997:70
2 Norbori T, Miura K, Wu DJ,Lois A, Takabayashi K,Carson DA. Deletions of the cyclin-depedent kinase-4 inhibitor gene in
multiple human cancers. Nature 1994;368:753-756
3 Marx J. A challenge to p16 gene as a major tumor suppressor. Science 1994; 24:1846
4 Serrano M, Hannon GJ, Beach D.A new regulator motify in cell cycle control causing specific inhibition of cyclin D/CDK4.
, http://www.100md.com
Nature 1993; 366:634
5 Dreyling MH, Bohlander SK, Le Beau MM,Olopade OI. Refined mapping of genomic rearrangements involving the short arm
of chromosome 9 in acute lympoblastic leukemias and other hematologic malignancies. Blood 1995; 86:1931-1938
6 Schulze A, Zerfass K, Spitkovsky D, Henglein B,Jansen-Durr P.Activation of the E2F transcription factor by cyclin D1 is blocked
, 百拇医药
by P16INK4, the product of the putative tumor suppressor gene MTS1. Oncogene 1994; 9: 3475-3482
7 陈建锋,俞金龙,汪爽,高毅.胰腺癌组织P16蛋白表达的意义.世界华人消化杂志 2001;9:237
8 郑世曦,李孝圭,周利军,朱兴族. P16真核表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的抑制作用.世界华人消化杂志 2000;8:49-51
9 鲁建国,林晨,黄志强,吴金生.腺病毒介导的P16和顺铂的联合应用对胆管癌细胞系QBC939的生长抑制作用.世界华人
消化杂志2000;8:641- 645, http://www.100md.com(徐永泉,王艳军,林 艳,刘 香)
刘香,沈阳市中心医院消化内科 辽宁省沈阳市 110024
项目负责人:徐永泉,110004,辽宁省沈阳市和平区三好街36号，中国医科大学第二临床学院消化内科.
收稿日期:2002-10-08 接受日期:2002-12-08
摘要
目的:分析胰腺癌组织中C-erbB-2、P16蛋白表达的临床意义，探讨诊治胰腺癌的有效方法.
方法:40例胰腺癌石蜡包埋标本连续5 mm切片，HE染色确定肿瘤分化程度，应用S-P法进行免疫组化染色，PBS代替一抗做阴性对照.
, http://www.100md.com
结果: C-erbB-2在胰腺癌组织中的阳性率为47.5 %(19/40).在高、中、低分化肿瘤中阳性率分别为38.89 %,50.00 %和60.00 %.经检验无显著性差异(P >0.05),但各级阳性表达率呈逐渐增高趋势.P16蛋白在胰腺癌组织中的缺失率为55 %,在高、中、低分化肿瘤中缺失率分别为27.78 %、66.67 %和90.00 %,经检验有非常显著性差异(P <0.01).P16蛋白和C-erbB-2蛋白的表达具有负相关性(P <0.05).
结论:检测胰腺癌组织中P16蛋白及C-erbB-2蛋白的表达可作为胰腺癌诊断的分子生物学手段，C-erbB-2蛋白的表达与肿瘤的恶性度有关; P16蛋白的表达可反映胰腺癌的恶性度，且同一肿瘤有多基因表达.
徐永泉,王艳军,林艳,刘香.P16蛋白与C-erbB-2在胰腺癌组织中表达意义.世界华人消化杂志 2003;11(1):110-111
, 百拇医药
0 引言胰腺癌是消化系统恶性肿瘤中较难早期诊断的癌肿,预后较差.近年来本症发病率有增高倾向.应用免疫组化方法分析胰腺癌组织中P16蛋白，C-erbB-2表达，探讨其临床意义及应用，指导临床治疗及对于预后的估计，提高胰腺癌诊断的准确性，改善本症存活率有着重要意义.
1 材料和方法
1.1 材料 收集我院外科1997-1999年手术切除并经病理证实为胰腺癌的标本40例，男29例，女11例，年龄24-72岁，平均年龄(57.33±11.98)岁.HE染色确定其分化程度，其中高分化18例，中分化12例和低分化10例.
1.2方法 采用S-P法,每例标本切片3张,其中2张列入实验组(加单抗C-erbB-2和P16多抗),另1张列入空白对照组(PBS代替一抗,余步骤同实验组).抗P21单克隆抗体、兔抗P16多克隆抗体和鼠抗C-erbB-2多克隆抗体均为Santa Cruz公司的产品,工作浓度分别为1:70，1:50和1:100.S-P试剂盒(Kit-9302)为Maxin公司产品.
, 百拇医药
1.3 结果判断 染色阳性标记为棕黄色.染色程度按以下标准划分:每张切片分别观察10个高倍视野，每个高倍视野计数100个肿瘤细胞内的免疫染色阳性细胞数，计算出每张切片的阳性细胞百分数，按阳性细胞百分数分为4个等级,低于1 %为阴性(-),1-10 %为(+),11-50 %为(++), 51 %以上为(+++).
统计学处理 采用x2检验、秩和检验.
2 结果
2.1 C-erbB-2和P16蛋白的表达 C-erbB-2蛋白的表达位于胰腺癌细胞的细胞质和胞膜，呈灶状和弥漫分布；P16蛋白的表达位于胰腺癌细胞质内，呈弥漫性或颗粒性分布，偶见细胞核内着色.C-erbB-2、P16蛋白在癌组织中的阳性率分别为47.5 %(19/40)和45.0 %(18/40).
, 百拇医药
2.2 癌基因蛋白的表达与病理组织学分级的关系 胰腺癌组织中C-erbB-2蛋白在高、中、低分化肿瘤中阳性率经c2检验无显著性差异(P >0.05)，但各级阳性表达率呈逐渐增高趋势.40例胰腺癌中有22例P16蛋白表达缺失，将高、中、低分化肿瘤中的P16蛋白缺失率比较，有非常显著性差异(秩和检验，P <0.01).
表1 胰腺癌中C-erbB-2的表达与病理分级的关系
| 病理分级 | C-erbB-2的表达 | 阳性率(%) | ||||
| n | ||||||
| - | + | ++ | +++ | |||
| 高分化 | 18 | 11 | 2 | 3 | 2 | 38.89 |
| 中分化 | 12 | 6 | 3 | 1 | 2 | 50.00 |
| 低分化 | 10 | 4 | 2 | 1 | 3 | 60.00 |
, 百拇医药
表2胰腺癌中P16的表达与病理分级的关系
| 病理分级 | C-erbB-2的表达 | 阳性率(%) | ||||
| n | ||||||
| - | + | ++ | +++ | |||
| 高分化 | 18 | 5 | 5 | 6 | 2 | 27.78 |
| 中分化 | 12 | 8 | 2 | 1 | 1 | 66.67 |
| 低分化 | 10 | 9 | 1 | 0 | 0 | 90.00 |
2.3胰腺癌组织中P16蛋白与C-erbB-2表达的关系 P16蛋白与C-erbB-2表达呈负相关性(P <0.05),说明同一肿瘤有多基因的表达.
, 百拇医药
3 讨论癌基因的活化与表达是肿瘤发生与发展中主要的病理基础，肿瘤的发生是多病因参与的多阶段过程，各种肿瘤应有1个癌基因谱的参与，不同肿瘤有所差异.目前发现的细胞癌基因都是单拷贝结构基因，都有编码产物，细胞癌基因通过其编码产物引起细胞增生.胰腺癌的发生、发展与原癌基因、抑癌基因的异常有关 ,本研究检测胰腺癌组织中C-erbB-2、P16蛋白的表达，证实了肿瘤的发生是多基因表达的癌基因谱的概念.
C-erbB-2癌基因又称为neu或HER-2，编码分子量为185 Ku的穿膜蛋白，与表皮生长因子同源，该蛋白可抑制酪氨酸激酶的活性.C-erbB-2的激活一般是通过基因扩增实现的，可见于多种肿瘤，其表达部位位于肿瘤细胞或非肿瘤细胞胞质和胞膜上.也有人认为P185蛋白表达以细胞膜型为主，尤其在乳腺肿瘤、胰腺癌及肺癌.根据肿瘤部位不同，P185阳性表达率差异较大，胰腺癌为47 %.几次大规模的实验均表明其过量表达与肿瘤的发生、分化程度和核分级密切相关[1].本结果阳性率为47.5%.C-erbB-2的表达与病理分级无关，但表达率随病理分级逐级提高而有明显增高趋势，提示与肿瘤的恶性度有关.
, http://www.100md.com
P16蛋白由P16基因编码的16KD蛋白分子，P16基因是近年发现的一种肿瘤抑制基因，又称MTS1，INK4，CDK4，CDK2基因.P16蛋白的主要作用是抑制依赖细胞激酶(cyclin-dependent kinase CDK)的活性.细胞进入增生周期,有赖于CDK的活性，而CDK必须与细胞周期蛋白(cyclin)结合形成cyclin复合体后才能被活化，后者使Rb蛋白产物P110Rb蛋白磷酸化，从而促进细胞进入增生周期的G1-S期.P16基因对细胞的生长起着十分重要的负调节作用，防止细胞的生长失控[2-4].当MTS1基因缺失或突变而不能正常表达时，P16蛋白就不能竞争结合CDK4阻止细胞进入有丝分裂，会增加周期蛋白D与CDK4的结合而增加CDK4的活性，促进细胞的有丝分裂，从而使细胞生长失控，导致进一步癌变[5,6].有报道胰腺癌P16蛋白的表达与胰腺癌的组织学分级无显著关系，但与胰腺癌有无淋巴结转移关系密切(P <0.01)，提示P16蛋白可能是预测胰腺癌患者预后的一个重要指标[1].也有报道癌组织中的P16基因变异与临床分期密切相关，提示P16基因在原发性胰腺癌的发生、发展过程中发挥着非常重要的作用[7] .本研究P16蛋白的缺失率为55.0 %,且在不同分化程度的肿瘤中缺失率有明显差异，肿瘤分化程度越低，其缺失率越高，P16蛋白的表达可反映肿瘤的恶性度，其可以与病理诊断同时进行，从而提供一种辅助诊断的方法，并且为估计患者的预后提供帮助.借助于P16基因及其产物的检测，可判断胰腺癌发展及评估其预后.P16靶基因治疗可能是治疗原发性胰腺癌的一条有效途径[8,9].P16蛋白和C-erbB-2蛋白之间表达存在的负相关性，说明胰腺癌的发生、发展与P16和C-erbB-2基因均有关系.
, 百拇医药
4 参考文献1 纪小龙,施作霖主编.诊断免疫组织化学.第1版.军事医学科学出版社，1997:70
2 Norbori T, Miura K, Wu DJ,Lois A, Takabayashi K,Carson DA. Deletions of the cyclin-depedent kinase-4 inhibitor gene in
multiple human cancers. Nature 1994;368:753-756
3 Marx J. A challenge to p16 gene as a major tumor suppressor. Science 1994; 24:1846
4 Serrano M, Hannon GJ, Beach D.A new regulator motify in cell cycle control causing specific inhibition of cyclin D/CDK4.
, http://www.100md.com
Nature 1993; 366:634
5 Dreyling MH, Bohlander SK, Le Beau MM,Olopade OI. Refined mapping of genomic rearrangements involving the short arm
of chromosome 9 in acute lympoblastic leukemias and other hematologic malignancies. Blood 1995; 86:1931-1938
6 Schulze A, Zerfass K, Spitkovsky D, Henglein B,Jansen-Durr P.Activation of the E2F transcription factor by cyclin D1 is blocked
, 百拇医药
by P16INK4, the product of the putative tumor suppressor gene MTS1. Oncogene 1994; 9: 3475-3482
7 陈建锋,俞金龙,汪爽,高毅.胰腺癌组织P16蛋白表达的意义.世界华人消化杂志 2001;9:237
8 郑世曦,李孝圭,周利军,朱兴族. P16真核表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的抑制作用.世界华人消化杂志 2000;8:49-51
9 鲁建国,林晨,黄志强,吴金生.腺病毒介导的P16和顺铂的联合应用对胆管癌细胞系QBC939的生长抑制作用.世界华人
消化杂志2000;8:641- 645, http://www.100md.com(徐永泉,王艳军,林 艳,刘 香)
