杨倩,成军,刘妍,王建军,中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039

    张树林,西安交通大学第一医院传染科 陕西省西安市 710061

    项目负责人:成军,100039,北京市西四环中路100号,中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心. cj@genetherapy.com.cn

    电话:010-66933391 传真:010-63801283

    收稿日期:2002-10-29 接受日期:2002-11-18

    杨倩,成军,刘妍,王建军,张树林. 抑制性消减杂交技术原理及应用. 世界华人消化杂志 2003;11(4):456-458

    0 引言抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization，SSH)技术是一种鉴定、分离组织细胞中选择性表达基因的技术. 其原理是以抑制性多聚酶链反应(PCR)反应为基础的cDNA消减杂交技术. 通过合成两个不同的接头，连接于测试cDNA 片段的5’末端，达到选择性扩增差异性表达的cDNA片段，抑制非目的cDNA的扩增. 该技术与其他消减杂交技术相比具有假阳性率低、敏感性高、效率高等优点而得到广泛应用.

    1 抑制性消减杂交技术产生的背景高等真核生物细胞中约含有4-10万个不同的基因，但在生物体的发育过程中只有15 %的基因得以表达. 这些基因的选择性表达决定了生物体的各项生命活动:个体的发育和分化、体内稳态的维持、细胞周期的调控、衰老、细胞凋亡等. 因此要了解人体各项生命活动的调控机制，就必须将这些差异表达的基因分离、鉴定并作深入研究，为此人们建立了一系列研究基因表达差异的方法.

    cDNA消减杂交技术是一类较早建立的技术^[1]，其原理是将要比较基因表达差异的双方cDNA进行杂交，通过羟基磷灰石层析、亲和素-生物素结合等方法，从杂交混合物中分离、鉴定出未杂交的部分. 应用这些方法曾分离、鉴定出一些重要基因，例如T细胞受体(TCR)等，但不能有效获得低丰度的转录物，需多步的杂交层析过程. 1992年Liang et al ^[2,3]建立了mRNA差异显示法(mRNA differential display)或称差异显示逆转录PCR(differential display reverse ranscription PCR，DD-RT-PCR),其特点是原理简单、灵敏度高 ......