HBV感染者HBV DNA与抗原抗体标志物的关系
陈雪娟,李刚,刘淑芳,陈文思,李桂侠,中山大学附属第三医院传染病科 广东省广州市 510630
广东省教育厅“千百十工程”优秀人才培养基金项目资助,No. Q02034
广东省科技攻关项目资助,No.2km05302s
项目负责人:李刚,510630,广东省广州市天河路600号,中山大学附属第三医院传染病科. ligangzh@pub.guangzhou.gd.cn
电话:85516867-2019
收稿日期:2002-12-08 接受日期:2002-12-25
, 百拇医药
摘要
目的:了解乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBVDNA与抗原抗体标志物的关系及评价HBVDNA检测的临床应用价值.
方法:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测1474例HBV感染者血清HBVDNA，同时采用酶联免疫黏附试验(ELISA)技术检测HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc.
结果:603例HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性标本中，HBVDNA阳性520例(86.2%); 465例HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性标本中，HBVDNA阳性163例(35.1%); 216例HBsAg、抗HBc阳性标本中，HBVDNA阳性88例(40.7%); 26例单项抗HBc阳性标本中HBVDNA阳性3例(11.5%).
, 百拇医药
结论:HBVDNA检测可填补抗原抗体标志物检测的不足，对临床诊断具有重要价值.
陈雪娟,李刚,刘淑芳,陈文思,李桂侠.HBV感染者HBVDNA与抗原抗体标志物的关系.世界华人消化杂志 2003;11(6):870-871
0 引言乙型肝炎是世界上最常见的传染病之一，在我国发病率高，危害大[1-3].目前HBV感染的实验诊断主要采用ELISA法检测抗原抗体，同时，随着抗病毒药物的开发和逐渐普及应用，HBVDNA的检测越来越受到重视，HBVDNA是HBV存在的最直接的证据，亦是HBV复制和具有传染性的标志.采用荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测HBVDNA，具有很高的敏感性、特异性和重复性，克服了常规PCR法只定性不定量及存在假阳性的缺点[4-6].本文采用荧光定量PCR法检测了1474例HBV感染者血清HBVDNA，同时用ELISA法测定免疫学标志(HBVM)，结果报告如下:
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1 材料和方法
1.1 材料 本院传染科门诊及住院患者，共1474例，男1036例，女438例，年龄4-82岁.急性乙型肝炎64例，慢性乙型肝炎566例，慢性乙肝病毒携带者638例，肝炎肝硬化42例，健康体检及其他肝病者164例，诊断符合2000年(西安)第十次全国病毒性肝炎及肝病学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准.
1.2 方法 HBV DNA荧光定量试剂盒由广州中山大学达安基因诊断中心提供，原理与方法见文献[4]，正常参考值为1×103拷贝/mL，所用仪器为PE5700自动荧光PCR仪(美国PE公司)，乙型肝炎病毒血清学标志(HBV-M)ELISA试验盒由北京万泰试剂公司提供，检测过程按说明操作.
2 结果急性乙型肝炎64例，血清HBVDNA阳性者59例，阳性率92.2%，慢性乙型肝炎566例，HBVDNA阳性330例，阳性率58.3%; 慢性乙肝病毒携带者638例，HBVDNA阳性366例，阳性率57.3%; 肝炎肝硬化42例，HBVDNA阳性39例，阳性率92.8%; 健康体检者及其他肝病患者164例，HBVDNA阳性9例，阳性率5.4%.FQ-PCR检测血清HBVDNA与酶免疫黏附检测HBV-M结果比较见表1.
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表1 FQ-PCR定量检测HBVDNA与ELISA测定HBV-M结果比较
, 百拇医药
3 讨论采用ELISA法检测HBV-M在临床上多年来已得到广泛应用，在诊断HBV感染中起了很大作用.HBeAg是病毒复制和具有传染性的标志，HBeAg的存在与HBVDNA检出率具有很好的相关性[7-11].本文检测HBsAg和HBeAg阳性者624例，HBVDNA阳性540例，阳性率86.5%，而HBsAg阳性，HBeAg阴性，HBeAb阳性470例，HBVDNA阳性166例，阳性率35.3%. HBeAg阳性的HBVDNA明显高于阴性的标本，二者比较具有统计学差异.因此，当没有条件开展FQ-PCR技术检测HBVDNA时，ELISA法检测HBV-M仍有很大意义.模式HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性603例，HBVDNA检测阳性率为86.2%，而模式HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性465例，HBVDNA阳性率为35.1%，这说明并不是所有“大三阳”的患者HBV都处于复制期具有传染性，也不是所有“小三阳”的患者HBV都无复制，所以，要准确知道患者是否处于复制期，最准确的方法还是检测HBVDNA.HBsAg阴性仍不能排除HBV的复制，本文调查发现在164例HBsAg、HBeAg均阴性标本中，9例检出HBVDNA阳性，证实了HBsAg阴性者仍有可能存在HBV感染.另外还发现在56例仅HBsAb阳性的标本中，HBVDNA阳性2例，占3.6%，过去认为HBsAb存在即表示患者康复并且有免疫力，目前有学者认为极少数HBV感染者，即使血清中HBsAg向HBsAb转换后，HBVDNA 复制仍可持续存在，或感染了HBVS区变异株，提示HBsAb阳性仍有必要检测HBVDNA，只有血清中产生了HBsAb，同时HBVDNA阴性，才能说明病毒已不存在[12-18].
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HBsAg和HBeAg均阳性而HBVDNA阴性的情况，有资料研究表明可能有以下原因.(1)干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制.(2)PCR所用引物相应的DNA序列发生突变，此引物与突变DNA不能配对结合.(3)病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBVDNA很少或缺乏.
4 参考文献1 胡军,郭文,郑明媚.荧光定量聚合酶链反应检测血清HBVDNA及临床应用价值.广州医药 2001;32:63-64
2 王平忠,张中伟,周永兴,白雪帆.定量PCR检测慢性乙型肝炎患者HBV-DNA及其意义.世界华人消化杂志2000;8:755-758
3 张树林,李义方.乙型肝炎血清学标志临床意义的再认识.国外医学流行病学传染病分册 1993;20:57
4 程钢,何蕴韶,周新宇.荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒.中华医学检验杂志 1999;22:135
, http://www.100md.com
5 刘敬忠,谭淑珍,吴燕,何蕴韶,肖白,周艳,雷箴,闫梅,邵伟.荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA.中华微生物
学和免疫学杂志 2001;21:690-692
6 施红,王福生.影响HBV感染慢性化的宿主因素及其在乙型肝炎防治中的意义.世界华人消化杂志 2001;9:66-69
7 游晶,孔蕾,庄林,李惠萍,卢绍蓉,曹云峰.急性病毒性肝炎2116例血清病原学分析.世界华人消化杂志 1999;7:636-637
8 严家春,马勇,陈文笔,孙新华,裴波.乙型肝炎肝窦病变的免疫组织化学及电镜观察.世界华人消化杂志 1999;7:943-947
9 郭晏海,任峰玲,闫小君,苏成芝.分级定量PCR检测血清HBVDNA.世界华人消化杂志 1999;7:49-51
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10 王平忠,周永兴.乙型肝炎病毒血清学标志物与DNA检测结果的对比分析.世界华人消化杂志 1999;7:918-919
11 田华,王淑琴,高建英,王宁.FQ-PCR检测乙型肝炎患者血清HBVDNA. 上海医学检验杂志 2001;16:363-364
12 黄燕萍,王宇明.荧光定量PCR与普通PCR检测HBVDNA的对照分析.第三军医大学学报 2001;23:992-993
13 周平,张木森,蔡庆,陈友纯,李晓娟,于建国,关键,刘春灵.PCR检测HBV感染患者血清HBVDNA的临床意义.华人消化
杂志 1998;6:263-264
14 吴晓蔓,郭海波,列海涛.HBV-DNA定量和定性聚合酶链反应及其临床实用性的探讨.临床肝胆病杂志 2000;16:226-227
, 百拇医药
15 曹红卫,卫国,冯文曦,龚小云,郑江.乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测及其意义.第三军医大学学报 2001;23:866-868
16 袁静,马为民,周伯平,徐六妹,王火生,Tam JS. 荧光定量聚合酶链反应与分支链DNA信号扩增法检测血清HBVDNA
的比较. 广东医学 2000;21:838-839
17 潘锵荣,蒋文智,张行.荧光定量PCR技术动态观察乙肝患者血清中HBV变化的意义.中国实验诊断学 2001;5:264
18 迟宝荣,孟祥伟,李波,姜薇.PCR检测582例HBVDNA对肝病诊断的临床意义.临床肝脏病杂志 1994;10:35-36, http://www.100md.com( 陈雪娟,李 刚,刘淑芳,陈文思,李桂侠)
广东省教育厅“千百十工程”优秀人才培养基金项目资助,No. Q02034
广东省科技攻关项目资助,No.2km05302s
项目负责人:李刚,510630,广东省广州市天河路600号,中山大学附属第三医院传染病科. ligangzh@pub.guangzhou.gd.cn
电话:85516867-2019
收稿日期:2002-12-08 接受日期:2002-12-25
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摘要
目的:了解乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBVDNA与抗原抗体标志物的关系及评价HBVDNA检测的临床应用价值.
方法:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测1474例HBV感染者血清HBVDNA，同时采用酶联免疫黏附试验(ELISA)技术检测HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc.
结果:603例HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性标本中，HBVDNA阳性520例(86.2%); 465例HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性标本中，HBVDNA阳性163例(35.1%); 216例HBsAg、抗HBc阳性标本中，HBVDNA阳性88例(40.7%); 26例单项抗HBc阳性标本中HBVDNA阳性3例(11.5%).
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结论:HBVDNA检测可填补抗原抗体标志物检测的不足，对临床诊断具有重要价值.
陈雪娟,李刚,刘淑芳,陈文思,李桂侠.HBV感染者HBVDNA与抗原抗体标志物的关系.世界华人消化杂志 2003;11(6):870-871
0 引言乙型肝炎是世界上最常见的传染病之一，在我国发病率高，危害大[1-3].目前HBV感染的实验诊断主要采用ELISA法检测抗原抗体，同时，随着抗病毒药物的开发和逐渐普及应用，HBVDNA的检测越来越受到重视，HBVDNA是HBV存在的最直接的证据，亦是HBV复制和具有传染性的标志.采用荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测HBVDNA，具有很高的敏感性、特异性和重复性，克服了常规PCR法只定性不定量及存在假阳性的缺点[4-6].本文采用荧光定量PCR法检测了1474例HBV感染者血清HBVDNA，同时用ELISA法测定免疫学标志(HBVM)，结果报告如下:
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1 材料和方法
1.1 材料 本院传染科门诊及住院患者，共1474例，男1036例，女438例，年龄4-82岁.急性乙型肝炎64例，慢性乙型肝炎566例，慢性乙肝病毒携带者638例，肝炎肝硬化42例，健康体检及其他肝病者164例，诊断符合2000年(西安)第十次全国病毒性肝炎及肝病学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准.
1.2 方法 HBV DNA荧光定量试剂盒由广州中山大学达安基因诊断中心提供，原理与方法见文献[4]，正常参考值为1×103拷贝/mL，所用仪器为PE5700自动荧光PCR仪(美国PE公司)，乙型肝炎病毒血清学标志(HBV-M)ELISA试验盒由北京万泰试剂公司提供，检测过程按说明操作.
2 结果急性乙型肝炎64例，血清HBVDNA阳性者59例，阳性率92.2%，慢性乙型肝炎566例，HBVDNA阳性330例，阳性率58.3%; 慢性乙肝病毒携带者638例，HBVDNA阳性366例，阳性率57.3%; 肝炎肝硬化42例，HBVDNA阳性39例，阳性率92.8%; 健康体检者及其他肝病患者164例，HBVDNA阳性9例，阳性率5.4%.FQ-PCR检测血清HBVDNA与酶免疫黏附检测HBV-M结果比较见表1.
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表1 FQ-PCR定量检测HBVDNA与ELISA测定HBV-M结果比较
| HBsAg | HBeAg | HBcAb | HBsAb | HBeAb | n | HBV DNA(+)n(%) | |
| 1 | + | + | + | - | - | 603 | 520 (86.2) |
| 2 | + | - | + | - | + | 465 | 163(35.1) |
| 3 | + | + | - | - | - | 19 | 18(94.2) |
| 4 | + | - | + | - | - | 216 | 88(40.7) |
| 5 | + | - | - | - | + | 5 | 3(60) |
| 6 | - | - | + | + | + | 20 | 1(5) |
| 7 | - | - | + | + | - | 27 | 1(3.7) |
| 8 | - | - | + | - | + | 24 | 2(8.0) |
| 9 | - | - | - | + | + | 1 | 0(0) |
| 10 | - | - | - | + | - | 56 | 2(3.57) |
| 11 | - | - | + | - | - | 26 | 3(11.5) |
| 12 | + | + | + | + | - | 2 | 2 (100) |
| 13 | - | - | - | - | - | 10 | 0(0) |
| 合计 | 1 474 | 803 |
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3 讨论采用ELISA法检测HBV-M在临床上多年来已得到广泛应用，在诊断HBV感染中起了很大作用.HBeAg是病毒复制和具有传染性的标志，HBeAg的存在与HBVDNA检出率具有很好的相关性[7-11].本文检测HBsAg和HBeAg阳性者624例，HBVDNA阳性540例，阳性率86.5%，而HBsAg阳性，HBeAg阴性，HBeAb阳性470例，HBVDNA阳性166例，阳性率35.3%. HBeAg阳性的HBVDNA明显高于阴性的标本，二者比较具有统计学差异.因此，当没有条件开展FQ-PCR技术检测HBVDNA时，ELISA法检测HBV-M仍有很大意义.模式HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性603例，HBVDNA检测阳性率为86.2%，而模式HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性465例，HBVDNA阳性率为35.1%，这说明并不是所有“大三阳”的患者HBV都处于复制期具有传染性，也不是所有“小三阳”的患者HBV都无复制，所以，要准确知道患者是否处于复制期，最准确的方法还是检测HBVDNA.HBsAg阴性仍不能排除HBV的复制，本文调查发现在164例HBsAg、HBeAg均阴性标本中，9例检出HBVDNA阳性，证实了HBsAg阴性者仍有可能存在HBV感染.另外还发现在56例仅HBsAb阳性的标本中，HBVDNA阳性2例，占3.6%，过去认为HBsAb存在即表示患者康复并且有免疫力，目前有学者认为极少数HBV感染者，即使血清中HBsAg向HBsAb转换后，HBVDNA 复制仍可持续存在，或感染了HBVS区变异株，提示HBsAb阳性仍有必要检测HBVDNA，只有血清中产生了HBsAb，同时HBVDNA阴性，才能说明病毒已不存在[12-18].
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HBsAg和HBeAg均阳性而HBVDNA阴性的情况，有资料研究表明可能有以下原因.(1)干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制.(2)PCR所用引物相应的DNA序列发生突变，此引物与突变DNA不能配对结合.(3)病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBVDNA很少或缺乏.
4 参考文献1 胡军,郭文,郑明媚.荧光定量聚合酶链反应检测血清HBVDNA及临床应用价值.广州医药 2001;32:63-64
2 王平忠,张中伟,周永兴,白雪帆.定量PCR检测慢性乙型肝炎患者HBV-DNA及其意义.世界华人消化杂志2000;8:755-758
3 张树林,李义方.乙型肝炎血清学标志临床意义的再认识.国外医学流行病学传染病分册 1993;20:57
4 程钢,何蕴韶,周新宇.荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒.中华医学检验杂志 1999;22:135
, http://www.100md.com
5 刘敬忠,谭淑珍,吴燕,何蕴韶,肖白,周艳,雷箴,闫梅,邵伟.荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA.中华微生物
学和免疫学杂志 2001;21:690-692
6 施红,王福生.影响HBV感染慢性化的宿主因素及其在乙型肝炎防治中的意义.世界华人消化杂志 2001;9:66-69
7 游晶,孔蕾,庄林,李惠萍,卢绍蓉,曹云峰.急性病毒性肝炎2116例血清病原学分析.世界华人消化杂志 1999;7:636-637
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, http://www.100md.com
10 王平忠,周永兴.乙型肝炎病毒血清学标志物与DNA检测结果的对比分析.世界华人消化杂志 1999;7:918-919
11 田华,王淑琴,高建英,王宁.FQ-PCR检测乙型肝炎患者血清HBVDNA. 上海医学检验杂志 2001;16:363-364
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13 周平,张木森,蔡庆,陈友纯,李晓娟,于建国,关键,刘春灵.PCR检测HBV感染患者血清HBVDNA的临床意义.华人消化
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14 吴晓蔓,郭海波,列海涛.HBV-DNA定量和定性聚合酶链反应及其临床实用性的探讨.临床肝胆病杂志 2000;16:226-227
, 百拇医药
15 曹红卫,卫国,冯文曦,龚小云,郑江.乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测及其意义.第三军医大学学报 2001;23:866-868
16 袁静,马为民,周伯平,徐六妹,王火生,Tam JS. 荧光定量聚合酶链反应与分支链DNA信号扩增法检测血清HBVDNA
的比较. 广东医学 2000;21:838-839
17 潘锵荣,蒋文智,张行.荧光定量PCR技术动态观察乙肝患者血清中HBV变化的意义.中国实验诊断学 2001;5:264
18 迟宝荣,孟祥伟,李波,姜薇.PCR检测582例HBVDNA对肝病诊断的临床意义.临床肝脏病杂志 1994;10:35-36, http://www.100md.com( 陈雪娟,李 刚,刘淑芳,陈文思,李桂侠)
