靶向融合防龋DNA疫苗的构建与体外细胞表达研究
龋病是一种主要由变形链球菌引起的感染性疾病。细菌表面蛋白PAc和葡糖基转移酶(GTFs)分别参与介导了细菌与牙面获得性膜的蔗糖依赖性和非依赖性的黏附过程。已构建成功的针对PAc的防龋DNA疫苗pCIA-P及pGLUA-P确有防龋效果。Boyle等利用细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA4)将抗原靶向引导至抗原递呈细胞(APC)表面以增强DNA疫苗的免疫效能，效果甚佳。武汉大学口腔医学院口腔生物医学工程教育部重点实验室利用该特点构建携带CTLA4胞外区与Ig恒定区基因的靶向防龋DNA疫苗，检测其在真核细胞中的表达，以获得高效的新型防龋DNA疫苗。6vk, http://www.100md.com
方法：利用RT-PCR方法从外周淋巴细胞中获得CTLA4胞外区和Igγ1恒定区基因并进行T-A克隆，获得携带CT鄄LA4-Ig融合基因的重组质粒pGJ。选择合适的酶切位点，再克隆入融合防龋DNA疫苗pGLUA-P中，构建靶向融合防龋DNA疫苗pGJA-P，并转染CHO细胞系，用蛋白质免疫印迹实验检测其表达。结果：重组质粒pGJ、pGJA-P分别含有CTLA4-Igγ1融合基因和CT鄄LA4-、Igγ1、pac、glu基因序列。蛋白质免疫印迹结果显示，pGJA-P表达的抗原可以与特异性抗PAc抗体发生免疫反应。6vk, http://www.100md.com
结论：靶向融合防龋DNA疫苗pGJA-P构建成功，并可在真核细胞中正确表达。6vk, http://www.100md.com
摘自《中华口腔医学杂志》2003年第38卷第4期(《中华口腔医学杂志》 )
方法：利用RT-PCR方法从外周淋巴细胞中获得CTLA4胞外区和Igγ1恒定区基因并进行T-A克隆，获得携带CT鄄LA4-Ig融合基因的重组质粒pGJ。选择合适的酶切位点，再克隆入融合防龋DNA疫苗pGLUA-P中，构建靶向融合防龋DNA疫苗pGJA-P，并转染CHO细胞系，用蛋白质免疫印迹实验检测其表达。结果：重组质粒pGJ、pGJA-P分别含有CTLA4-Igγ1融合基因和CT鄄LA4-、Igγ1、pac、glu基因序列。蛋白质免疫印迹结果显示，pGJA-P表达的抗原可以与特异性抗PAc抗体发生免疫反应。6vk, http://www.100md.com
结论：靶向融合防龋DNA疫苗pGJA-P构建成功，并可在真核细胞中正确表达。6vk, http://www.100md.com
摘自《中华口腔医学杂志》2003年第38卷第4期(《中华口腔医学杂志》 )