胃液抗Hp IgA测定对Hp根除治疗效果的判断
谢勇,吕农华, 黄德强,陈江, 徐萍,王崇文,江西医学院一附院消化研究所 江西省南昌市 330006
项目负责人:谢勇, 330006, 江西省南昌市永外正街17号,江西医学院一附院消化研究所. xieyong-med@163.net
收稿日期:2002-12-24 接受日期:2003-01-03
摘要
目的:为探讨胃液抗HpIgA测定对Hp根除治疗效果判断的价值.
方法:采用间接ELISA法检测了65患者Hp根除前后胃液抗HpIgA.
, 百拇医药
结果:(1)Hp根除后胃液抗HpIgA含量显著低于治疗前(0.465和0.173，P<0.001); (2)Hp根除后胃液抗HpIgA阳性率由治疗前的94.29%降至22.86 % (P<0.001); (3)Hp未根除者及Hp阴性者其胃液中抗HpIgA在治疗前后无显著差异(P >0.05).
结论:胃液中抗HpIgA含量能反映当时胃内Hp感染情况,可作为Hp是否根除的判断标志.
谢勇,吕农华, 黄德强,陈江, 徐萍,王崇文. 胃液抗HpIgA测定对Hp根除治疗效果的判断.世界华人消化杂志 2003;11(11):1818-1820
0 引言幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，简称Hp)感染与胃炎、消化性溃疡和胃癌的关系日益受到人们的重视[1-4]，根除Hp可改善胃黏膜炎症，预防溃疡复发，降低胃癌发病率[5-7]，因此监测抗Hp治疗效果具有重要意义.我们及国外许多学者的研究已证实Hp感染可刺激胃黏膜局部产生特异性抗HpIgA[8-12]，IgA的半衰期比IgG短，胃液中抗HpIgA是否会随着Hp的根除而消失这方面的研究报道不多.本文采用测定胃液中抗HpIgA用于Hp根除治疗后的监测，取得了良好的效果,现报道如下.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 随机选择本院胃镜检查者65例，经胃镜活检孔吸取胃液4-5mL，混有血液者弃用.胃液取出后立即用碳酸氢钠调pH至7，置-80°C待测，并取活检黏膜数块，做Hp培养、涂片革兰氏染色镜检Hp和病理检查.所有患者抗Hp治疗停药1mo后复查胃镜，复查时再次取胃液和黏膜做同样检查.
1.2方法
1.2.1 胃黏膜内Hp菌检测 活检黏膜直接涂片检查及Hp的分离培养鉴定均参照张振华etal [13] 所报道的方法.细菌培养阳性或涂片中见大量典型细菌者方确认阳性，二者均为阴性者方确认为阴性.
1.2.2 ELISA 方法 从患者胃黏膜中培养出的7株Hp菌分离纯化，超声粉碎后在4°C下15000 g离心30min，取上清蛋白定量后作抗原.该抗原用SDS-PAGE法分析主要蛋白带在120kD、63 kD、28kD、94 kD. 用50mg/mL的抗原包被聚苯乙稀反应板，用间接ELISA法测定，每板均设标准阳性和标准阴性对照，将二者A值比值作为质控，每板之间此值的变异系数小于5%.
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1.2.3 吸收抑制试验 用7例在ELISA试验中高效价抗HpIgA的胃液混合后，分别用Hp，空肠弯曲菌(Cj)及大肠杆菌完整的细菌和Hp抗原吸收后，按上述方法做ELISA试验.
1.2.4 结果判断 结果用待测标本A值与标准阳性A值之比来表示.阳性临界值的确定:以20例Hp阴性者胃液经Hp菌特异黏咐后，按上述方法进行ELISA测定，以其均数加3倍标准差定为阳性临界值，该值大于或等于0.145为阳性.该方法与细菌学检测结果比较其特异性、敏感性和诊断符合率分别为92.9%、96.4 %和95.3%[9].
1.2.5 Hp根治方法及根除标准 洛赛克20mg，1次/d，甲硝唑200mg，3次/d，阿莫西林500mg，3次/d，2wk为1疗程.治疗结束后1mo复查胃镜，分别取胃体和胃窦黏膜做Hp检测，两处均阴性者为Hp根除.
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统计学处理 均数间比较用 t 检验，计数资料用x2检验.
2 结果
2.1 抗Hp治疗前后胃液中抗HpIgA变化 65例患者中55例阳性者经抗Hp治疗后35例Hp根除，其中27例胃液抗HpIgA为阴性，8例仍为阳性.20例Hp未根除者19例胃液中抗HpIgA为阳性，1例阴性，10例Hp阴性者复查时Hp仍为阴性.表1反映了治疗前后胃液中抗HpIgA变化. 经抗Hp治疗Hp根除后其胃液抗HpIgA含量和阳性率显著低于治疗前(P<0.001)，而Hp未根除者及Hp阴性者其胃液中抗HpIgA在治疗前后无显著差异(P>0.05). 另外胃液抗HpIgA含量，在治疗前Hp根除组与未根除组之间无差异(P>0.05)，与Hp阴性组之间有显著差异(P<0.01)，而治疗后已根除组显著低于未根除组(P<0.01)，虽稍高于Hp阴性组，但无统计学意义(P>0.05).
, 百拇医药
表1 抗Hp治疗前后胃液抗HpIgA结果比较
, http://www.100md.com 2.2吸收抑制试验结果 无论是完整的Hp菌还是超声粉碎提取的Hp抗原与Hp阳性者胃液共同温育后都能使胃液中抗HpIgA效价明显下降，而用大肠杆菌和Cj吸收后的血清和胃液抗体仅有少许下降，此结果证明本试验具有特异性.
3 讨论Hp感染不但可引起机体的全身免疫反应，而且可引起胃肠道的局部免疫反应，我们以前的研究[8,9]表明胃液中抗HpIgA可准确反映内胃内Hp感染情况，其对Hp感染诊断的特异性.敏感性和诊断符合率均高于血清学诊断.Hanvivatvong et al [10]的研究也表明胃液中抗HpIgA诊断Hp感染具有较高的特异性.Perez-Perez et al [11]的研究也发现s1/m1型VacA阳性的Hp感染者，胃液中含有高水平的抗VacAIgA. 而本研究进一步表明胃液中抗HpIgA与血清中Hp抗体不同，Hp根除1mo后，胃液内抗HpIgA迅速下降，降幅在60%以上. Koizumiet al [14]观察了Hp根除前后血清中抗HpIgG水平变化，结果Hp成功根除后3mo，血清中抗HpIgG下降约50 %，可见Hp根除后血液中抗HpIgG含量下降的速度明显比胃液中抗HpIgA慢，这可能是由于IgA在体内的半衰期短.王丕龙etal [15]的研究表明血清中IgA的变化较IgG快也证实了这一点.此外胃液中抗HpIgA为分泌型，其由胃黏膜内的浆细胞分泌，而胃黏膜上皮更新快，当Hp根除后，抗原刺激不再存在，原有的黏膜上皮更新后，抗HpIgA即不再产生，因此随着Hp的根除其含量迅速下降，这使其明显的优于血清学检测，可用于判断Hp是否根除.
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抗Hp治疗后Hp是否根除的检测方法目前主要有以下几种:通过胃镜取活组织进行细菌培养、组织学检测、快速尿素酶试验和PCR检测等.这些方法均需要进行胃镜检查，有一定痛苦，患者不易接受，此外抗Hp治疗后Hp定植部位上移和Hp呈灶性分布易造成假阴性结果;14C和13C尿素呼吸试验，无创伤，患者依从性好，结果可靠，但是前者有一定的放射污染，后者价格昂贵，不易普及;血清Hp抗体测定在Hp根除后仍持续一段时间阳性，不能反映胃内当时Hp感染情况，因此不宜作为Hp是否根除的标志.我们的研究发现Hp根除后患者胃液内抗HpIgA含量和阳性率均显著下降，而未根除Hp者胃液中抗HpIgA无显著变化，说明胃液中抗HpIgA含量能反映当时胃内Hp感染情况，可作为Hp是否根除的判断标志.
4 参考文献1 Shibata H, Iimuro M, Uchiya N, Kawamori T, Nagaoka M, Ueyama S,Hashimoto S, Yokokura T, Sugimura T,Wakabayashi K. Preventive effects ofcladosiphon fucoidan against Helicobacter pylori infection in mongolian
, 百拇医药
gerbils. Helicobacter 2003;8:59-65
2 Welin M, Holmgren NM, Nilsson P, Enroth H. Statistical Model of theinteractions between Helicobacter pylori infection
and gastric cancer development.Helicobacter 2003;8:72-78
3 Rosenstock S, Jorgensen T, Bonnevie O, Andersen L. Risk factors forpeptic ulcer disease: a population based
prospective cohort study comprising 2416Danish adults. Gut 2003;52:186-193
, 百拇医药
4 Lan J, Xiong YY, Lin YX, Wang BC, Gong LL, Xu HS, Guo GS.Helicobacter pylori infection generated gastric cancer
through p53-Rb tumor-suppressor systemmutation and telomerase reactivation. World J Gastroenterol 2003;9:54-58
5 Niv Y. Family history of gastric cancer: Should we test and treatfor Helicobacter pylori? J Clin Gastroenterol
2003;36:204-208
6 Olafsson S, Hatlebakk JG, Berstad A. Patients with endoscopicgastritis and/or duodenitis improve markedly following
, http://www.100md.com
eradication of Helicobacter pylori,although less so than patients with ulcers. Scand J Gastroenterol 2002;37:1386-1394
7 Urakami Y, Sano T. Long-term follow-up of gastric metaplasia aftereradication of Helicobacter pylori. J Med Invest
2003;50:48-54
8 谢勇, 王崇文,祝金泉, 张昆和,周美珍. ELISA法检测Hp抗体的意义.新消化病学杂志 1997;5:203-204
9 谢勇,王崇文, 祝金泉,张昆和. 胃液抗幽门螺杆菌IgA测定及其临床意义.中华微生物学和免疫学杂志 1997;17:430-431
, 百拇医药
10 Hanvivatvong O, Tatiyakavee K, Thong-Ngam D, Pongpanich A,Chirathaworn C, Suwanagool P, Nunthapisud P,Kullavanijaya P. Detection of antibody inserum and secretion for the diagnosis of Helicobacter pyloriinfection.
J Med Assoc Thai 2002;85(Suppl 1):S383-388
11 Perez-Perez GI, Peek RM Jr, Atherton JC, Blaser MJ, Cover TL.Detection of anti-VacA antibody responses in serum
and gastric juice samples using type s1/m1and s2/m2 Helicobacter pylori VacA antigens. Clin Diagn Lab Immunol
, 百拇医药
1999;6:489-493
12 Futagami S, Takahashi H, Norose Y, Kobayashi M. Systemic and localimmune responses against Helicobacter pylori
urease in patients with chronic gastritis:distinct IgA and IgG productive sites. Gut 1998;43:168-175
13 张振华,李小宾, 袁美英,张德中, 陆德源,萧树东, 江绍基.胃黏膜活检标本中弯曲样细菌的检出.中华消化杂志
1985;5:231-233
14 Koizumi W, Tanabe S, Imaizumi H, Hibi K, Kida M, Ohida M, OkayasuI, Saigenji K. Effect of anti-Helicobacter pylori IgG
antibody titer following eradication ofHelicobacter pylori infection. Hepatogastroenterology 2003;50:293-296
15 王丕龙,余建平, 龚能平,李华平, 李宗明,杨致邦. 清除幽门螺杆菌过程中血清特异IgG,IgA, IgM的变化.第一届中国消
化系疾病学术周论文汇编, 1997:13-14, 百拇医药( 谢 勇, 吕农华, 黄德强, 陈 江, 徐 萍, 王崇文)
项目负责人:谢勇, 330006, 江西省南昌市永外正街17号,江西医学院一附院消化研究所. xieyong-med@163.net
收稿日期:2002-12-24 接受日期:2003-01-03
摘要
目的:为探讨胃液抗HpIgA测定对Hp根除治疗效果判断的价值.
方法:采用间接ELISA法检测了65患者Hp根除前后胃液抗HpIgA.
, 百拇医药
结果:(1)Hp根除后胃液抗HpIgA含量显著低于治疗前(0.465和0.173，P<0.001); (2)Hp根除后胃液抗HpIgA阳性率由治疗前的94.29%降至22.86 % (P<0.001); (3)Hp未根除者及Hp阴性者其胃液中抗HpIgA在治疗前后无显著差异(P >0.05).
结论:胃液中抗HpIgA含量能反映当时胃内Hp感染情况,可作为Hp是否根除的判断标志.
谢勇,吕农华, 黄德强,陈江, 徐萍,王崇文. 胃液抗HpIgA测定对Hp根除治疗效果的判断.世界华人消化杂志 2003;11(11):1818-1820
0 引言幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，简称Hp)感染与胃炎、消化性溃疡和胃癌的关系日益受到人们的重视[1-4]，根除Hp可改善胃黏膜炎症，预防溃疡复发，降低胃癌发病率[5-7]，因此监测抗Hp治疗效果具有重要意义.我们及国外许多学者的研究已证实Hp感染可刺激胃黏膜局部产生特异性抗HpIgA[8-12]，IgA的半衰期比IgG短，胃液中抗HpIgA是否会随着Hp的根除而消失这方面的研究报道不多.本文采用测定胃液中抗HpIgA用于Hp根除治疗后的监测，取得了良好的效果,现报道如下.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 随机选择本院胃镜检查者65例，经胃镜活检孔吸取胃液4-5mL，混有血液者弃用.胃液取出后立即用碳酸氢钠调pH至7，置-80°C待测，并取活检黏膜数块，做Hp培养、涂片革兰氏染色镜检Hp和病理检查.所有患者抗Hp治疗停药1mo后复查胃镜，复查时再次取胃液和黏膜做同样检查.
1.2方法
1.2.1 胃黏膜内Hp菌检测 活检黏膜直接涂片检查及Hp的分离培养鉴定均参照张振华etal [13] 所报道的方法.细菌培养阳性或涂片中见大量典型细菌者方确认阳性，二者均为阴性者方确认为阴性.
1.2.2 ELISA 方法 从患者胃黏膜中培养出的7株Hp菌分离纯化，超声粉碎后在4°C下15000 g离心30min，取上清蛋白定量后作抗原.该抗原用SDS-PAGE法分析主要蛋白带在120kD、63 kD、28kD、94 kD. 用50mg/mL的抗原包被聚苯乙稀反应板，用间接ELISA法测定，每板均设标准阳性和标准阴性对照，将二者A值比值作为质控，每板之间此值的变异系数小于5%.
, http://www.100md.com
1.2.3 吸收抑制试验 用7例在ELISA试验中高效价抗HpIgA的胃液混合后，分别用Hp，空肠弯曲菌(Cj)及大肠杆菌完整的细菌和Hp抗原吸收后，按上述方法做ELISA试验.
1.2.4 结果判断 结果用待测标本A值与标准阳性A值之比来表示.阳性临界值的确定:以20例Hp阴性者胃液经Hp菌特异黏咐后，按上述方法进行ELISA测定，以其均数加3倍标准差定为阳性临界值，该值大于或等于0.145为阳性.该方法与细菌学检测结果比较其特异性、敏感性和诊断符合率分别为92.9%、96.4 %和95.3%[9].
1.2.5 Hp根治方法及根除标准 洛赛克20mg，1次/d，甲硝唑200mg，3次/d，阿莫西林500mg，3次/d，2wk为1疗程.治疗结束后1mo复查胃镜，分别取胃体和胃窦黏膜做Hp检测，两处均阴性者为Hp根除.
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统计学处理 均数间比较用 t 检验，计数资料用x2检验.
2 结果
2.1 抗Hp治疗前后胃液中抗HpIgA变化 65例患者中55例阳性者经抗Hp治疗后35例Hp根除，其中27例胃液抗HpIgA为阴性，8例仍为阳性.20例Hp未根除者19例胃液中抗HpIgA为阳性，1例阴性，10例Hp阴性者复查时Hp仍为阴性.表1反映了治疗前后胃液中抗HpIgA变化. 经抗Hp治疗Hp根除后其胃液抗HpIgA含量和阳性率显著低于治疗前(P<0.001)，而Hp未根除者及Hp阴性者其胃液中抗HpIgA在治疗前后无显著差异(P>0.05). 另外胃液抗HpIgA含量，在治疗前Hp根除组与未根除组之间无差异(P>0.05)，与Hp阴性组之间有显著差异(P<0.01)，而治疗后已根除组显著低于未根除组(P<0.01)，虽稍高于Hp阴性组，但无统计学意义(P>0.05).
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表1 抗Hp治疗前后胃液抗HpIgA结果比较
| 组别 | n | 治疗前 | 治疗后 | P值 | ||
| 阳性数 (%) | 阳性数 (%) | |||||
| Hp已根除 | 35 | 0.465±0.184 | 33 (94.29) | 0.173±0.074 | 8 (22.86) | <0.001 |
| Hp未根除 | 20 | 0.458±0.197 | 19 (95) | 0.474±0.201 | 19 (95) | >0.05 |
| Hp阴性 | 10 | 0.113±0.039 | 1 (10) | 0.109±0.035 | 1 (10) | >0.05 |
, http://www.100md.com 2.2吸收抑制试验结果 无论是完整的Hp菌还是超声粉碎提取的Hp抗原与Hp阳性者胃液共同温育后都能使胃液中抗HpIgA效价明显下降，而用大肠杆菌和Cj吸收后的血清和胃液抗体仅有少许下降，此结果证明本试验具有特异性.
3 讨论Hp感染不但可引起机体的全身免疫反应，而且可引起胃肠道的局部免疫反应，我们以前的研究[8,9]表明胃液中抗HpIgA可准确反映内胃内Hp感染情况，其对Hp感染诊断的特异性.敏感性和诊断符合率均高于血清学诊断.Hanvivatvong et al [10]的研究也表明胃液中抗HpIgA诊断Hp感染具有较高的特异性.Perez-Perez et al [11]的研究也发现s1/m1型VacA阳性的Hp感染者，胃液中含有高水平的抗VacAIgA. 而本研究进一步表明胃液中抗HpIgA与血清中Hp抗体不同，Hp根除1mo后，胃液内抗HpIgA迅速下降，降幅在60%以上. Koizumiet al [14]观察了Hp根除前后血清中抗HpIgG水平变化，结果Hp成功根除后3mo，血清中抗HpIgG下降约50 %，可见Hp根除后血液中抗HpIgG含量下降的速度明显比胃液中抗HpIgA慢，这可能是由于IgA在体内的半衰期短.王丕龙etal [15]的研究表明血清中IgA的变化较IgG快也证实了这一点.此外胃液中抗HpIgA为分泌型，其由胃黏膜内的浆细胞分泌，而胃黏膜上皮更新快，当Hp根除后，抗原刺激不再存在，原有的黏膜上皮更新后，抗HpIgA即不再产生，因此随着Hp的根除其含量迅速下降，这使其明显的优于血清学检测，可用于判断Hp是否根除.
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抗Hp治疗后Hp是否根除的检测方法目前主要有以下几种:通过胃镜取活组织进行细菌培养、组织学检测、快速尿素酶试验和PCR检测等.这些方法均需要进行胃镜检查，有一定痛苦，患者不易接受，此外抗Hp治疗后Hp定植部位上移和Hp呈灶性分布易造成假阴性结果;14C和13C尿素呼吸试验，无创伤，患者依从性好，结果可靠，但是前者有一定的放射污染，后者价格昂贵，不易普及;血清Hp抗体测定在Hp根除后仍持续一段时间阳性，不能反映胃内当时Hp感染情况，因此不宜作为Hp是否根除的标志.我们的研究发现Hp根除后患者胃液内抗HpIgA含量和阳性率均显著下降，而未根除Hp者胃液中抗HpIgA无显著变化，说明胃液中抗HpIgA含量能反映当时胃内Hp感染情况，可作为Hp是否根除的判断标志.
4 参考文献1 Shibata H, Iimuro M, Uchiya N, Kawamori T, Nagaoka M, Ueyama S,Hashimoto S, Yokokura T, Sugimura T,Wakabayashi K. Preventive effects ofcladosiphon fucoidan against Helicobacter pylori infection in mongolian
, 百拇医药
gerbils. Helicobacter 2003;8:59-65
2 Welin M, Holmgren NM, Nilsson P, Enroth H. Statistical Model of theinteractions between Helicobacter pylori infection
and gastric cancer development.Helicobacter 2003;8:72-78
3 Rosenstock S, Jorgensen T, Bonnevie O, Andersen L. Risk factors forpeptic ulcer disease: a population based
prospective cohort study comprising 2416Danish adults. Gut 2003;52:186-193
, 百拇医药
4 Lan J, Xiong YY, Lin YX, Wang BC, Gong LL, Xu HS, Guo GS.Helicobacter pylori infection generated gastric cancer
through p53-Rb tumor-suppressor systemmutation and telomerase reactivation. World J Gastroenterol 2003;9:54-58
5 Niv Y. Family history of gastric cancer: Should we test and treatfor Helicobacter pylori? J Clin Gastroenterol
2003;36:204-208
6 Olafsson S, Hatlebakk JG, Berstad A. Patients with endoscopicgastritis and/or duodenitis improve markedly following
, http://www.100md.com
eradication of Helicobacter pylori,although less so than patients with ulcers. Scand J Gastroenterol 2002;37:1386-1394
7 Urakami Y, Sano T. Long-term follow-up of gastric metaplasia aftereradication of Helicobacter pylori. J Med Invest
2003;50:48-54
8 谢勇, 王崇文,祝金泉, 张昆和,周美珍. ELISA法检测Hp抗体的意义.新消化病学杂志 1997;5:203-204
9 谢勇,王崇文, 祝金泉,张昆和. 胃液抗幽门螺杆菌IgA测定及其临床意义.中华微生物学和免疫学杂志 1997;17:430-431
, 百拇医药
10 Hanvivatvong O, Tatiyakavee K, Thong-Ngam D, Pongpanich A,Chirathaworn C, Suwanagool P, Nunthapisud P,Kullavanijaya P. Detection of antibody inserum and secretion for the diagnosis of Helicobacter pyloriinfection.
J Med Assoc Thai 2002;85(Suppl 1):S383-388
11 Perez-Perez GI, Peek RM Jr, Atherton JC, Blaser MJ, Cover TL.Detection of anti-VacA antibody responses in serum
and gastric juice samples using type s1/m1and s2/m2 Helicobacter pylori VacA antigens. Clin Diagn Lab Immunol
, 百拇医药
1999;6:489-493
12 Futagami S, Takahashi H, Norose Y, Kobayashi M. Systemic and localimmune responses against Helicobacter pylori
urease in patients with chronic gastritis:distinct IgA and IgG productive sites. Gut 1998;43:168-175
13 张振华,李小宾, 袁美英,张德中, 陆德源,萧树东, 江绍基.胃黏膜活检标本中弯曲样细菌的检出.中华消化杂志
1985;5:231-233
14 Koizumi W, Tanabe S, Imaizumi H, Hibi K, Kida M, Ohida M, OkayasuI, Saigenji K. Effect of anti-Helicobacter pylori IgG
antibody titer following eradication ofHelicobacter pylori infection. Hepatogastroenterology 2003;50:293-296
15 王丕龙,余建平, 龚能平,李华平, 李宗明,杨致邦. 清除幽门螺杆菌过程中血清特异IgG,IgA, IgM的变化.第一届中国消
化系疾病学术周论文汇编, 1997:13-14, 百拇医药( 谢 勇, 吕农华, 黄德强, 陈 江, 徐 萍, 王崇文)
