ELISA法与Hp SA免疫快检卡检测幽门螺杆菌粪便抗原的比较
王雷,李宜辉, 张鹏彬,柏健鹰, 达四平,郭红, 樊超强,赵晓晏,中国人民解放军第三军医大学附属新桥医院消化内科重庆市 400037
项目负责人:赵晓晏,400037, 重庆市,中国人民解放军第三军医大学附属新桥医院消化内科. zhaoxiaoyan@mail.tmmu.com.cn
电话:023-68774604
收稿日期:2003-11-13 接受日期:2003-12-16
摘要
目的:比较ELISA法(enzymeimmunoassay)与HpSA免疫快检卡(immunoCard STAT Hp SA)检测幽门螺杆菌粪便抗原(HpSA)的准确性和可靠性.
, 百拇医药
方法:以14C呼吸试验和快速尿素酶(rapidurease test，RUT)阳性为“金标准”，ELISA法和HpSA免疫快检卡检测HpSA阳性率和阴性率分别与“金标准”进行比较.
结果:与“金标准”相比，ELISA法敏感性为83.3%(5/6)，特异性为88.3%(30/34);Hp SA免疫快检卡的敏感性为 92.3%(12/13)，特异性为92.6%(25/27).
结论:无论是HpSA免疫快检卡还是ELISA法检测HpSA，都具备良好的敏感性和特异性.
王雷, 李宜辉,张鹏彬, 柏健鹰,达四平, 郭红,樊超强, 赵晓晏.ELISA法与HpSA免疫快检卡检测幽门螺杆菌粪便抗原的比较.世界华人消化杂志 2004;12(5):1235-1237
, 百拇医药
0 引言幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，Hp)非侵入性检查因其无痛苦、便捷等优势越来越为临床医生及患者接受成为检测Hp的主要方法[1].目前临床Hp非侵入性检查常用方法包括Hp血清抗体检测、13C或14C呼气试验、幽门螺杆菌粪便抗原(HpSA)检测等. 其中13C、14C呼气试验准确可靠，其与诊断Hp感染的“金标准”，组织学检查、RUT和细菌分离培养的准确性和可靠性相似[1-5]，但是13C呼气试验价格昂贵，14C存在一定放射性[6];Hp血清抗体检测不能证实是否存在Hp现症感染，因此，其应用受到一定限制.Hp SA检测安全性高、可操作性强，比上述两种方法更易推广普及.本研究对比了ELISA法与HpSA免疫快检卡检测HpSA的准确性和可靠性，旨在评价两种方法的临床价值.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1材料 2003-03/2003-08月在我院消化科住院患者80例，19-72岁，男56例，女24例，不考虑检查前是否服用过抗生素、铋剂或质子泵抑制剂，随机分为两组.一组为HpSA免疫快检卡法;一组为ELISA法，每组40例.所有病例常规14C呼吸试验和胃镜检查并留取组织行RUT检查证实是否存在Hp感染并以此为“金标准”，同时留取大便标本.Hp SA免疫快检卡法组留取的大便标本立即测定幽门螺杆菌抗原，ELISA法组留取大便标本在-70°C保存，直至测定HpAg.
1.2方法采用北京九强公司提供的美鼎生物有限公司(MeridianBioscience，Inc)幽门螺杆菌检测酶联免疫试剂盒及HpSA免疫快检卡(immunocardstat Hp SA)进行试验.(1)操作步骤:留取患者胃镜检查、14C呼气试验当日或次日早晨的粪便.(2)Hp SA免疫快检卡法检测用试剂盒自带的涂抹棒移取直径在5-6mm的粪便标本至稀释液，震荡15s; 滴加4滴标本稀释液到试剂卡一端的圆孔，5min后读取结果;阳性、阴性判断结果参照试剂盒说明书.(3)ELISA法检测:取直径约5-6mm充分混匀的粪便标本，置入12mm×75 mm试管，加入50uL样本稀释液，充分混匀，振荡15s. 在抗体包被的微孔板固定好微孔并标记固定，在各微孔中加入50uL已经稀释的粪便，设阳性和阴性对照各一孔.随后加入酶结合物，振荡30s，用微孔条密封器封严，22-27°C孵育1h. 洗板4次，加入两滴底物溶液，振荡30s，22-27°C孵育10min，加入一滴终止液振荡30s后在Bio RadModel 550型酶标仪450/630nm测定吸光光度值，按试剂盒标准判定结果.
, 百拇医药
2 结果
2.1 Hp SA免疫快检卡检测粪便HpSA与14C呼气试验和RUT阳性率比较根据Hp检测“金标准”(即14C呼气试验和RUT阳性者)诊断阳性病例13例，阴性病例27例.Hp SA免疫快检卡检测HpSA阳性14例，阴性26例，与“金标准”比较，HpSA免疫快检卡检测粪便HpSA的敏感性为 92.3%(12/13)，特异性为92.6%(25/27);其阳性预测值为85.7%(12/14);阴性预测值为96.2%(25/26)，其准确度为92.5%(37/40).“金标准”的阳性率为32.5%(13/40);Hp SA免疫快检卡的阳性率为35.0%(14/40)，二者阳性率比较无显著性差异(P>0.05)(表1).
表1 40例患者粪便抗原免疫快检卡检测结果
, 百拇医药
ELISA法检测HpSA与14C呼吸试验和RUT阳性率比较“金标准”阳性病例及阴性病例选择参照上述方法.ELISA法检测HpSA阳性病例9例，阴性病例31例，与“金标准”比较，ELISA法检测HpSA的敏感性为83.3%(5/6)，特异性为88.3%(30/34);其阳性预测值为55.6%(5/9);阴性预测值为96.8%(30/31)，其准确度为87.5%(35/40).“金标准”的阳性率为15.0%(6/40);Hp SA免疫快检卡的阳性率为22.5%(9/40). 二者阳性率比较无显著性差异(P>0.05)(表2).
表2 40例患者粪便抗原ELISA法检测结果
, 百拇医药
3 讨论Hp感染的实验诊断包括侵袭性和非侵袭性两类，前者包括胃镜检查取活检组织标本作切片染色、细菌分离培养和RUT，这三项检查认为是Hp感染的“金标准”.此外活检组织PCR扩增法[6-8].这类方法带有创伤性，尤其不适合孕妇、老人、儿童，且其结果受Hp感染灶在胃黏膜分布不均匀的影响，易造成假阳性;后者包括Hp血清抗体检测、13C或14C呼气试验、HpSA检测等[6].近年来随着13C或14C呼气试验广泛开展，已经证实呼气试验与“金标准”之间特异性及敏感性相似，因此近来亦有研究将13C或14C呼气试验作为“金标准”.粪便HpSA检测的方法首先见于1997年美国胃肠病周会议报道，1999年Changet al首先报道粪便中存在幽门螺杆菌特异性抗原成分，并认为检测HpSA是一种简便、精确、无创的诊断方法[1,9-15]. Hp SA免疫快检卡检测Hp其阳性率与“金标准”无显著差异，但是ELISA法阳性率较“金标准”增高.我们认为这可能两种方法选用的Hp抗体有关，前者为Hp特异性单克隆抗体，而后者为多克隆抗体，因此，ELISA法更宜出现假阳性结果[9-10].这也提示ELISA法更易用于Hp的筛选，而HpSA免疫快检卡则更易应用于Hp根除后的检测.无论是HpSA免疫快检卡还是ELISA法检测HpSA，都具备良好的敏感性和特异性.与已有文献报道的敏感度和特异性相似.两种方法之间比较，其特异性和敏感性无显著性差异.本研究中两种方法的阳性预测值偏低，阴性预测值偏高，考虑与所选择病例为几经就医患者，院外多数服用过PPI、铋剂或抗生素导致Hp的感染率太低有关.但是就两种方法比较而言，ELISA法的阳性预测值明显低于HpSA免疫快检卡法，一定程度上说明HpSA免疫快检卡法对辅助诊断Hp感染和治疗监测有更好的临床价值.但是，ELISA法价格相对便宜，材料更加节省，更有利于在相对贫困地区普及.
, 百拇医药
总之，这两种方法操作简单，标本来源方便，特别适合于儿童、孕妇、老年人等不宜行胃镜检查的患者.因此，ELISA法和HpSA免疫快检卡法值得临床推广应用.
4 参考文献1 Chang PS, Ni YH, Chang MH. Household Helicobacter pylori antibodysurvey in children with upper gastrointestinal
symptoms. Acta Paediatr Taiwan2003;44:336-338
2 Coppola N, De Stefano G, Marrocco C, Scarano F, Scolastico C,Tarantino L, Rossi G, Battaglia M, Onofrio M, D’AnielloF,Pisapia R,Sagnelli C, Sagnelli E, Piccinino F, Giorgio A, Filippini P. Helicobacterspp. and liver diseases. Infez Med
, 百拇医药
2003;4:201-207
3 Abbasciano V, Sartori S, Trevisani L, Girometti R, Ranzini M,Nielsen I, Mazzotta D, Vecchiatti G, Bononi A, Guglielmini C.
Comparison of magnesium concentration inserum, erythrocytes and gastric tissue in two groups of patients affectedby
chronic gastritis, Helicobacter pylorinegative and positive. Magnes Res 2003;16:281-286
4 Mittal SK, Mathew JL. Helicobacter pylori infection in children: areview. Trop Gastroenterol 2003;24:106-115
, 百拇医药
5 Rieder G, Hofmann JA, Hatz RA, Stolte M, Enders GA. Up-regulationof inducible nitric oxide synthase in Helicobacter
pylori-associated gastritis may representan increased risk factor to develop gastric carcinoma of the intestinaltype. Int
J Med Microbiol 2003;293:403-412
6 Okuda M, Nakazawa T, Booka M, Miyashiro E, Yosikawa N. Evaluationof a urine antibody test for Helicobacter pylori in
, http://www.100md.com
Japanese children. J Pediatr 2004;144:196-199
7 Tanaka I, Tatsumi Y, Kodama T, Kato K, Fujita S, Mitsufuji S,Kashima K. Effect of Helicobacter pylori eradication on
gastroesophageal function. J GastroenterolHepatol 2004;19:251-257
8 Ohata H, Kitauchi S, Yoshimura N, Mugitani K, Iwane M, Nakamura H,Yoshikawa A, Yanaoka K, Arii K, Tamai H, Shimizu Y,Takeshita T, Mohara O, Ichinose M.Progression of chronic atrophic gastritis associated with Helicobacterpylori infection
, 百拇医药
increases risk of gastric cancer. Int JCancer 2004;109:138-143
9 Goto H. Helicobacter pylori and gastric diseases. Nagoya J Med Sci2003;66:77-85
10 Wan Y, Xu YY, Jiang JH, Kong FS, Xue FB, Bai YX, Pan BR, Ren J, FanDM. Chinese literature associated with diagnosis of
Helicobacter pylori. World J Gastroenterol 2004;10:231-233
11 Zhang H, Fang DC, Wang RQ, Yang SM, Liu HF, Luo YH. Effect ofHelicobacter pylori infection on expression of Bcl-2 family
, 百拇医药
members in gastric adenocarcinoma. World JGastroenterol 2004;10:227-230
12 Ohara T, Morishita T, Suzuki H, Masaoka T, Ishii H. Perforin andgranzyme B of cytotoxic T lymphocyte mediate apoptosis
irrespective of Helicobacter pyloriinfection: possible act as a trigger of peptic ulcer formation.Hepatogastroenterology
2003;50:1774-1779
13 Kuniyasu H, Kitadai Y, Mieno H, Yasui W. Helicobactor pyloriinfection is closely associated with telomere reduction in
, 百拇医药
gastric mucosa. Oncology 2003;65:275-282
14 Garrido Serrano A, Lepe Jimenez JA, Guerrero Igea FJ, PerianesHernandez C. Helicobacter pylori and gastroesophageal
reflux disease. Rev Esp Enferm Dig2003;95:788-790
15 Majumdar SR, Soumerai SB, Farraye FA, Lee M, Kemp JA, Henning JM,Schrammel P, LeCates RF, Ross-Degnan D.
Chronic acid-related disorders are commonand underinvestigated. Am J Gastroenterol 2003;98:2409-2414, http://www.100md.com( 王 雷, 李宜辉, 张鹏彬, 柏健鹰, 达四平, 郭 红, 樊超强, 赵晓晏)
项目负责人:赵晓晏,400037, 重庆市,中国人民解放军第三军医大学附属新桥医院消化内科. zhaoxiaoyan@mail.tmmu.com.cn
电话:023-68774604
收稿日期:2003-11-13 接受日期:2003-12-16
摘要
目的:比较ELISA法(enzymeimmunoassay)与HpSA免疫快检卡(immunoCard STAT Hp SA)检测幽门螺杆菌粪便抗原(HpSA)的准确性和可靠性.
, 百拇医药
方法:以14C呼吸试验和快速尿素酶(rapidurease test，RUT)阳性为“金标准”，ELISA法和HpSA免疫快检卡检测HpSA阳性率和阴性率分别与“金标准”进行比较.
结果:与“金标准”相比，ELISA法敏感性为83.3%(5/6)，特异性为88.3%(30/34);Hp SA免疫快检卡的敏感性为 92.3%(12/13)，特异性为92.6%(25/27).
结论:无论是HpSA免疫快检卡还是ELISA法检测HpSA，都具备良好的敏感性和特异性.
王雷, 李宜辉,张鹏彬, 柏健鹰,达四平, 郭红,樊超强, 赵晓晏.ELISA法与HpSA免疫快检卡检测幽门螺杆菌粪便抗原的比较.世界华人消化杂志 2004;12(5):1235-1237
, 百拇医药
0 引言幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，Hp)非侵入性检查因其无痛苦、便捷等优势越来越为临床医生及患者接受成为检测Hp的主要方法[1].目前临床Hp非侵入性检查常用方法包括Hp血清抗体检测、13C或14C呼气试验、幽门螺杆菌粪便抗原(HpSA)检测等. 其中13C、14C呼气试验准确可靠，其与诊断Hp感染的“金标准”，组织学检查、RUT和细菌分离培养的准确性和可靠性相似[1-5]，但是13C呼气试验价格昂贵，14C存在一定放射性[6];Hp血清抗体检测不能证实是否存在Hp现症感染，因此，其应用受到一定限制.Hp SA检测安全性高、可操作性强，比上述两种方法更易推广普及.本研究对比了ELISA法与HpSA免疫快检卡检测HpSA的准确性和可靠性，旨在评价两种方法的临床价值.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1材料 2003-03/2003-08月在我院消化科住院患者80例，19-72岁，男56例，女24例，不考虑检查前是否服用过抗生素、铋剂或质子泵抑制剂，随机分为两组.一组为HpSA免疫快检卡法;一组为ELISA法，每组40例.所有病例常规14C呼吸试验和胃镜检查并留取组织行RUT检查证实是否存在Hp感染并以此为“金标准”，同时留取大便标本.Hp SA免疫快检卡法组留取的大便标本立即测定幽门螺杆菌抗原，ELISA法组留取大便标本在-70°C保存，直至测定HpAg.
1.2方法采用北京九强公司提供的美鼎生物有限公司(MeridianBioscience，Inc)幽门螺杆菌检测酶联免疫试剂盒及HpSA免疫快检卡(immunocardstat Hp SA)进行试验.(1)操作步骤:留取患者胃镜检查、14C呼气试验当日或次日早晨的粪便.(2)Hp SA免疫快检卡法检测用试剂盒自带的涂抹棒移取直径在5-6mm的粪便标本至稀释液，震荡15s; 滴加4滴标本稀释液到试剂卡一端的圆孔，5min后读取结果;阳性、阴性判断结果参照试剂盒说明书.(3)ELISA法检测:取直径约5-6mm充分混匀的粪便标本，置入12mm×75 mm试管，加入50uL样本稀释液，充分混匀，振荡15s. 在抗体包被的微孔板固定好微孔并标记固定，在各微孔中加入50uL已经稀释的粪便，设阳性和阴性对照各一孔.随后加入酶结合物，振荡30s，用微孔条密封器封严，22-27°C孵育1h. 洗板4次，加入两滴底物溶液，振荡30s，22-27°C孵育10min，加入一滴终止液振荡30s后在Bio RadModel 550型酶标仪450/630nm测定吸光光度值，按试剂盒标准判定结果.
, 百拇医药
2 结果
2.1 Hp SA免疫快检卡检测粪便HpSA与14C呼气试验和RUT阳性率比较根据Hp检测“金标准”(即14C呼气试验和RUT阳性者)诊断阳性病例13例，阴性病例27例.Hp SA免疫快检卡检测HpSA阳性14例，阴性26例，与“金标准”比较，HpSA免疫快检卡检测粪便HpSA的敏感性为 92.3%(12/13)，特异性为92.6%(25/27);其阳性预测值为85.7%(12/14);阴性预测值为96.2%(25/26)，其准确度为92.5%(37/40).“金标准”的阳性率为32.5%(13/40);Hp SA免疫快检卡的阳性率为35.0%(14/40)，二者阳性率比较无显著性差异(P>0.05)(表1).
表1 40例患者粪便抗原免疫快检卡检测结果
| 方法 | Hp“金标准”检测 | 合计 | |
| 阳性 | 阴性 | ||
| 免疫快检卡检测阳性 | 12 | 2 | 14 |
| 免疫快检卡检测阴性 | 1 | 25 | 26 |
| 合计 | 13 | 27 | 40 |
, 百拇医药
ELISA法检测HpSA与14C呼吸试验和RUT阳性率比较“金标准”阳性病例及阴性病例选择参照上述方法.ELISA法检测HpSA阳性病例9例，阴性病例31例，与“金标准”比较，ELISA法检测HpSA的敏感性为83.3%(5/6)，特异性为88.3%(30/34);其阳性预测值为55.6%(5/9);阴性预测值为96.8%(30/31)，其准确度为87.5%(35/40).“金标准”的阳性率为15.0%(6/40);Hp SA免疫快检卡的阳性率为22.5%(9/40). 二者阳性率比较无显著性差异(P>0.05)(表2).
表2 40例患者粪便抗原ELISA法检测结果
| 方法 | Hp“金标准”检测 | 合计 | |
| 阳性 | 阴性 | ||
| ELISA法阳性 | 5 | 4 | 9 |
| ELISA法阴性 | 1 | 30 | 31 |
| 合计 | 6 | 34 | 40 |
, 百拇医药
3 讨论Hp感染的实验诊断包括侵袭性和非侵袭性两类，前者包括胃镜检查取活检组织标本作切片染色、细菌分离培养和RUT，这三项检查认为是Hp感染的“金标准”.此外活检组织PCR扩增法[6-8].这类方法带有创伤性，尤其不适合孕妇、老人、儿童，且其结果受Hp感染灶在胃黏膜分布不均匀的影响，易造成假阳性;后者包括Hp血清抗体检测、13C或14C呼气试验、HpSA检测等[6].近年来随着13C或14C呼气试验广泛开展，已经证实呼气试验与“金标准”之间特异性及敏感性相似，因此近来亦有研究将13C或14C呼气试验作为“金标准”.粪便HpSA检测的方法首先见于1997年美国胃肠病周会议报道，1999年Changet al首先报道粪便中存在幽门螺杆菌特异性抗原成分，并认为检测HpSA是一种简便、精确、无创的诊断方法[1,9-15]. Hp SA免疫快检卡检测Hp其阳性率与“金标准”无显著差异，但是ELISA法阳性率较“金标准”增高.我们认为这可能两种方法选用的Hp抗体有关，前者为Hp特异性单克隆抗体，而后者为多克隆抗体，因此，ELISA法更宜出现假阳性结果[9-10].这也提示ELISA法更易用于Hp的筛选，而HpSA免疫快检卡则更易应用于Hp根除后的检测.无论是HpSA免疫快检卡还是ELISA法检测HpSA，都具备良好的敏感性和特异性.与已有文献报道的敏感度和特异性相似.两种方法之间比较，其特异性和敏感性无显著性差异.本研究中两种方法的阳性预测值偏低，阴性预测值偏高，考虑与所选择病例为几经就医患者，院外多数服用过PPI、铋剂或抗生素导致Hp的感染率太低有关.但是就两种方法比较而言，ELISA法的阳性预测值明显低于HpSA免疫快检卡法，一定程度上说明HpSA免疫快检卡法对辅助诊断Hp感染和治疗监测有更好的临床价值.但是，ELISA法价格相对便宜，材料更加节省，更有利于在相对贫困地区普及.
, 百拇医药
总之，这两种方法操作简单，标本来源方便，特别适合于儿童、孕妇、老年人等不宜行胃镜检查的患者.因此，ELISA法和HpSA免疫快检卡法值得临床推广应用.
4 参考文献1 Chang PS, Ni YH, Chang MH. Household Helicobacter pylori antibodysurvey in children with upper gastrointestinal
symptoms. Acta Paediatr Taiwan2003;44:336-338
2 Coppola N, De Stefano G, Marrocco C, Scarano F, Scolastico C,Tarantino L, Rossi G, Battaglia M, Onofrio M, D’AnielloF,Pisapia R,Sagnelli C, Sagnelli E, Piccinino F, Giorgio A, Filippini P. Helicobacterspp. and liver diseases. Infez Med
, 百拇医药
2003;4:201-207
3 Abbasciano V, Sartori S, Trevisani L, Girometti R, Ranzini M,Nielsen I, Mazzotta D, Vecchiatti G, Bononi A, Guglielmini C.
Comparison of magnesium concentration inserum, erythrocytes and gastric tissue in two groups of patients affectedby
chronic gastritis, Helicobacter pylorinegative and positive. Magnes Res 2003;16:281-286
4 Mittal SK, Mathew JL. Helicobacter pylori infection in children: areview. Trop Gastroenterol 2003;24:106-115
, 百拇医药
5 Rieder G, Hofmann JA, Hatz RA, Stolte M, Enders GA. Up-regulationof inducible nitric oxide synthase in Helicobacter
pylori-associated gastritis may representan increased risk factor to develop gastric carcinoma of the intestinaltype. Int
J Med Microbiol 2003;293:403-412
6 Okuda M, Nakazawa T, Booka M, Miyashiro E, Yosikawa N. Evaluationof a urine antibody test for Helicobacter pylori in
, http://www.100md.com
Japanese children. J Pediatr 2004;144:196-199
7 Tanaka I, Tatsumi Y, Kodama T, Kato K, Fujita S, Mitsufuji S,Kashima K. Effect of Helicobacter pylori eradication on
gastroesophageal function. J GastroenterolHepatol 2004;19:251-257
8 Ohata H, Kitauchi S, Yoshimura N, Mugitani K, Iwane M, Nakamura H,Yoshikawa A, Yanaoka K, Arii K, Tamai H, Shimizu Y,Takeshita T, Mohara O, Ichinose M.Progression of chronic atrophic gastritis associated with Helicobacterpylori infection
, 百拇医药
increases risk of gastric cancer. Int JCancer 2004;109:138-143
9 Goto H. Helicobacter pylori and gastric diseases. Nagoya J Med Sci2003;66:77-85
10 Wan Y, Xu YY, Jiang JH, Kong FS, Xue FB, Bai YX, Pan BR, Ren J, FanDM. Chinese literature associated with diagnosis of
Helicobacter pylori. World J Gastroenterol 2004;10:231-233
11 Zhang H, Fang DC, Wang RQ, Yang SM, Liu HF, Luo YH. Effect ofHelicobacter pylori infection on expression of Bcl-2 family
, 百拇医药
members in gastric adenocarcinoma. World JGastroenterol 2004;10:227-230
12 Ohara T, Morishita T, Suzuki H, Masaoka T, Ishii H. Perforin andgranzyme B of cytotoxic T lymphocyte mediate apoptosis
irrespective of Helicobacter pyloriinfection: possible act as a trigger of peptic ulcer formation.Hepatogastroenterology
2003;50:1774-1779
13 Kuniyasu H, Kitadai Y, Mieno H, Yasui W. Helicobactor pyloriinfection is closely associated with telomere reduction in
, 百拇医药
gastric mucosa. Oncology 2003;65:275-282
14 Garrido Serrano A, Lepe Jimenez JA, Guerrero Igea FJ, PerianesHernandez C. Helicobacter pylori and gastroesophageal
reflux disease. Rev Esp Enferm Dig2003;95:788-790
15 Majumdar SR, Soumerai SB, Farraye FA, Lee M, Kemp JA, Henning JM,Schrammel P, LeCates RF, Ross-Degnan D.
Chronic acid-related disorders are commonand underinvestigated. Am J Gastroenterol 2003;98:2409-2414, http://www.100md.com( 王 雷, 李宜辉, 张鹏彬, 柏健鹰, 达四平, 郭 红, 樊超强, 赵晓晏)
