组织E-钙黏附素变化与结直肠癌根治手术的关系
蔡诚忠,许洪卫, 童晓晨,上海同济大学附属铁路医院普通外科 上海市 200072
项目负责人:许洪卫,200072, 上海市,上海同济大学附属铁路医院普通外科.
收稿日期:2004-02-07 接受日期:2004-03-24
摘要
目的:通过检测结直肠癌患者血清E-钙黏附素(E-Cd)浓度和组织E-Cd的mRNA水平，探讨E-Cd与结直肠癌浸润和转移的关联性.
方法:应用酶联免疫黏附方法测定 28例结直肠癌患者血清可溶性E-Cd浓度;应用点杂交法和计算机灰度扫描分析组织的mRNA灰度均值.
, http://www.100md.com
结果:结直肠癌组血清E-Cd浓度显著高于对照组(P<0.001)，DukesC组或有淋巴结转移组明显高于DukesA、B组或无淋巴结转移组(P均<0.05)，切除瘤体后上述各组的血清E-Cd浓度均明显下降(P<0.01-0.05). 各组的组织E-CdmRNA均值变化与血清E-Cd浓度的一致，且两指标间具有明显的相关性(P<0.05).
结论:血清、组织E-Cd可能与人结直肠癌的浸润深度和淋巴结转移密切相关.
蔡诚忠,许洪卫, 童晓晨.血清, 组织E-钙黏附素变化与结直肠癌根治手术的关系.世界华人消化杂志 2004;12(6):1481-1483
0 引言E-钙黏附素(epithelialcadherin，E-Cd)又称上皮钙黏附素，属钙黏附素超家族经典亚族成员[1]，他的表达程度与功能活性状态直接影响着肿瘤细胞的脱离和再附着(1)本文通过检测结直肠癌患者血清E-Cd浓度和组织E-Cd的mRNA水平，旨在探讨结直肠癌侵袭性和根治手术对E-Cd水平的影响.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 选择确诊的结直肠癌患者28例，据病理报告和手术中探查结果，按Dukes分期和淋巴结转移情况分组(见表1).所有患者术前检查未发现心、肝、肺、肾等重要脏器的器质性病变，由同一组医师施行结直肠癌根治术.术前和术后1wk未行放疗、化疗或生物治疗.另择34名健康献血员作为对照组.所有被检者年龄在78-31岁之间，男女比为2:1，各组间的年龄均数均无显著性差异(P >0.05). 结直肠癌组取样时间为术前1wk内、术后5-7d.
1.2 方法 取被检者的空腹周边静脉血3mL，用酶联免疫黏附法(ELISA)复管测定血清E-Cd ,其检测药盒购自Sigma公司，具体方法参见Chanet al [2]报道.取新鲜结直肠癌及距癌边缘5cm以上的非肿瘤组织标本，经液氮速冻后置-80°C保存;异硫氰酸胍一步法抽提组织RNA，以人类E-CdcDNA(地高辛标记)探针作点杂交(dotblot)分析，所得结果经计算机灰度扫描并自动测算出每个斑点的平均灰度均值(反映mRNA相对水平).所有数据以mean±SD表示，用t检验等进行统计处理.
, http://www.100md.com
2 结果术前结直肠癌组血清E-Cd浓度显著高于对照组(P< 0.001)，DukesC组或有淋巴结转移组分别明显高于DukesA、B组或无淋巴结转移组(P均<0.05); 结直肠癌患者术后各组的血清E-Cd浓度均明显低于术前(P<0.01- 0.05)，但各组间的差异无显著意义(P>0.05)，术后结直肠癌组血清E-Cd浓度与对照组亦无明显统计学差异(P>0.05)，见(表1).
表1 62例被检者血清E-Cd浓度(mg/L,mean±SD)
, 百拇医药
图1(PDF)各组标本EcdmRNA均值比较图.
结直肠癌组(原发灶)的E-CdmRNA灰度均值(215±47)明显高于非肿瘤组织组(71±19，n=28，P<0.01，后同)，DukesC组(265±59)或伴有淋巴结转移组(280±65)分别明显高于DukesA、B组(138±39)或无淋巴结转移组(147±43，P均<0.05)，见(图1).结直肠癌组织E-CdmRNA水平与血清E-Cd浓度之间具有明显的正相关性(r=0.782，P<0.05).
3 讨论肿瘤浸润、转移等恶性表型系瘤细胞与细胞外基质相互作用的结果，其关键步骤是瘤细胞脱离原发灶并再附着转移部位.E-Cd等钙黏附素主要介导正常和肿瘤组织中细胞与细胞间的黏附[3].目前对E-Cd表达的研究涉及多种人体肿瘤，包括结直肠癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌等[4].尤其是国外一些研究小组据业与购建的E-CdcDNA文库，采用先进的分子生物学方法，对结直肠癌等恶性肿瘤所进行的一系列实验和临床研究表明，E-Cd失活或基因突变与其侵袭性密切相关[4].
, 百拇医药
血清可溶性E-Cd系细胞内E-Cd的降解物，是一种分子量为80kDa的多肽. 他存在于正常人的血循环中，文献报道其浓度为2.5-5.6mg/L之间; 但恶性肿瘤患者中的浓度明显升高，介于4.7-9.3mg/L之间[2].有关结直肠癌患者的血清E-Cd浓度检测，所见报道不多[5].本研究结直肠癌组的E-Cd浓度(8.91±1.65mg/L)显著高于对照组(3.73±0.75mg/L)，Dukes C组或有淋巴结转移组血清E-Cd浓度明显高于DukesA、B组或无淋巴结转移组，切除原发灶后上述两组的指标均明显下降，提示血清E-Cd浓度可能与人结直肠癌的浸润深度和淋巴结转移密切相关.与Chan et al[2]对胃癌的研究结果一致，他们发现胃癌患者血清可溶性E-Cd浓度的对数均值显著高于对照组，且该指标的升高与胃癌的生长方式和远处转移密切相关.
一般将原发灶E-Cd的表达状况归结为4种类型[4]:(1)全部瘤细胞同质性地显著表达E-Cd;(2)瘤体内局灶性减低表达使E-Cd表达呈异质性分布，或瘤体内均匀性降低;(3)E-Cd表达完全缺失;(4) 瘤细胞虽然能表达E-Cd却未能相互黏附.大多数肿瘤属于前两型.本文采用的点杂交法测定组织E-CdmRNA的相对水平，较免疫组化法更能反映E-Cd的生物活性.所得结果表明，DukesC型或伴有淋巴结转移的原发灶，其 E-CdmRNA表达水平分别明显高于DukesA、B型或无淋巴结转移者.提示原发灶E-Cd表达水平也影响着结直肠癌的浸润深度和淋巴结转移.与文献[6]报道一致，该文作者们应用免疫组化和原位杂交两种方法，对30例散发性结直肠癌标本同时检测后发现，无论是E-Cd的蛋白质表达还是mRNA表达水平，其原发灶均较非肿瘤组织明显升高.但有作者认为，人和鼠结直肠癌组织中经免疫组化检测的E-Cd表达明显降低，且与Dukes分期无关[7]; 另一组作者则发现，不仅原发灶E-Cd表达明显降低，而且转移性淋巴结和肝转移灶中的E-Cd表达明显增强[8].造成上述相反结论的原因尚不明了，可能与检测方法不同有关.
, 百拇医药
鉴于血清E-Cd浓度和组织E-Cd表达水平与结直肠癌的侵袭性密切相关，并且健康对照者的血清E-Cd浓度明显低于结直肠癌患者、以及邻近非肿瘤组织的E-CdmRNA水平显著低于结直肠癌组织.作者认为，全面分析纤维结肠镜活检组织或结直肠癌标本mRNA水平，同时结合检测血清E-Cd浓度，可能有助于评估结直肠癌的恶性演进状态，对该类患者的早期诊断、综合治疗和预后具有重要的指导意义.但E-Cd是否与结直肠癌特异性相关，以及E-Cd能否成为特异性肿瘤标记物，尚需从E-Cd的分子生物学等多方面作深入的探讨[7-8].
4 参考文献1 许洪卫,王元和, 高瀚.E-钙粘附素失活及其基因突变对恶性肿瘤侵袭倾向的影响.癌症杂志 1996;15:70-71
2 Chan AO, Lam SK, Chu KM, Lam CM, Kwok E, Leung SY, Yuen ST, Law SY,Hui HM, Lai KC, Wong CY, Hu HC, Lai CL,Wong J. Soluble E-cadherin is a validprognostic marker in gastric carcinoma. Gut 2001;48:808-801
, 百拇医药
3 许洪卫,王元和, 高瀚.E-钙黏附素基因突变与胃癌恶性表型.中国病理生理杂志 1997;13:751-755
4 许洪卫,王元和, 高瀚.E-钙黏附素失活及其基因突变与肿瘤细胞黏附和转移的关系. 肿瘤杂志 1998;18:57-66
5 Velikova G, Banks RE, Gearing A , Hemingway I, Forbes MA, PrestonSR, Hall NR, Jones M, Wyatt J, Miller K, Ward U,Al-Maskatti J, Singh SM, Finan PJ, AmbroseNS, Primrose JN, Selby PJ. Serum concentrations of soluble adhesion
molecules in patients with colorectalcancer. Br J Cancer 1998;77:1857-1863
, 百拇医药
6 El-Bahrawy MA, Poulsom R, Jeffery R, Talbot I, Alison MR. Theexpression of E-cadherin and catenins in sporadic
colorectal carcinoma. Hum Pathol 2001;32:1216-1240
7 Sloncova E, Fric P, Kucerova D, Lojda Z, Tuhackova Z, Sovova V.Changes of E-cadherin and beta-catenin in human and
mouse intestinal tumours. Histochem J 2001;33:13-20
8 Ikeguchi M, Makino M, Kaibara N. Clinical significance of E-cadherin-catenincomplex expression in metastatic foci of
colorectal carcinoma. J Surg Oncol2001;77:201-208, 百拇医药( 蔡诚忠, 许洪卫, 童晓晨)
项目负责人:许洪卫,200072, 上海市,上海同济大学附属铁路医院普通外科.
收稿日期:2004-02-07 接受日期:2004-03-24
摘要
目的:通过检测结直肠癌患者血清E-钙黏附素(E-Cd)浓度和组织E-Cd的mRNA水平，探讨E-Cd与结直肠癌浸润和转移的关联性.
方法:应用酶联免疫黏附方法测定 28例结直肠癌患者血清可溶性E-Cd浓度;应用点杂交法和计算机灰度扫描分析组织的mRNA灰度均值.
, http://www.100md.com
结果:结直肠癌组血清E-Cd浓度显著高于对照组(P<0.001)，DukesC组或有淋巴结转移组明显高于DukesA、B组或无淋巴结转移组(P均<0.05)，切除瘤体后上述各组的血清E-Cd浓度均明显下降(P<0.01-0.05). 各组的组织E-CdmRNA均值变化与血清E-Cd浓度的一致，且两指标间具有明显的相关性(P<0.05).
结论:血清、组织E-Cd可能与人结直肠癌的浸润深度和淋巴结转移密切相关.
蔡诚忠,许洪卫, 童晓晨.血清, 组织E-钙黏附素变化与结直肠癌根治手术的关系.世界华人消化杂志 2004;12(6):1481-1483
0 引言E-钙黏附素(epithelialcadherin，E-Cd)又称上皮钙黏附素，属钙黏附素超家族经典亚族成员[1]，他的表达程度与功能活性状态直接影响着肿瘤细胞的脱离和再附着(1)本文通过检测结直肠癌患者血清E-Cd浓度和组织E-Cd的mRNA水平，旨在探讨结直肠癌侵袭性和根治手术对E-Cd水平的影响.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 选择确诊的结直肠癌患者28例，据病理报告和手术中探查结果，按Dukes分期和淋巴结转移情况分组(见表1).所有患者术前检查未发现心、肝、肺、肾等重要脏器的器质性病变，由同一组医师施行结直肠癌根治术.术前和术后1wk未行放疗、化疗或生物治疗.另择34名健康献血员作为对照组.所有被检者年龄在78-31岁之间，男女比为2:1，各组间的年龄均数均无显著性差异(P >0.05). 结直肠癌组取样时间为术前1wk内、术后5-7d.
1.2 方法 取被检者的空腹周边静脉血3mL，用酶联免疫黏附法(ELISA)复管测定血清E-Cd ,其检测药盒购自Sigma公司，具体方法参见Chanet al [2]报道.取新鲜结直肠癌及距癌边缘5cm以上的非肿瘤组织标本，经液氮速冻后置-80°C保存;异硫氰酸胍一步法抽提组织RNA，以人类E-CdcDNA(地高辛标记)探针作点杂交(dotblot)分析，所得结果经计算机灰度扫描并自动测算出每个斑点的平均灰度均值(反映mRNA相对水平).所有数据以mean±SD表示，用t检验等进行统计处理.
, http://www.100md.com
2 结果术前结直肠癌组血清E-Cd浓度显著高于对照组(P< 0.001)，DukesC组或有淋巴结转移组分别明显高于DukesA、B组或无淋巴结转移组(P均<0.05); 结直肠癌患者术后各组的血清E-Cd浓度均明显低于术前(P<0.01- 0.05)，但各组间的差异无显著意义(P>0.05)，术后结直肠癌组血清E-Cd浓度与对照组亦无明显统计学差异(P>0.05)，见(表1).
表1 62例被检者血清E-Cd浓度(mg/L,mean±SD)
| 项目 | n | 术前 | 术后 | |
| 对照组 | 34 | 3. 73±0. 75 | ||
| 结直肠癌组 | 28 | 8.91±1. 65 | P <0. 01 | 5. 17±1. 81 |
| 临床分期 Dukes C | 17 | 9. 83±1. 37 | P <0. 01 | 5. 69±0. 95 |
| P <0. 05 | P >0. 05 | |||
| Dukes A、B | 11 | 7. 49±1. 07 | P <0. 05 | 4. 37±0. 87 |
| 有淋巴结转移组 | 15 | 10. 65±1. 48 | P <0. 01 | 5. 38±1. 19 |
| P <0. 05 | P >0. 05 | |||
| 无淋巴结转移组 | 13 | 6. 90±1. 19 | P <0. 05 | 4. 93±0. 79 |
, 百拇医药
图1(PDF)各组标本EcdmRNA均值比较图.
结直肠癌组(原发灶)的E-CdmRNA灰度均值(215±47)明显高于非肿瘤组织组(71±19，n=28，P<0.01，后同)，DukesC组(265±59)或伴有淋巴结转移组(280±65)分别明显高于DukesA、B组(138±39)或无淋巴结转移组(147±43，P均<0.05)，见(图1).结直肠癌组织E-CdmRNA水平与血清E-Cd浓度之间具有明显的正相关性(r=0.782，P<0.05).
3 讨论肿瘤浸润、转移等恶性表型系瘤细胞与细胞外基质相互作用的结果，其关键步骤是瘤细胞脱离原发灶并再附着转移部位.E-Cd等钙黏附素主要介导正常和肿瘤组织中细胞与细胞间的黏附[3].目前对E-Cd表达的研究涉及多种人体肿瘤，包括结直肠癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌等[4].尤其是国外一些研究小组据业与购建的E-CdcDNA文库，采用先进的分子生物学方法，对结直肠癌等恶性肿瘤所进行的一系列实验和临床研究表明，E-Cd失活或基因突变与其侵袭性密切相关[4].
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血清可溶性E-Cd系细胞内E-Cd的降解物，是一种分子量为80kDa的多肽. 他存在于正常人的血循环中，文献报道其浓度为2.5-5.6mg/L之间; 但恶性肿瘤患者中的浓度明显升高，介于4.7-9.3mg/L之间[2].有关结直肠癌患者的血清E-Cd浓度检测，所见报道不多[5].本研究结直肠癌组的E-Cd浓度(8.91±1.65mg/L)显著高于对照组(3.73±0.75mg/L)，Dukes C组或有淋巴结转移组血清E-Cd浓度明显高于DukesA、B组或无淋巴结转移组，切除原发灶后上述两组的指标均明显下降，提示血清E-Cd浓度可能与人结直肠癌的浸润深度和淋巴结转移密切相关.与Chan et al[2]对胃癌的研究结果一致，他们发现胃癌患者血清可溶性E-Cd浓度的对数均值显著高于对照组，且该指标的升高与胃癌的生长方式和远处转移密切相关.
一般将原发灶E-Cd的表达状况归结为4种类型[4]:(1)全部瘤细胞同质性地显著表达E-Cd;(2)瘤体内局灶性减低表达使E-Cd表达呈异质性分布，或瘤体内均匀性降低;(3)E-Cd表达完全缺失;(4) 瘤细胞虽然能表达E-Cd却未能相互黏附.大多数肿瘤属于前两型.本文采用的点杂交法测定组织E-CdmRNA的相对水平，较免疫组化法更能反映E-Cd的生物活性.所得结果表明，DukesC型或伴有淋巴结转移的原发灶，其 E-CdmRNA表达水平分别明显高于DukesA、B型或无淋巴结转移者.提示原发灶E-Cd表达水平也影响着结直肠癌的浸润深度和淋巴结转移.与文献[6]报道一致，该文作者们应用免疫组化和原位杂交两种方法，对30例散发性结直肠癌标本同时检测后发现，无论是E-Cd的蛋白质表达还是mRNA表达水平，其原发灶均较非肿瘤组织明显升高.但有作者认为，人和鼠结直肠癌组织中经免疫组化检测的E-Cd表达明显降低，且与Dukes分期无关[7]; 另一组作者则发现，不仅原发灶E-Cd表达明显降低，而且转移性淋巴结和肝转移灶中的E-Cd表达明显增强[8].造成上述相反结论的原因尚不明了，可能与检测方法不同有关.
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鉴于血清E-Cd浓度和组织E-Cd表达水平与结直肠癌的侵袭性密切相关，并且健康对照者的血清E-Cd浓度明显低于结直肠癌患者、以及邻近非肿瘤组织的E-CdmRNA水平显著低于结直肠癌组织.作者认为，全面分析纤维结肠镜活检组织或结直肠癌标本mRNA水平，同时结合检测血清E-Cd浓度，可能有助于评估结直肠癌的恶性演进状态，对该类患者的早期诊断、综合治疗和预后具有重要的指导意义.但E-Cd是否与结直肠癌特异性相关，以及E-Cd能否成为特异性肿瘤标记物，尚需从E-Cd的分子生物学等多方面作深入的探讨[7-8].
4 参考文献1 许洪卫,王元和, 高瀚.E-钙粘附素失活及其基因突变对恶性肿瘤侵袭倾向的影响.癌症杂志 1996;15:70-71
2 Chan AO, Lam SK, Chu KM, Lam CM, Kwok E, Leung SY, Yuen ST, Law SY,Hui HM, Lai KC, Wong CY, Hu HC, Lai CL,Wong J. Soluble E-cadherin is a validprognostic marker in gastric carcinoma. Gut 2001;48:808-801
, 百拇医药
3 许洪卫,王元和, 高瀚.E-钙黏附素基因突变与胃癌恶性表型.中国病理生理杂志 1997;13:751-755
4 许洪卫,王元和, 高瀚.E-钙黏附素失活及其基因突变与肿瘤细胞黏附和转移的关系. 肿瘤杂志 1998;18:57-66
5 Velikova G, Banks RE, Gearing A , Hemingway I, Forbes MA, PrestonSR, Hall NR, Jones M, Wyatt J, Miller K, Ward U,Al-Maskatti J, Singh SM, Finan PJ, AmbroseNS, Primrose JN, Selby PJ. Serum concentrations of soluble adhesion
molecules in patients with colorectalcancer. Br J Cancer 1998;77:1857-1863
, 百拇医药
6 El-Bahrawy MA, Poulsom R, Jeffery R, Talbot I, Alison MR. Theexpression of E-cadherin and catenins in sporadic
colorectal carcinoma. Hum Pathol 2001;32:1216-1240
7 Sloncova E, Fric P, Kucerova D, Lojda Z, Tuhackova Z, Sovova V.Changes of E-cadherin and beta-catenin in human and
mouse intestinal tumours. Histochem J 2001;33:13-20
8 Ikeguchi M, Makino M, Kaibara N. Clinical significance of E-cadherin-catenincomplex expression in metastatic foci of
colorectal carcinoma. J Surg Oncol2001;77:201-208, 百拇医药( 蔡诚忠, 许洪卫, 童晓晨)
