酵母双杂交技术筛选HCV F蛋白结合蛋白基因
酵母双杂交技术筛选HCVF蛋白结合蛋白基因,黄燕萍,成军,王琳,杨倩,杨瑗,白桂芹,刘敏,张树林,项目负责人,:,摘要,目的,方法,结果,结论,0,引言,1,材料和方法,1.1材料,1.2,方法,1.2.1诱饵质粒载体的构建及酵母配合实验,1.2.2阳性质粒的克隆和分析,2,结果,2.1筛选克隆BglⅡ酶切鉴定,2
黄燕萍,成军, 王琳,杨倩, 杨瑗,白桂芹, 刘敏,中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心,全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039张树林,西安交通大学第一医院传染科 陕西省西安市 710061
国家自然科学基金攻关项目,No. C03011402, No. C30070689
军队“九、五”科技攻关项目,No. 98D063
军队回国留学人员启动基金项目,No. 98H038
军队“十、五”科技攻关青年基金项目,No. 01Q138
军队“十、五”科技攻关面上项目,No. 01MB135
项目负责人:成军,100039, 北京市西四环中路100号,中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心,全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话:010-66933391 传真:010-63801283
收稿日期:2004-03-15 接受日期:2004-05-11
摘要
目的:丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白是一个新的HCV基因产物,其生物学特性目前尚不明确,我们应用酵母双杂交系统Ⅲ技术进行筛选F蛋白结合蛋白基因.
方法:构建F蛋白诱饵质粒,转化酵母AH109后与含肝细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合,在涂有X-a-gal营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)上筛选生长.挑选蓝色克隆,提取此酵母克隆的质粒,转化大肠杆菌提取质粒DNA后测序,进行生物信息学分析.
结果:筛选出36个与F蛋白特异性相互作用的克隆,其中11个为人类酶原颗粒蛋白,5个锌指蛋白,6个SL15蛋白,2个过氧化物酶体离子蛋白酶,1个补体调节蛋白因子,2未知功能基因.
结论:克隆到的基因对以后研究F蛋白的功能有一定提示作用.
黄燕萍,成军, 王琳,杨倩, 杨瑗,白桂芹, 刘敏,张树林. 酵母双杂交技术筛选HCVF蛋白结合蛋白基因.世界华人消化杂志 2004;12(7):1701-1704
0 引言丙型肝炎病毒(HCV)属黄病毒科,基因组为单股正链RNA,长度约为9.6千碱基对(kb) ......
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