中国Helicobacter pylori 感染者血清抗Helicobacter pylori IgG 亚型的变化
王冬,中国人民解放军第二军医大学长海医院科研科 上海市 200433
刘枫,屠振兴, 李兆申,中国人民解放军第二军医大学长海医院消化内科 上海市 200433
王闻雅,中国人民解放军第二军医大学基础医学部免疫教研室上海市 200433
欧共体国际合作课题专项研究基金资助项目(ICA4-199-10010)
项目负责人:李兆申,200433, 上海市长海路174号,中国人民解放军第二军医大学长海医院消化内科. zhsli@81890.net
, 百拇医药
收稿日期:2004-05-12 接受日期:2004-06-24
摘要
目的:探讨中国Hpylori 感染者血清抗Hpylori IgG 亚型的变化及其与Hpylori相关疾病的关系.
方法:采用ELISA法检测中国广西和上海地区证实为Hpylori 感染者血清抗Hpylori IgG 亚型的水平.其中上海患者55例，广西患者74例.
结果:中国广西和上海感染Hpylori 的患者血清中IgG亚型IgG1和IgG2，IgG3和 IgG4的水平非常低，上海和广西感染Hpylori 的患者IgG各亚型之间无显著差异.在上海和广西十二指肠溃疡患者血清中IgG2水平显著高于非溃疡性消化不良患者(P<0.05); IgG1、IgG3和 IgG4水平在消化性溃疡患者和非溃疡性消化不良患者之间无显著差异.
, 百拇医药
结论:抗H pyloriIgG2水平可能是Hpylori 感染致十二指肠溃疡的预测因子.
王冬,刘枫, 王闻雅,屠振兴, 李兆申.中国Helicobacterpylori 感染者血清抗Helicobacterpylori IgG 亚型的变化.世界华人消化杂志 2004;12(8):1982-1983
0 引言幽门螺杆菌(Helicobacterpylori, H pylori )是上消化道疾病的重要致病因素之一.目前很多研究致力于Hpylori的致病因子及发病机制，但宿主因素在Hpylori感染者的临床转归中可能也具有重要作用.我们检测中国Hpylori感染者血清中IgG亚型的变化及其与消化性溃疡(PUD)的相关性，探讨抗Hpylori IgG 亚型改变在Hpylori感染者临床转归中可能作用.
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1 材料和方法
1.1 材料 血清标本55份来自第二军医大学长海医院患者，男32例，女23例，平均年龄50.1±12.2岁.均因消化不良症状而就诊，其中十二指肠溃疡17例，其余为非溃疡性消化不良患者(NUD).血清标本74份来自广西大学第一医院患者，男41例，女33例，平均年龄46.8±11.1岁，也均因消化不良症状而就诊，其中十二指肠溃疡29例，其余为NUD患者.以上患者均经组织学检查、快速尿素酶试验或13C-尿素酶呼气试验证实为Hpylori感染.主要试剂采用CagA-的Hpylori菌株经超声粉碎制备，菌株由英国利兹StJames医院提供.所用IgG1-4的二抗均购自Novocastraabotatories.
1.2 方法 首先用包被缓冲液稀释Hpylori抗原制备ELISA反应板，然后用稀释缓冲液将标准血清倍比稀释由1:200至1:12800加入至标准品孔内，每份标准品设双孔，每孔加入1:7500稀释的生物素标记的二抗，每次测定设阳性对照，阴性对照和空白对照，最后加入1g/L硝基苯磷酸酯显色，在酶联仪上读取405nm的吸光度(A405).标准曲线的绘制采用该实验室的传统方法.两个样本及多个样本率比较采用x2检验和Fisher精确检验，组间A405值的比较采用t检验，数据计算采用SPSSfor windows 10.0软件.
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2 结果中国广西和上海感染Hpylori的患者血清中对Hpylori全细菌抗原起反应的IgG亚型主要是IgG1和IgG2，AU值分别为10.5±4.0和9±3.4，IgG3和 IgG4的水平非常低(AU值分别为2±0.9和0)，上海和广西感染Hpylori的患者IgG各亚型之间无显著差异.在上海和广西十二指肠溃疡患者血清中IgG2水平显著高于非溃疡性消化不良患者(P<0.05); IgG1，IgG3，IgG4水平在消化性溃疡患者和非溃疡性消化不良患之间均无显著性差异(表1).
表1 PUD和NUD患者抗Hpylori IgG 亚型AU值的比较(mean±SD)
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aP<0.05 vs NUD patients.
3 讨论宿主因素在Hpylori 易感性以及感染后的致病作用越来越引起人们的重视.任何一种感染性疾病都是宿主与致病微生物之间相互作用的结果.宿主对病原微生物的免疫反应在一定程度上决定了感染性疾病的预后.人类对抗原产生的抗体具有多样性，每种抗体都有不同的功能，包括激活补体、与巨噬细胞和效应细胞结合等.在大多数感染中，IgG的各种亚型是人体免疫反应产生的主要成分.我们发现中国广西和上海感染Hpylori的患者血清中对Hpylori全细胞抗原起反应的IgG亚型主要是IgG1和IgG2，这也表明机体主要针对Hpylori全细菌抗原中的蛋白抗原和某些碳水化合物类的抗原产生抗体.我们未检测到IgG4，这可能是采用的检测方法尚不够敏感，也可能与IgG4本身的滴度较低有关.
, 百拇医药
不同的IgG亚型水平可以反映疾病的预后.Sakai et al [1]报道针对病原菌porphyromonasgingivalis的IgG2水平可以预测牙周炎患者牙槽骨损害的情况.本研究发现感染Hpylori的十二指肠溃疡患者血清抗Hpylori IgG2水平显著高于NUD(P<0.01)，结果与Mitchellet al [2]的结果一致.但是Andersen etal [3]则报道抗Hpylori IgG各亚型与临床疾病间无明显相关性.导致结果不一致的原因可能是检测IgG所用的抗原不同:我们和Mitchellet al采用的抗原是超声处理的CagA-的Hpylori菌株全细胞抗原，而Andersenet al使用的抗原为热稳定抗原(heat-stabileantigen). IgG2是由糖抗原诱导产生的，因此在十二指肠溃疡中观察到的高水平IgG2可能是针对Hpylori多糖抗原产生的.H pylori的多糖抗原主要是细菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS).有研究显示不同Hpylori菌株LPS分子存在着相当大的变异，某些特异性的脂多糖结构可能与Hpylori的致病性相关.Yokota et al [4]研究发现Hpylori LPS的多糖链中存在高免疫原性的抗原决定簇.缺乏这种LPS抗原决定簇的Hpylori菌株也缺乏免疫原性，而高免疫原性LPS诱导产生的抗体主要是IgG2.高免疫原性LPS糖的O-抗原多糖区与人的Lewis血型抗原有类似结构，这种结构有利于Hpylori的生存、促进Hpylori的黏附，针对LPS的IgG2可能参与其诱发的自身免疫反应以及炎症反应.
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尽管pDU患者的抗Hpylori IgG2平均水平高于NUD患者，但我们发现部分NUD患者血清Hpylori IgG2水平也较高，可达到DU患者IgG2的水平.有报道显示约10%的NUD患者可能发展为PUD，IgG2水平较高的NUD患者是否可能更容易发生溃疡，还需要长期的随访研究才能确定.
4 参考文献1 Sakai Y, Shimauchi H, Ito HO, Kitamura M, Okada H.Porphyromonasgingivalis-specific IgG subclass antibody levels as
immunological risk indicatorsof periodontal bone loss.J Clin Periodontol 2001;28:853-859
, 百拇医药
2 Mitchell HM, Mascord SL, Hazell GD, Daskalopoulos G. Assotiationbetween the IgG subclass response,inflammation and
disease status in Helicobacter pyloriinfection. Scand J Gastroenterol 2001;36:149-155
3 Andersen LP, Gaarslev K. IgG subclass antibodies against Helicobacterpylori heat-stable antigens in normal persons and
in dyspeptic patients. APMIS1992;100:747-751
4 Yokota S, Amano K, Hayashi S, Kubota T, Fujii N, Yokochi T.Humanantibody response to Helicobacter pylori
lipopolysaccharide-presenceof an immunadominant eptitope in the polysaccharide chain oflipopolysaccharide. Infect
Immun 1998;66:3006-3011, 百拇医药( 王 冬, 刘 枫, 王闻雅, 屠振兴, 李兆申)
刘枫,屠振兴, 李兆申,中国人民解放军第二军医大学长海医院消化内科 上海市 200433
王闻雅,中国人民解放军第二军医大学基础医学部免疫教研室上海市 200433
欧共体国际合作课题专项研究基金资助项目(ICA4-199-10010)
项目负责人:李兆申,200433, 上海市长海路174号,中国人民解放军第二军医大学长海医院消化内科. zhsli@81890.net
, 百拇医药
收稿日期:2004-05-12 接受日期:2004-06-24
摘要
目的:探讨中国Hpylori 感染者血清抗Hpylori IgG 亚型的变化及其与Hpylori相关疾病的关系.
方法:采用ELISA法检测中国广西和上海地区证实为Hpylori 感染者血清抗Hpylori IgG 亚型的水平.其中上海患者55例，广西患者74例.
结果:中国广西和上海感染Hpylori 的患者血清中IgG亚型IgG1和IgG2，IgG3和 IgG4的水平非常低，上海和广西感染Hpylori 的患者IgG各亚型之间无显著差异.在上海和广西十二指肠溃疡患者血清中IgG2水平显著高于非溃疡性消化不良患者(P<0.05); IgG1、IgG3和 IgG4水平在消化性溃疡患者和非溃疡性消化不良患者之间无显著差异.
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结论:抗H pyloriIgG2水平可能是Hpylori 感染致十二指肠溃疡的预测因子.
王冬,刘枫, 王闻雅,屠振兴, 李兆申.中国Helicobacterpylori 感染者血清抗Helicobacterpylori IgG 亚型的变化.世界华人消化杂志 2004;12(8):1982-1983
0 引言幽门螺杆菌(Helicobacterpylori, H pylori )是上消化道疾病的重要致病因素之一.目前很多研究致力于Hpylori的致病因子及发病机制，但宿主因素在Hpylori感染者的临床转归中可能也具有重要作用.我们检测中国Hpylori感染者血清中IgG亚型的变化及其与消化性溃疡(PUD)的相关性，探讨抗Hpylori IgG 亚型改变在Hpylori感染者临床转归中可能作用.
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1 材料和方法
1.1 材料 血清标本55份来自第二军医大学长海医院患者，男32例，女23例，平均年龄50.1±12.2岁.均因消化不良症状而就诊，其中十二指肠溃疡17例，其余为非溃疡性消化不良患者(NUD).血清标本74份来自广西大学第一医院患者，男41例，女33例，平均年龄46.8±11.1岁，也均因消化不良症状而就诊，其中十二指肠溃疡29例，其余为NUD患者.以上患者均经组织学检查、快速尿素酶试验或13C-尿素酶呼气试验证实为Hpylori感染.主要试剂采用CagA-的Hpylori菌株经超声粉碎制备，菌株由英国利兹StJames医院提供.所用IgG1-4的二抗均购自Novocastraabotatories.
1.2 方法 首先用包被缓冲液稀释Hpylori抗原制备ELISA反应板，然后用稀释缓冲液将标准血清倍比稀释由1:200至1:12800加入至标准品孔内，每份标准品设双孔，每孔加入1:7500稀释的生物素标记的二抗，每次测定设阳性对照，阴性对照和空白对照，最后加入1g/L硝基苯磷酸酯显色，在酶联仪上读取405nm的吸光度(A405).标准曲线的绘制采用该实验室的传统方法.两个样本及多个样本率比较采用x2检验和Fisher精确检验，组间A405值的比较采用t检验，数据计算采用SPSSfor windows 10.0软件.
, 百拇医药
2 结果中国广西和上海感染Hpylori的患者血清中对Hpylori全细菌抗原起反应的IgG亚型主要是IgG1和IgG2，AU值分别为10.5±4.0和9±3.4，IgG3和 IgG4的水平非常低(AU值分别为2±0.9和0)，上海和广西感染Hpylori的患者IgG各亚型之间无显著差异.在上海和广西十二指肠溃疡患者血清中IgG2水平显著高于非溃疡性消化不良患者(P<0.05); IgG1，IgG3，IgG4水平在消化性溃疡患者和非溃疡性消化不良患之间均无显著性差异(表1).
表1 PUD和NUD患者抗Hpylori IgG 亚型AU值的比较(mean±SD)
| 分组 | n | IgG1 | IgG2 | IgG3 | IgG4 |
| Shangahai | |||||
| NUD | 38 | 13.3±5.4 | 6.4±2.8 | 0 | 0 |
| PUD | 17 | 15.4±5.7 | 11.1±3.2a | 5.2±2.1 | 0 |
| Guangxi | |||||
| NUD | 45 | 6.8±5.5 | 6.7±3.3 | 3.2±2.1 | 0 |
| PUD | 29 | 11.7±5.4 | 10.9±3.5a | 0 | 0 |
, 百拇医药
aP<0.05 vs NUD patients.
3 讨论宿主因素在Hpylori 易感性以及感染后的致病作用越来越引起人们的重视.任何一种感染性疾病都是宿主与致病微生物之间相互作用的结果.宿主对病原微生物的免疫反应在一定程度上决定了感染性疾病的预后.人类对抗原产生的抗体具有多样性，每种抗体都有不同的功能，包括激活补体、与巨噬细胞和效应细胞结合等.在大多数感染中，IgG的各种亚型是人体免疫反应产生的主要成分.我们发现中国广西和上海感染Hpylori的患者血清中对Hpylori全细胞抗原起反应的IgG亚型主要是IgG1和IgG2，这也表明机体主要针对Hpylori全细菌抗原中的蛋白抗原和某些碳水化合物类的抗原产生抗体.我们未检测到IgG4，这可能是采用的检测方法尚不够敏感，也可能与IgG4本身的滴度较低有关.
, 百拇医药
不同的IgG亚型水平可以反映疾病的预后.Sakai et al [1]报道针对病原菌porphyromonasgingivalis的IgG2水平可以预测牙周炎患者牙槽骨损害的情况.本研究发现感染Hpylori的十二指肠溃疡患者血清抗Hpylori IgG2水平显著高于NUD(P<0.01)，结果与Mitchellet al [2]的结果一致.但是Andersen etal [3]则报道抗Hpylori IgG各亚型与临床疾病间无明显相关性.导致结果不一致的原因可能是检测IgG所用的抗原不同:我们和Mitchellet al采用的抗原是超声处理的CagA-的Hpylori菌株全细胞抗原，而Andersenet al使用的抗原为热稳定抗原(heat-stabileantigen). IgG2是由糖抗原诱导产生的，因此在十二指肠溃疡中观察到的高水平IgG2可能是针对Hpylori多糖抗原产生的.H pylori的多糖抗原主要是细菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS).有研究显示不同Hpylori菌株LPS分子存在着相当大的变异，某些特异性的脂多糖结构可能与Hpylori的致病性相关.Yokota et al [4]研究发现Hpylori LPS的多糖链中存在高免疫原性的抗原决定簇.缺乏这种LPS抗原决定簇的Hpylori菌株也缺乏免疫原性，而高免疫原性LPS诱导产生的抗体主要是IgG2.高免疫原性LPS糖的O-抗原多糖区与人的Lewis血型抗原有类似结构，这种结构有利于Hpylori的生存、促进Hpylori的黏附，针对LPS的IgG2可能参与其诱发的自身免疫反应以及炎症反应.
, 百拇医药
尽管pDU患者的抗Hpylori IgG2平均水平高于NUD患者，但我们发现部分NUD患者血清Hpylori IgG2水平也较高，可达到DU患者IgG2的水平.有报道显示约10%的NUD患者可能发展为PUD，IgG2水平较高的NUD患者是否可能更容易发生溃疡，还需要长期的随访研究才能确定.
4 参考文献1 Sakai Y, Shimauchi H, Ito HO, Kitamura M, Okada H.Porphyromonasgingivalis-specific IgG subclass antibody levels as
immunological risk indicatorsof periodontal bone loss.J Clin Periodontol 2001;28:853-859
, 百拇医药
2 Mitchell HM, Mascord SL, Hazell GD, Daskalopoulos G. Assotiationbetween the IgG subclass response,inflammation and
disease status in Helicobacter pyloriinfection. Scand J Gastroenterol 2001;36:149-155
3 Andersen LP, Gaarslev K. IgG subclass antibodies against Helicobacterpylori heat-stable antigens in normal persons and
in dyspeptic patients. APMIS1992;100:747-751
4 Yokota S, Amano K, Hayashi S, Kubota T, Fujii N, Yokochi T.Humanantibody response to Helicobacter pylori
lipopolysaccharide-presenceof an immunadominant eptitope in the polysaccharide chain oflipopolysaccharide. Infect
Immun 1998;66:3006-3011, 百拇医药( 王 冬, 刘 枫, 王闻雅, 屠振兴, 李兆申)
