关键词：烧伤；巨细胞病毒；聚合酶链反应
摘 要：目的： 观察严重烧伤病人巨细胞病毒(HCMV)感染情况及对病情的影响。方法： 采用PCR技术检测50例烧伤病人创面及尿液中HCMV-DNA，用ELISA法观察血清中HCMV-IgM、IgG,并与50例正常者检测结果进行对照。结果： 观察组血清中HCMV-IgM和创面及尿液中HCMV-DNA均高于对照组，感染HCMV的烧伤病人创面愈合较慢，外周血中淋巴细胞计数较高。结论： 烧伤患者感染HCMV的机会较大，且烧伤后早期的感染机会大于后期。PCR技术检测HCMV感染较为敏感而特异。
Human Cytomegalovirus Infection of BurnPatients
Zhang Jianping, Sun Zhigang,Xu Suju, et al.
(Department of Genetic Medicine, Bethune International Peace Hospital,
Shijiazhuang (050082))
Abstract： Objective: Toobserve human cytomegalovirus (HCMV) infection in severely burned patients and itsinfluence on case conditions. Method: HCMV-DNA level in wound, urine and serum samplesfrom 50 severely burned patients and 50 healthy persons (as control) were examined byusing PCR technique and HCMV-IgM, IgG levels by using ELLSA method. Results: All theresults indicated that the positive rate of infection in severely burned patients wassignificantly higher than that of the control. Wound healing of the HCMV infected patientswas slower than those without infection. Lymphocyte counts in peripheral blood in infectedpatients were higher than those without infection. Conclusion: Burn patients aresusceptible to HCMV infection, especially at the early stage of burn.
Key words： Burn Human cytomegalovirus polymerase chain reaction▲
人巨细胞病毒感染的广泛性和危害性日益受到人们重视，尤其对于免疫力受损和免疫功能低下者危害更严重[1] ，本文用聚合酶链反应(PCR)技术观察了50例严重烧伤患者HCMV的感染情况，并与50例正常人的检测结果进行对照分析。
材料与方法
1.材料：
(1) 检测对象 烧伤创面采用SP-Ag等药物治疗的烧伤病人50例为观察组，男34例，女16例，年龄2～55岁，烧伤面积10%～97%，平均26.7%，Ⅲ°面积9～95%，平均16.9%。并发应激性糖尿病2例，严重肺部感染3例，肠道菌群失调3例。采集标本时间为烧伤后7～43天，平均13.7天，对照组为健康体检者50例，男37例，女13例，年龄26～57岁，平均34岁。
(2)标本收集 无菌试管留取尿和深层创面分泌物，同时抽取被检者外周血查血常规，并分离血清，用于检测HCMV-IgG、IgM抗体。留部分创面分泌物做细菌培养。NDA扩增仪由PE公司生产，Taq酶购自Promega公司。
2.方法：
(1) DNA扩增 各取经过离心处理的尿液和创面分泌物标本2.5ul,在50ul反应体系中进行PCR扩增。
(2) 经8%聚丙烯酰胺凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外线灯下观察HCMV特异性133bp区带。
(3) 用ELISA法检测血清中HCMV-IgG、IgM抗体(试剂购自解放军302医院)。
结 果
1.用ELISA法检测血清结果：观察组血清HCMV-IgG阳性率为90%(45/50)；对照组阳性率为80%(40/50)；血清HCMV-IgM阳性率观察组为8%(4/50)；对照组为0(0/50)。
2.PCR检测HCMV结果：对照组尿HCMV-DNA阳性率为8%(4/50)，观察组尿HCMV-DNA阳性率为40%(20/50)，X2 =14.03，P<0.01。观察组创面分泌物中HCMV-DNA阳性率为18%(9/50)，尿与分泌物均为阳性者3例，占6%。
3.创面分泌物中细菌培养结果：金黄色葡萄球菌15例，绿脓杆菌11例，变性杆菌5例，大肠杆菌3例，肺炎克雷伯氏杆菌2例，链球菌2例。
4.血常规结果：对照组白细胞计数平均为6.9±0.83×109 /L，淋巴细胞为0.29±0.07，观察组白细胞9.8±1.63×109 /L，淋巴细胞为0.374±0.09。
5.预后：观察组中48例治愈，2例死亡，其中1例尿HCMV-DNA阳性，另1例HCMV-IgM阳性，其它资料见表1。
表1 伤情与HCMV感染关系
| 烧伤面积(0)% | HCMV感染 | ||||
| 尿(DNA) | 创面(DNA) | IgG(+)(ELISA) | IgM(+)(ELISA) | 死亡 | |
| <50°(n=34) | 11 | 5 | 32 | 1 | 0 |
| 50°～80°(n=10) | 6 | 2 | 9 | 1 | 0 |
| >80°(n=6) | 3 | 2 | 4 | 2 | 2 |
表2 受检时间与感染的关系
| 烧伤后 受检时间 | HCMV-DNA阳性(例) | HCMV-IgG(+) | HCMV-IgM(+) | |
| 尿液 | 创面 | |||
| <3周(n=31) | 15(0.484) | 11(0.355) | 28(0.903) | 1(0.032) |
| >3周(n=19) | 5(0.263) | 8(0.421) | 16(0.842) | 3(0.158) |
| P值 | >0.05 | >0.05 | >0.05 | >0.05 |
讨 论
1.HCMV是一种机会致病菌，其感染的危害性和广泛性日益受到人们的重视，尤其对于免疫受损或低下者更为严重，本组烧伤病人的血清HCMV-IgM和尿中HCMV-DNA阳性率均明显高于对照组(P<0.01)，表明烧伤患者更易感染HCMV。从表1可以看出，伤情愈重，则感染HCMV的机会愈大，感染HCMV的烧伤病人临床症状可能不突出，但多伴有不同程度的高热，持续在38～39°C左右，且淋巴细胞较高，有9例病人创面迁延不愈，这与文献报道一致[2] 。一般来说，轻中度烧伤感染HCMV并不构成严重的威胁，但对于特重烧伤则会加重消耗，使免疫力更加降低。因此对特重度烧伤治疗中应该加强营养支持和免疫疗法，应该使用抗病毒的药物。
2.从表2中可以看出，烧伤病人伤后3周内与3周后感染HCMV的发生率在统计学上无差异，HCMV-IgM阳性发生率在3周后虽然高于3周内，可能是由于该抗体产生较慢所致，而尿HCMV-DNA、HCMV-IgG阳性发生率在3周内较高些。结果提示烧伤病人出现HCMV感染机会多在烧伤早期，因而预防HCMV感染即应从烧伤后开始进行。
3.HCMV-IgG阳性提示既往有过感染，该结果可作为参考分析用。HCMV-IgM则表示正在感染，病毒存在。如HCMV-IgG(+)而HCMV-IgM(一)、DNA(一)的病人可不治疗，如三项检测结果均为阳性，应及时抗病毒和免疫治疗。观察组HCMV-IgM阳性率明显低于尿和创面分泌物HCMV-DNA阳性率，可能是血清抗体检测方法在HCMV感染最初期或HCMV诱发感染时，有时检测不到HCMV-IgM，而且血清检测难以查出潜伏状态的HCMV，PCR方法敏感性高于ELISA方法。另外烧伤患者受毒素侵害，免疫应答差，机体内抗体少其敏感度差，因而IgM检测的假阴性率高。检测还发现，创面分泌物阳性率与尿检阳性率吻合率较低(仅为6%)，这可能与创面用药及受检部位、受检标本等不同有关。上述结果提示，PCR检测的阳性率要比实际发生HCMV感染率低，尿液中病毒DNA先于病毒感染的临床症状或血清学证据的出现，是HCMV感染的早期指标[3] 。
参考文献：
[1]杜文慧.巨细胞病毒感染的临床研究.中华实验和临床病毒学杂志，1991；(3)：277～280
[2]黎鳌主编.烧伤治疗学.第2版，北京：人民卫生出版社，1995，255～256
[3]林万明主编.PCR技术应用指南.第1版，北京人民军医出版社，1993，296～300 , http://www.100md.com