杨艳杰,成军, 王春花,黄燕萍, 吴煜,刘敏, 王建军,钟彦伟, 刘妍,张黎颖,中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心,全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100038

    陈东风,中国人民解放军第三军医大学大坪医院消化内科 重庆市 400038

    国家自然科学基金项目,No. C03011402, No. C30070689

    军队“九、五”科技攻关项目,No. 98D063

    军队回国留学人员启动基金项目,No. 98H038

    军队“十、五”科技攻关青年基金项目,No. 01Q138

    项目负责人:成军, 100039, 北京市西四环中路100号,中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心,全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn

    电话:010-66933392 传真:010-63801283

    收稿日期:2004-02-14 接受日期:2004-06-09

    摘要

    目的:通过筛选HBsAg基因启动子I(SPI，surfacepromoter I)结合蛋白，为HBV复制机制的研究探索新的途径.

    方法:应用噬菌体展示技术，以HBsAg基因启动子I的聚合酶链反应(PCR)产物DNA作为固相筛选分子，对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“黏附-洗脱-扩增”筛选过程，经噬斑的PCR扩增后，构建克隆载体，最后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索.

    结果:噬菌体经富集后，从随机筛选的14个克隆中得到8个阳性克隆，成功构建了克隆载体.序列测定后经过同源性搜索，确定了和HBV表面抗原基因启动子I特异结合的肝细胞蛋白，共编码7种蛋白.其中3个克隆编码未知功能蛋白;其余的克隆分别编码4-氨基丁酸氨基转移酶、触珠蛋白、复制蛋白等蛋白.

    结论:用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HBsAg基因启动子I的结合蛋白，分析了该蛋白的编码基因.

    杨艳杰,成军, 陈东风,王春花, 黄燕萍,吴煜, 刘敏,王建军, 钟彦伟,刘妍, 张黎颖.应用噬菌体展示技术筛选HBsAg启动子I的DNA结合蛋白.世界华人消化杂志 2004;12(11):2737-2739

    0 引言乙型肝炎病毒(HBV)持续感染导致全球性健康问题.世界人口约6%是病毒携带者 ......