于聪慧,林梅, 梅建民,余昌中, 杨荣华,姚军波,北京军区总医院肝胆外科 北京市 100700

    国家自然科学基金资助项目,No. 30170421

    项目负责人:于聪慧,100700, 北京市东城区朝内北小街2号,北京军区总医院肝胆外科. ychst@public.fhnet.cn.net

    电话:010-66721896

    收稿日期:2004-08-25 接受日期:2004-09-09

    摘要

    目的:探讨肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养对肝细胞功能的影响.

    方法:采用改良胶原酶消化法分离获得大鼠肝细胞和储脂细胞，同时利用梯度离心分离胰岛细胞.分两组实验，肝细胞培养组(对照组)，肝细胞用RPMI1640、胰岛素10^-7mol/L、100 mL/LFBS及地塞米松10^-8mol/L配成细胞悬液，2mL放入9 cm²培养瓶中连续培养15d (37 °C 50 mL/L CO₂).肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养组(实验组):将1×10⁷/L的储脂细胞2mL先加入培养瓶中，培养条件及培养液同肝细胞培养组，培养48h后弃上清后将肝细胞2×10⁸/L2 mL和胰岛细胞(100个)分别加入并观察肝细胞存活情况;全自动生化分析仪测定培养上清液中总蛋白及尿素氮的含量;两组细胞均在培养10d行细胞组织学及组织化学检测，包括肝细胞HE染色、肝细胞内糖原PAS染色及葡萄糖-6-磷酸酶染色检测.

    结果:培养第7 d对照组部分肝细胞脱落，核固缩，胞质破碎分解.而实验组肝细胞粘壁生长好，肝细胞、储脂细胞和胰岛细胞相间形成团状和索形.培养10 d对照组肝细胞核完全固缩，胞质破碎分解，糖原、葡萄糖-6-磷酸酶的表达消失;实验组肝细胞呈片状，胞质饱满，糖原、葡萄糖-6磷酸酶的表达良好.培养5 d后实验组白蛋白及尿素氮的合成明显高于对照组(P<0.05).

    结论:肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养明显延长肝细胞存活期.

    于聪慧,林梅, 梅建民,余昌中, 杨荣华,姚军波. 肝细胞、胰岛细胞与储脂细胞共培养对肝细胞功能的影响.世界华人消化杂志 2004;12(11):2731-2733

    0 引言肝细胞和胰岛细胞混合培养能促进肝细胞功能已有许多报道^[1-2] ......