清肝化瘀方含药血清对TGFa诱导SMMC-7721细胞Raf-MEK-ERK信号传导的影响
殷飞,吴新满, 高洪生,姚树坤,河北医科大学第四医院消化科 河北省石家庄 050011
河北省自然科学基金资助项目N0. 301394
项目负责人:姚树坤,050011 河北省石家庄市健康路12号,河北医科大学第四医院消化科.
电话:0311-6033941-342
收稿日期:2004-09-24 接受日期:2004-10-22
摘要
目的:观察清肝化瘀方含药血清对TGFa诱导人肝癌细胞，对Raf-MEK-ERK信号传导的影响.
, http://www.100md.com
方法:采用血清药理学方法，以病理鼠血清作对照，用Western免疫印迹方法检测清肝化瘀方含药血清对Raf、MEK、ERK蛋白表达影响，RT-PCR方法检测清肝化瘀方含药血清对MEK1mRNA表达影响.
结果:清肝化瘀方含药血清能抑制Raf、MEK、ERK蛋白的表达，但以抑制MEK蛋白为主(P<0.05)，能抑制MEK1mRNA的表达(P<0.05).
结论:清肝化瘀方含药血清能够抑制TGFa诱导的人肝癌细胞增生，阻断TGFa在细胞内的信号传导.
殷飞,吴新满, 高洪生,姚树坤. 清肝化瘀方含药血清对TGFa诱导SMMC-7721细胞Raf-MEK-ERK信号传导的影响.世界华人消化杂志 2005;13(1):88-90
, 百拇医药
0 引言信号传导在细胞调控中起重要作用，选择性的阻断肿瘤细胞自分泌或旁分泌的信号传导通路，破坏其自控性生长调节机制，正在成为极具吸引力的研究热点.自研中药清肝化瘀方(半枝莲、白花蛇舌草、苦参、三棱、莪术、黄芪等组成)，以清热解毒、祛瘀散结、健脾理气为治法，对肝癌患者有抑制肿瘤生长、缓解症状和延长生存期的作用，基础实验表明他对大鼠肝癌前病变及癌变有明显的阻断作用[1-3]，其机制有待于进一步研究.我们采用血清药理学方法，从信号传导的角度，体外研究清肝化瘀方对转化生长因子a(TGFa)诱发人肝癌细胞SMMC-7721增生和对Raf-MEK-ERK信号传导的影响.
1 材料和方法
1.1 材料雄性SD大鼠，体重180-200g，购自北京实验动物中心.人肝癌细胞SMMC-7721购自中科院上海细胞生物所.二乙基亚硝胺(DEN)购自瑞典Fluca公司.四甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)购自美国Sigma公司.RPMI-1640培养基购自GIBCO公司.小牛血清(FCS)购自杭州四季青公司.TGFα购自Peprotech公司.考马斯亮兰R-250购自Serva公司.丙烯酰胺、N，N'-亚甲基叉双丙烯酰胺、四甲基乙二胺(TEMED)购自Gibco公司.过硫酸胺(APS)、亮抑酞酶(Leupeptin)、NP-40、硝酸纤维素膜购自Sigma公司.兔抗鼠Raf、MEK、ERK单克隆抗体、WesternBlotting Luminol Reagent购自SantaCruz公司.细胞总RNA提取试剂盒、TaqDNA聚合酶、Amv逆转录酶、随机引物购自Promega公司.GAPDH引物、MEK1引物由上海生工生物公司合成.全自动酶标仪为奥地利产品.清肝化瘀方(半枝莲、白花蛇舌草、苦参、三棱、莪术、黄芪等组成)由河北医科大学第四医院制剂室经水煎、浓缩及醇沉制成.
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1.2方法
1.2.1 细胞培养 用含100mL/L FCS、青霉素100kU/L、链霉素100mg/L的RPMI-1640培养液培养人肝癌细胞株SMMC-7721，置于37°C，50mL/L CO2孵育箱中培养，每3-4d传代一次，取对数生长期的细胞用于实验.
1.2.2 中药血清和病理血清的制备[2]雄性SD大鼠30只，随机分为两组:病理对照组和中药预防组.每组均给与DEN35 mg/kg灌胃，2次/wk，共16wk，中药预防组同时给予成人等效剂量5倍的清肝化瘀方灌胃，1次/d，16wk后两组停用DEN，中药预防组继续用中药至20wk.病理对照组于20wk末，中药预防组于最后一次给药后1-2h下腔静脉取血，分离血清，所得血清均经56°C，30min灭活，0.22mm滤器过滤，-70°C 冻存.临用前用含10mL/L FCS的RPMI-1640培养液稀释成100mL/L浓度.
, 百拇医药
1.2.3 Western免疫印迹细胞生长40 h后弃去培养液，实验组和对照组分别换成含5mg/LTGFa的100mL/L中药血清或5mg/LTGFa的100mL/L病理血清的培养液，培养48h，5 g/L胰酶消化，用预冷的PBS洗涤2次，加入预冷的细胞裂解液裂解[50mmol/L pH7.6 Tris-Cl，150mmol/L NaCl，10mL/L NP-40，5mL/L脱氧胆酸，1mL/L SDS，1mmol/L EDTA，1mmol/L PMSF，2mg/L Leuptin]，置0°C 30 mim，4°C 12 000 g离心10min，取上清-70°C冻存.采用考马斯亮兰G-250染色法进行蛋白质定量.在100mL/L SDS-PAGE凝胶上进行电泳分离，半干式电转膜，封闭后加入MEK-1单抗1:100，4°C过夜，洗膜后加入辣根过氧化物酶标记的二抗1:1000，37°C 1 h，洗膜后ECL显色，曝光，洗片进行图像分析，检测密度扫描值.
, 百拇医药 1.2.4 细胞总RNA的提取将1×109/L细胞10mL接种于培养瓶，40h后，弃除培养液，实验组和对照组分别换成含5mg/LTGFα的100mL/L中药血清或5mg/LTGFa的100mL/L病理血清的培养液，培养48h，一步法进行细胞总RNA的提取.
1.2.5 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)取2 mg总RNA进行逆转录反应，逆转录产物2mL进行PCR.MEK1引物设计依据大鼠MEK1序列[16]，上游引物:5’-AAGCAACAAA GAGCA AGTC -3’，下游引物:5’-CAAGCACAAA GCCAA TCC -3’，扩增的目的片段长度为212bp.大鼠GAPDH扩增的目的片段长度为540bp.使用50 mL反应体系，在相同条件下分别扩增MEK1和GAPDH，PCR的具体循环参数为:94°C 45 s;50°C 45 s;72°C 45 s循环30次;94°C 45 s;60°C 45 s;72°C 5 min末次循环.循环完成后，取10mLPCR产物进行20g/L琼脂糖电泳、照相、扫描，用Adobephotoshop图像分析软件进行分析，计算MEK1/GAPDH的光密度比值及其相对照组的表达量.
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统计学处理所有实验结果采用mean±SD表示，显著性差异采用t检验.
2 结果
2.1 中药血清对TGFa诱导的肝癌细胞Raf、MEK、ERK蛋白表达的影响中药血清培养肝癌细胞48 h，能抑制TGFa对肝癌细胞Ras-Raf-MEK-ERK通路的信号传导，抑制Raf、MEK、ERK蛋白表达，其中以抑制MEK表达为主(P<0.05).结果(表1，图1).
表1 肝癌细胞Raf、MEK、ERK1,2蛋白表达 (光密度值，mean±SD)
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aP<0.05.
图1(PDF)Western blotting 检测SMMC-7721细胞Raf、MEK、ERK蛋白表达. A:病理组; B:实验组.
2.2 中药血清对TGFa诱导的肝癌细胞MEK1mRNA表达的影响RT-PCR检测结果显示，与对照相比，中药血清培养肝癌细胞48h，能抑制5 mg/LTGFa诱导的SMMC-7721肝癌细胞MEK1mRNA的转录，密度扫描显示，其MEK1mRNA的表达相对量较对照组明显减少(P<0.05).结果(表2，图2).
表2 肝癌细胞MEK1mRNA表达(光密度比值,mean±SD)
, 百拇医药
aP<0.05
图2(PDF)RT-PCR 检测SMMC-7721细胞MEK1mRNA表达. A: 病理组;B: 实验组.
3 讨论Ras是质膜胞质面的内在膜蛋白，而Raf是胞质蛋白，必须通过Ras-GTP-Raf-1结合才能把Raf转位到质膜骨架蛋白上.Raf定位于胞膜是其活化的前提.Raf的失活主要表现在从膜上回到细胞质中，与Raf的脱磷酸化有关.本研究中，清肝化瘀方含药血清未能明显抑制Raf的蛋白的表达，可能与清肝化瘀方含药血清未能使Raf磷酸化，从而未能转移到细胞膜有关.
有研究表明，在肝癌组织中，位于信号转导途径上游的Raf-1激酶活性在癌变组织与非癌变组织相似，但属于其家庭的MEK激酶活性在癌变组织明显升高，位于信号转导途径下游的MAP激酶活性也明显升高，可见，肝细胞癌变后MAP激酶途径发生了变异.我们的实验也证实了这一点.肝癌模型组病理血清培养肝癌细胞与中药血清培养细胞对Raf蛋白表达无明显差别，而MEK蛋白表达明显升高，表明病理血清培养的肝癌细胞MEK可能发生了变异，MEK1mRNA的RT-PCR实验表明病理血清培养的肝癌细胞MEK1的mRNA表达明显升高，这与病理血清能够促进MEK1的两个氨基酸位点磷酸化有关.而清肝化瘀方能够抑制MEK1的mRNA的表达，这可能与清肝化瘀方含药血清能够促进MEK1的两个氨基酸位点脱磷酸化，从而能降低MEK1蛋白的表达.
, 百拇医药
ERK信号转导通路是目前研究最为彻底的MAPK通路[4-10]，他受生长因子刺激而激活后，移位至细胞核，引起转录因子的磷酸化，使得c-fos，c-myc，c-jun等基因的转录水平升高，导致细胞增生.免疫荧光显示，ERK位于胞质和胞核，激活后，移位至细胞核[11].我们也证实了这一点，病理血清作用细胞后，胞核着色明显加深，而清肝化瘀方含药血清作用细胞后，胞核着色明显减弱[2]，表明清肝化瘀方含药血清能明显减少ERK进入细胞核，抑制其在细胞核中的表达，因而能阻断TGFa在肝癌细胞中的信号传导，抑制TGFa诱导的肝癌细胞增生.
清肝化瘀方能阻断TGFa对肝癌细胞的作用，Western印迹表明，清肝化瘀方含药血清能抑制Raf、MEK、ERK蛋白的表达，但以抑制MEK蛋白为主.其机制可能与阻断TGFa信号传导有关.
4 参考文献1 姚树坤,韩俊岭, 殷飞.清肝化瘀方对大鼠肝癌前病变预防作用的研究.中国中西医结合脾胃杂志 2000;8:268-269
, 百拇医药
2 殷飞, 姚树坤.吴新满, 高洪生,李志辉. 肝症口服液含药血清对TGFa诱导SMMC-7721细胞增生和ERK蛋白的影响.世界华
人消化杂志 2001;9:1017-1020
3 殷飞,姚树坤, 高洪生.肝症口服液含药血清对转化生长因子a诱导人肝癌细胞SMMC-7721增生和凋亡的影响.中国中西
医结合消化杂志 2001;9:328-330
4 Ito Y, Sasaki Y, Horimoto M, Wada S, Tanaka Y, Kasahara A, Ueki T,Hirano T, Yamamoto H, Fujimoto J, Okamoto E,Hayashi N, Hori M. Activation of mitogen-activatedprotein kinases/extracellular signal-regulated kinases in human
, http://www.100md.com
hepatocellular carcinoma. Hepatology 1998;27:951-958
5 Taupin D, Podolsky DK. Mitogen-activated protein kinase activationregulates intestinal epithelial differentiation.
Gastroenterology 1999;116:1072-1080
6 Gines P, Li XM, Brown SE, Nakamura T, Guzelian PS, Heasley LE,Schrier RW, Nemenoff RA. Inhibitory actions of cyclic
adenosine monophosphate and pertussis toxindefine two distinct epidermal growth factor-regulated pathwaysleading
, http://www.100md.com
to activation of mitogen-activated proteinkinase in rat hepatocytes. Hepatology 1996;23:1167-1173
7 Schaff Z, Hsia CC, Sarosi I, Tabor E. Overexpression oftransforming growth factor ain hepatocellular carcinoma and
focal nodular hyperplasia from Europeanpatients. Hum Pathol 1994;25:644-651
8 张静, 王文亮,李青, 乔庆.a-转化生长因子及其受体在人原发性肝细胞肝癌中的表达意义.世界华人消化杂志
1999;7:939-942
, 百拇医药
9 Tomoaki T, Kujiuara K. Serum transforming growth factor alevel as a marker of hepatocellular carcinoma complicating
cirrhosis. Cancer 1996;77:1056-1060
10 Wang XM, Tang ZY, Xue Q.Study of enhancement of liver cancer cell growth by transforming growthfactor a.
Zhongguo Zhongliu Linchuang 1995;22:153-156
11 Zheng CF, Guan KL. Cytoplasmic localization of the mitogen-activatedprotein kinase activator MEK. J Bio Chem
1994;269:19947-19952
编辑 张海宁, 百拇医药( 殷 飞, 吴新满, 高洪生, 姚树坤)
河北省自然科学基金资助项目N0. 301394
项目负责人:姚树坤,050011 河北省石家庄市健康路12号,河北医科大学第四医院消化科.
电话:0311-6033941-342
收稿日期:2004-09-24 接受日期:2004-10-22
摘要
目的:观察清肝化瘀方含药血清对TGFa诱导人肝癌细胞，对Raf-MEK-ERK信号传导的影响.
, http://www.100md.com
方法:采用血清药理学方法，以病理鼠血清作对照，用Western免疫印迹方法检测清肝化瘀方含药血清对Raf、MEK、ERK蛋白表达影响，RT-PCR方法检测清肝化瘀方含药血清对MEK1mRNA表达影响.
结果:清肝化瘀方含药血清能抑制Raf、MEK、ERK蛋白的表达，但以抑制MEK蛋白为主(P<0.05)，能抑制MEK1mRNA的表达(P<0.05).
结论:清肝化瘀方含药血清能够抑制TGFa诱导的人肝癌细胞增生，阻断TGFa在细胞内的信号传导.
殷飞,吴新满, 高洪生,姚树坤. 清肝化瘀方含药血清对TGFa诱导SMMC-7721细胞Raf-MEK-ERK信号传导的影响.世界华人消化杂志 2005;13(1):88-90
, 百拇医药
0 引言信号传导在细胞调控中起重要作用，选择性的阻断肿瘤细胞自分泌或旁分泌的信号传导通路，破坏其自控性生长调节机制，正在成为极具吸引力的研究热点.自研中药清肝化瘀方(半枝莲、白花蛇舌草、苦参、三棱、莪术、黄芪等组成)，以清热解毒、祛瘀散结、健脾理气为治法，对肝癌患者有抑制肿瘤生长、缓解症状和延长生存期的作用，基础实验表明他对大鼠肝癌前病变及癌变有明显的阻断作用[1-3]，其机制有待于进一步研究.我们采用血清药理学方法，从信号传导的角度，体外研究清肝化瘀方对转化生长因子a(TGFa)诱发人肝癌细胞SMMC-7721增生和对Raf-MEK-ERK信号传导的影响.
1 材料和方法
1.1 材料雄性SD大鼠，体重180-200g，购自北京实验动物中心.人肝癌细胞SMMC-7721购自中科院上海细胞生物所.二乙基亚硝胺(DEN)购自瑞典Fluca公司.四甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)购自美国Sigma公司.RPMI-1640培养基购自GIBCO公司.小牛血清(FCS)购自杭州四季青公司.TGFα购自Peprotech公司.考马斯亮兰R-250购自Serva公司.丙烯酰胺、N，N'-亚甲基叉双丙烯酰胺、四甲基乙二胺(TEMED)购自Gibco公司.过硫酸胺(APS)、亮抑酞酶(Leupeptin)、NP-40、硝酸纤维素膜购自Sigma公司.兔抗鼠Raf、MEK、ERK单克隆抗体、WesternBlotting Luminol Reagent购自SantaCruz公司.细胞总RNA提取试剂盒、TaqDNA聚合酶、Amv逆转录酶、随机引物购自Promega公司.GAPDH引物、MEK1引物由上海生工生物公司合成.全自动酶标仪为奥地利产品.清肝化瘀方(半枝莲、白花蛇舌草、苦参、三棱、莪术、黄芪等组成)由河北医科大学第四医院制剂室经水煎、浓缩及醇沉制成.
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1.2方法
1.2.1 细胞培养 用含100mL/L FCS、青霉素100kU/L、链霉素100mg/L的RPMI-1640培养液培养人肝癌细胞株SMMC-7721，置于37°C，50mL/L CO2孵育箱中培养，每3-4d传代一次，取对数生长期的细胞用于实验.
1.2.2 中药血清和病理血清的制备[2]雄性SD大鼠30只，随机分为两组:病理对照组和中药预防组.每组均给与DEN35 mg/kg灌胃，2次/wk，共16wk，中药预防组同时给予成人等效剂量5倍的清肝化瘀方灌胃，1次/d，16wk后两组停用DEN，中药预防组继续用中药至20wk.病理对照组于20wk末，中药预防组于最后一次给药后1-2h下腔静脉取血，分离血清，所得血清均经56°C，30min灭活，0.22mm滤器过滤，-70°C 冻存.临用前用含10mL/L FCS的RPMI-1640培养液稀释成100mL/L浓度.
, 百拇医药
1.2.3 Western免疫印迹细胞生长40 h后弃去培养液，实验组和对照组分别换成含5mg/LTGFa的100mL/L中药血清或5mg/LTGFa的100mL/L病理血清的培养液，培养48h，5 g/L胰酶消化，用预冷的PBS洗涤2次，加入预冷的细胞裂解液裂解[50mmol/L pH7.6 Tris-Cl，150mmol/L NaCl，10mL/L NP-40，5mL/L脱氧胆酸，1mL/L SDS，1mmol/L EDTA，1mmol/L PMSF，2mg/L Leuptin]，置0°C 30 mim，4°C 12 000 g离心10min，取上清-70°C冻存.采用考马斯亮兰G-250染色法进行蛋白质定量.在100mL/L SDS-PAGE凝胶上进行电泳分离，半干式电转膜，封闭后加入MEK-1单抗1:100，4°C过夜，洗膜后加入辣根过氧化物酶标记的二抗1:1000，37°C 1 h，洗膜后ECL显色，曝光，洗片进行图像分析，检测密度扫描值.
, 百拇医药 1.2.4 细胞总RNA的提取将1×109/L细胞10mL接种于培养瓶，40h后，弃除培养液，实验组和对照组分别换成含5mg/LTGFα的100mL/L中药血清或5mg/LTGFa的100mL/L病理血清的培养液，培养48h，一步法进行细胞总RNA的提取.
1.2.5 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)取2 mg总RNA进行逆转录反应，逆转录产物2mL进行PCR.MEK1引物设计依据大鼠MEK1序列[16]，上游引物:5’-AAGCAACAAA GAGCA AGTC -3’，下游引物:5’-CAAGCACAAA GCCAA TCC -3’，扩增的目的片段长度为212bp.大鼠GAPDH扩增的目的片段长度为540bp.使用50 mL反应体系，在相同条件下分别扩增MEK1和GAPDH，PCR的具体循环参数为:94°C 45 s;50°C 45 s;72°C 45 s循环30次;94°C 45 s;60°C 45 s;72°C 5 min末次循环.循环完成后，取10mLPCR产物进行20g/L琼脂糖电泳、照相、扫描，用Adobephotoshop图像分析软件进行分析，计算MEK1/GAPDH的光密度比值及其相对照组的表达量.
, http://www.100md.com
统计学处理所有实验结果采用mean±SD表示，显著性差异采用t检验.
2 结果
2.1 中药血清对TGFa诱导的肝癌细胞Raf、MEK、ERK蛋白表达的影响中药血清培养肝癌细胞48 h，能抑制TGFa对肝癌细胞Ras-Raf-MEK-ERK通路的信号传导，抑制Raf、MEK、ERK蛋白表达，其中以抑制MEK表达为主(P<0.05).结果(表1，图1).
表1 肝癌细胞Raf、MEK、ERK1,2蛋白表达 (光密度值，mean±SD)
| 组别 | n | Raf | MEK | ERK1，2 |
| 对照组 | 15 | 165.9±1.3 | 255.1±2.4 | 267.7±1.8 |
| 实验组 | 15 | 144.5±2.5 | 172.3±1.9a | 236.5±2.1 |
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aP<0.05.
图1(PDF)Western blotting 检测SMMC-7721细胞Raf、MEK、ERK蛋白表达. A:病理组; B:实验组.
2.2 中药血清对TGFa诱导的肝癌细胞MEK1mRNA表达的影响RT-PCR检测结果显示，与对照相比，中药血清培养肝癌细胞48h，能抑制5 mg/LTGFa诱导的SMMC-7721肝癌细胞MEK1mRNA的转录，密度扫描显示，其MEK1mRNA的表达相对量较对照组明显减少(P<0.05).结果(表2，图2).
表2 肝癌细胞MEK1mRNA表达(光密度比值,mean±SD)
| 组别 | n | MEK1/GAPDH |
| 对照组 | 15 | 0.793±0.041 |
| 实验组 | 15 | 0.598±0.003a |
, 百拇医药
aP<0.05
图2(PDF)RT-PCR 检测SMMC-7721细胞MEK1mRNA表达. A: 病理组;B: 实验组.
3 讨论Ras是质膜胞质面的内在膜蛋白，而Raf是胞质蛋白，必须通过Ras-GTP-Raf-1结合才能把Raf转位到质膜骨架蛋白上.Raf定位于胞膜是其活化的前提.Raf的失活主要表现在从膜上回到细胞质中，与Raf的脱磷酸化有关.本研究中，清肝化瘀方含药血清未能明显抑制Raf的蛋白的表达，可能与清肝化瘀方含药血清未能使Raf磷酸化，从而未能转移到细胞膜有关.
有研究表明，在肝癌组织中，位于信号转导途径上游的Raf-1激酶活性在癌变组织与非癌变组织相似，但属于其家庭的MEK激酶活性在癌变组织明显升高，位于信号转导途径下游的MAP激酶活性也明显升高，可见，肝细胞癌变后MAP激酶途径发生了变异.我们的实验也证实了这一点.肝癌模型组病理血清培养肝癌细胞与中药血清培养细胞对Raf蛋白表达无明显差别，而MEK蛋白表达明显升高，表明病理血清培养的肝癌细胞MEK可能发生了变异，MEK1mRNA的RT-PCR实验表明病理血清培养的肝癌细胞MEK1的mRNA表达明显升高，这与病理血清能够促进MEK1的两个氨基酸位点磷酸化有关.而清肝化瘀方能够抑制MEK1的mRNA的表达，这可能与清肝化瘀方含药血清能够促进MEK1的两个氨基酸位点脱磷酸化，从而能降低MEK1蛋白的表达.
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ERK信号转导通路是目前研究最为彻底的MAPK通路[4-10]，他受生长因子刺激而激活后，移位至细胞核，引起转录因子的磷酸化，使得c-fos，c-myc，c-jun等基因的转录水平升高，导致细胞增生.免疫荧光显示，ERK位于胞质和胞核，激活后，移位至细胞核[11].我们也证实了这一点，病理血清作用细胞后，胞核着色明显加深，而清肝化瘀方含药血清作用细胞后，胞核着色明显减弱[2]，表明清肝化瘀方含药血清能明显减少ERK进入细胞核，抑制其在细胞核中的表达，因而能阻断TGFa在肝癌细胞中的信号传导，抑制TGFa诱导的肝癌细胞增生.
清肝化瘀方能阻断TGFa对肝癌细胞的作用，Western印迹表明，清肝化瘀方含药血清能抑制Raf、MEK、ERK蛋白的表达，但以抑制MEK蛋白为主.其机制可能与阻断TGFa信号传导有关.
4 参考文献1 姚树坤,韩俊岭, 殷飞.清肝化瘀方对大鼠肝癌前病变预防作用的研究.中国中西医结合脾胃杂志 2000;8:268-269
, 百拇医药
2 殷飞, 姚树坤.吴新满, 高洪生,李志辉. 肝症口服液含药血清对TGFa诱导SMMC-7721细胞增生和ERK蛋白的影响.世界华
人消化杂志 2001;9:1017-1020
3 殷飞,姚树坤, 高洪生.肝症口服液含药血清对转化生长因子a诱导人肝癌细胞SMMC-7721增生和凋亡的影响.中国中西
医结合消化杂志 2001;9:328-330
4 Ito Y, Sasaki Y, Horimoto M, Wada S, Tanaka Y, Kasahara A, Ueki T,Hirano T, Yamamoto H, Fujimoto J, Okamoto E,Hayashi N, Hori M. Activation of mitogen-activatedprotein kinases/extracellular signal-regulated kinases in human
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hepatocellular carcinoma. Hepatology 1998;27:951-958
5 Taupin D, Podolsky DK. Mitogen-activated protein kinase activationregulates intestinal epithelial differentiation.
Gastroenterology 1999;116:1072-1080
6 Gines P, Li XM, Brown SE, Nakamura T, Guzelian PS, Heasley LE,Schrier RW, Nemenoff RA. Inhibitory actions of cyclic
adenosine monophosphate and pertussis toxindefine two distinct epidermal growth factor-regulated pathwaysleading
, http://www.100md.com
to activation of mitogen-activated proteinkinase in rat hepatocytes. Hepatology 1996;23:1167-1173
7 Schaff Z, Hsia CC, Sarosi I, Tabor E. Overexpression oftransforming growth factor ain hepatocellular carcinoma and
focal nodular hyperplasia from Europeanpatients. Hum Pathol 1994;25:644-651
8 张静, 王文亮,李青, 乔庆.a-转化生长因子及其受体在人原发性肝细胞肝癌中的表达意义.世界华人消化杂志
1999;7:939-942
, 百拇医药
9 Tomoaki T, Kujiuara K. Serum transforming growth factor alevel as a marker of hepatocellular carcinoma complicating
cirrhosis. Cancer 1996;77:1056-1060
10 Wang XM, Tang ZY, Xue Q.Study of enhancement of liver cancer cell growth by transforming growthfactor a.
Zhongguo Zhongliu Linchuang 1995;22:153-156
11 Zheng CF, Guan KL. Cytoplasmic localization of the mitogen-activatedprotein kinase activator MEK. J Bio Chem
1994;269:19947-19952
编辑 张海宁, 百拇医药( 殷 飞, 吴新满, 高洪生, 姚树坤)
