文章编号:100025404(2001) 1121273203

    论著

    昆明山海棠总生物碱诱发 HL260 细胞凋亡的观察

    敖 琳1

    ,曹 佳1

    ,徐 颖2

    ,杨录军1

    ,周紫垣1

    ,刘胜学1

    (第三军医大学:

    1

    预防医学系卫生毒理学教研室;

    2

    附属新桥医

    院药理基地;重庆 400038)

    提 要: 目的 观察昆明山海棠(TH)总生物碱诱导白血病细胞凋亡的发生情况。方法 应用台盼蓝染色法 ,荧光双重染色

    法 ,DNA电泳结合流式细胞仪对 HL260细胞的凋亡进行观测。结果 HL260细胞在 TH总生物碱作用下出现典型的细胞凋亡特征 ,包括细胞形态改变、 DNA梯状带及亚 G 1 峰 ,且动态变化过程较为一致。结论 TH总生物碱具有较强的诱导白血病 HL260细胞凋亡

    的能力 ,总生物碱是 TH诱导凋亡的有效成份之一。

    关键词: 昆明山海棠; 总生物碱; 细胞凋亡; HL260细胞

    中图法分类号: R282. 71 ;R329. 28 文献标识码: A

    Apoptosis of human promyelocytic leukemia HL260 cells induced by total alkaloids of

    Tripterygium hypoglaucum (Level . ) Hutch

    AO Lin , CAO Jia , XU Ying , YANG Lu 2jun , ZHOU Zi2yuan , LIU Sheng 2xue (Laboratory of Molecular Toxicology , Third Military Medical University ,Chongqing 400038 , China)

    Abstract : Objective To study the apoptosis of human promyelocytic leukemia HL 260 cells induced by total alkaloids of Tripterygium hy2

    poglaucum (Level . ) Hutch (TH) . Methods Apoptosis induced by total alkaloids of TH in HL 260 cells was determined with trypan blue test , fluo 2

    rescent , PI double staining , agarose gel electrophoresis and flow cytometry analysis techniques. Re sults HL260 cell treated with the total alkaloids

    of TH demonstrated condensation and fragmentation of chromosomes. Nuclear DNA of apoptotic cells displayed typical ladder pattern which character 2

    ized internucleosomal DNA fragmentation , and the sub 2G 1 peaks appeared in flow cytometry analysis. Conclusion The total alkaloids of TH have

    strong effect to induce apoptosis in HL 260 cells and are effective ingredients of TH.

    Key words : TH; total alkaloid ; apoptosis ; HL260 cell

    目前认为 ,肿瘤不仅是细胞增殖与分化异常的疾

    病 ,同时也是凋亡异常的疾病 ,能否诱导靶细胞发生凋

    亡已经成为鉴定抗癌药物是否有效的一个重要指标。

    近年来的研究表明从毒副作用相对较小的中药中寻找

    新的抗癌药物是一个积极的方向。中药昆明山海棠

    ( Tripterygium hypoglaucum Hutch , 简称 TH)属卫茅科雷

    公藤属植物,我们首次报道了 TH水提取液能诱导多种

    细胞凋亡,尤其对Jurkat , HL260白血病细胞有较强的凋

    亡诱导效率,提示 TH 可能成为一种新的抗肿瘤药

    物[1 ,2]。但 TH水提取液的成份复杂,有必要进一步寻

    找其有效成份,为此,我们提取 TH的主要成份之一的总

    生物碱,并研究其诱导 HL260细胞凋亡的发生情况。

    1 材料与方法

    1. 1 实验材料

    TH购自云南省医药公司。Hoechst 33342 , PI荧光染料及

    RNase A为 Sigma公司产品 ,蛋白酶 K为华美公司产品。

    基金项目:国家自然科学基金资助项目(30100241) ;第三军医大学科研基金

    资助项目

    作者简介:敖 琳(1971 - ) ,女 ,重庆市人 ,硕士 ,讲师 ,主要从事遗传毒理和

    分子毒理学研究 ,发表论文5篇。电话: (023) 68752295

    收稿日期:2001202207 ;修回日期:2001206220

    HL260 细胞由本室保存 ,培养于 10 %小牛血清的 RPMI

    1640 ,传代至旺盛生长后 ,试验前调整细胞浓度为 2× 108

    · L - 1。

    1. 2 实验方法

    1. 2. 1 TH总生物碱的提取[3 ]

    取 TH根块 ,粉碎后用 60 %

    乙醇浸泡6 d ,滤出药液 ,水浴浓缩。加入 HCl 酸化后 ,滤出药

    液 ,用乙醚和氯仿各萃取2次 ,保留水相。加入Na2CO3 碱化 ,用

    氯仿萃取2次 ,保留有机相。水浴挥干后 ,得淡黄色固体 ,加入

    二甲基亚砜(DMSO)溶解 ,60

    Co 照射灭菌 ,分装后 - 20℃保存。

    TH总生物碱溶液浓度为14 g· L - 1。

    1. 2. 2 细胞存活率测定 细胞经药物处理后 ,于 0 ,4 ,12 ,24 ,48 h采样。加入台盼蓝染液至终浓度 0. 4 % ,染色 2～5 min

    后 ,滴片 ,计算细胞存活率 ......