人截断型LBP基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建

http://www.100md.com 王晓东 刘友生 张杰 高波 薛沿宁

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     王晓东；刘友生；张杰；高波；薛沿宁 第三军医大学附属西南医院病理学研究所；重庆400038；军事医学科学院基础医学研究所；北京100850 第三军医大学学报 2001 6

    关键词：截断型脂多糖结合蛋白；基因克隆；重组载体

    目的 构建人N端截断型脂多糖结合蛋白 (tLBP)基因的杆状病毒表达载体 ,为后续的蛋白表达及其抗内毒素保护作用研究奠定基础。方法 采用PCR技术从人全长LBP基因cDNA中扩增长度为 6 95bp的基因片段 ,经pGEM T载体亚克隆筛选和序列分析后 ,应用Bac To Bac杆状病毒表达系统 ,基因重组和外源基因转座分别构建转移质粒pFASTBACtLBP和穿梭质粒pBacmidtLBP。结果 经PCR、琼脂糖凝胶电泳、酶切分析及序列测定 ,所克隆的基因片段为 70 0bp左右的tLBP ,并证实其目的基因重组载体发生了特异转座和病毒重组。结论 本实验成功克隆了tLBP目的基因片段并构建其杆状

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