TR基因重组腺病毒载体的构建和鉴定

http://www.100md.com 徐江英 许琳 彭光勇 丁传林 卢是月 姚

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     徐江英；许琳；彭光勇；丁传林；卢是月；姚堃 南京医科大学微生物与免疫学系江苏省医学分子生物学重点实验室 江苏南京210029；第二军医大学南京军医学院生物基因研究中心 细胞与分子免疫学杂志 2003 5

    关键词：人硫氧还蛋白还原酶基因；腺病毒；基因表达载体

    目的:构建含人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因的重组腺病毒载体,探讨TR的抗氧化功能与神经退行性疾病的相关性。方法:从重组质粒pGEM TR上用内切酶切下编码5 0 0个氨基酸的全长TRcDNA片段,并连接穿梭质粒pShuttle,再双酶切pShuttle TR。将带有CMV启动子的目的片段,插入E1、E3缺失的Adeno X病毒DNA中,以Adeno TRDNA通过脂质体转染HEK2 93细胞,获得重组腺病毒Adeno TR进行PCR鉴定及病毒滴度测定。用重组腺病毒感染CV1细胞,通过免疫荧光染色与Westernblot分别检测重组腺病毒感染的细胞上和裂解液中TR蛋白的表达。结果:重组腺病毒Adeno TR的病毒滴度为4 .4×10 1 ...

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