生物工程技术制备人源抗-HBs Fab片段

http://www.100md.com 安峰 陈玉川 陆慧琦 韩焕兴

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     安峰；陈玉川；陆慧琦；韩焕兴 中山大学中山医学院法医病理学教研室 广东 广州 510080；第二军医大学长征医院临床免疫中心 上海 200003 细胞与分子免疫学杂志 2003 1

    关键词：Fab片段；六聚组氨酸尾；亲和层析

    目的:用生物工程技术制备人源性抗-HBs F-ah。方法:将从抗体文库中筛选出的人源抗-HBs Fab基因克隆人pBAD/gⅢA载体,进而转化Top10大肠杆菌。对重组质粒菌发酵表达后,利用Ni-NTA-Agarose螯合层析柱纯化周质腔可溶性Fab 蛋白。对所得包涵体依次变性、溶解、纯化后,利用透析进行复性。用Western blot检测Fab蛋白的特异性,Dot blot测定其生物学活性。结果:经Ni-NTA-Agarose柱纯化的周质腔可溶性Fab蛋白,有较好的生物学活性,并且总量达到80mg/L。对所获包涵体进行透析复性后,也可得到少量有活性的蛋白,但比例很小。结论:用pBAD/gⅢA-Top10表达系统表达人源...

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