泥鳅有机提取物抗氧化作用的实验研究
【摘要】 目的 泥鳅有机提取物对小鼠脏器的抗氧化作用。
方法 应用食品功效学实验中小鼠组织中过氧化脂质含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活力测定的方法。
结果 泥鳅有机提取物实验组小白鼠的肝、肾脏器谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性高于对照组;各脏器的丙二醛(MDA)的含量低于对照组。
结论 泥鳅有机提取物具有一定的抗氧化作用，并提示可能具有延缓衰老作用。
【关键词】 泥鳅 有机提取物 抗氧化 GSH-Px SOD MDA
Experimental study on antioxidation effects of organic extracts of misgurnus anguillicaudatus cantor Li Hongzhi，Huang Qingsong，Chen Weiqiang，et al.
College of Basic，Guangdong Pharmaceutical College，Guangzhou510224.
【Abstract】 Objective To search the effects of organic extracts of misgurnus anguillicaudatus cantor on the antioxidation of mice organs.Methods Three different concentration groups and a control group were selected.After one month MDA content，SOD and GSH-Px activites of mice in liver，kidney and heart were observed.Results Mice fed with misgurnus anguillicaudatus cantor，the activities of SOD and GSH-Px in liver，kidney and heartwere high than the control group's，the level of MDA in liver，kidney and heart were decreased than the control group's.Conclusion The results suggested that organic extracts of misgurnus anguillicaudatus cantor had the action of antioxi-dation.
【Key words】 misgurnus anguillicaudatus cantor organic extracts antioxidation GSH-Px SOD MDA
泥鳅(misgurnus anguillicaudatus cantor)是鳅科动物，肉或全体入药，收载于《中药大辞典》 [1] 。其主要功效为补脾益气、滋阴壮阳、清热解毒、祛湿邪、治消渴、水肿、黄疸、痢疾、阳痿等症。民间常用其粘液治痈肿、中耳炎，用活泥鳅捣碎外敷治疗乳癌、骨髓炎等，疗效显著，近代用于治疗传染性肝炎和糖尿病 [2] 。本研究通过对广东产泥鳅有机提取物进行小鼠的体外抗氧化作用的实验研究，为其在医药和保健食品中的应用提供科学依据。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 泥鳅有机提取物的提取 新鲜状态的活泥鳅去内脏、剔骨除刺后，将肉剪碎备用。每组泥鳅样品称取200g剪碎的肉，加入经过干燥处理的无水硫酸钠研磨脱水，放置12h后筛出干燥的泥鳅肉，包入预先经乙醚处理过的滤纸中，放入索氏提取器内，用分析纯乙醚提取8h。提取液经KD浓缩、真空干燥后用花生油溶解，定容至10ml，放入冰箱备检。
1.1.2 实验动物 昆明种小白鼠，13月龄，均为雌性，体重20～22g，由中山大学中山医学院医学动物中心提供。
1.1.3 实验试剂 二甲砷酸钠，四乙氧基丙烷，5，5'-二硫代二硝基苯甲酸均为Fluka产品;L-谷胱甘肽为进口分装产品;牛血清白蛋白为军事医学科学院产品;二乙三氨五乙酸和叠氮化钠为上海化学试剂采购供应站供应;三羟甲基氨基甲烷及硫代巴比妥酸为上海酵母厂产品。
1.1.4 实验仪器 721—分光光度计、匀浆器、离心机、恒温水浴箱、电子天平。
1.2 方法
1.2.1 分组及饲养 将小鼠按体重随机分为3个实验组和1个对照组，每组10只。各组小鼠均食普通饲料和自来水，对照组给予花生油，实验组小鼠给予不同剂量的泥鳅有机提取物，分别为每千克体重200、100、50mg泥鳅肉(湿重)。以灌饲方式给予。
1.2.2 测定方法 小鼠喂养30天后，颈椎脱位法处死，取心、肝、肾组织，用冷生理盐水冲洗，拭干，放入小玻璃瓶中冷冻备用。
1.2.3 测定指标 以5，5'-双硫代对硝基苯甲酸直接比色法(DTNB法)测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;经邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力;以硫代巴比妥酸比色法测定丙二醛(MDA)含量水平。
1.2.4 统计学处理 实验结果以(ˉx±s)表示，，组间显著性检验采用方差分析法中的t检验。
2 结果
2.1 灌饲不同剂量泥鳅有机提取物后小鼠心、肝、肾脏器组织GSH-Px氧化酶活力测定(见表1)。
由表1可见，与对照组比较，低、中、高剂量组心肌组织的GSH-Px活力明显提高;肝脏、肾脏组织中的高、中剂量组的GSH-Px活力提高显著。
2.2 灌饲不同剂量泥鳅有机提取物后小鼠心、肝、肾脏组织SOD氧化酶活力测定(见表2)。
表1 灌饲不同剂量泥鳅有机提取物小鼠心、肝、肾脏器组织GSH-Px(U/mg蛋白)活力比较(ˉx±s)(表略)
注:与对照组比较 * P<0.05
表2 灌饲不同剂量泥鳅有机提取物小鼠心、肝、肾脏器组织SOD(U/mg蛋白)活力比较(ˉx±s)(表略)
注:与对照组比较 * P<0.05
由表2可见，与对照组比较，心肌组织、肝脏和肾脏组织各剂量组的SOD活力明显提高。
2.3 灌饲不同剂量泥鳅有机提取物后小鼠心、肝、肾脏组织MDA含量测定(见表3)
表3 灌饲不同剂量泥鳅有机提取物后小鼠心、肝、肾脏器组织MDA(mmol/g湿组织)含量比较(ˉx±s)(表略)
注:与对照组比较 * P<0.05
由表3可见，与对照组比较，肝脏组织中、高剂量组的MDA含量显著降低;心肌和肾脏组织各剂量组的MDA含量明显降低。
3 讨论
在稳态平衡失调的情况下，体内过剩自由基和活性氧的产生及引发的脂质过氧化反应与衰老过程及许多疾病的发生发展密切相关 [3，4] ，降低脂质过氧化物的生成和(或)加速氧化物的清除，防止过氧化脂质对组织细胞的损伤作用，有利于延缓衰老进程和某些疾患的防治。近年来的研究成果表明:泥鳅中含有大量对人体有益的生物活性物质，如蛋白质、抗菌肽 [5] 、糖蛋白 [6] 、泥鳅多糖 [7] 、不饱和多烯脂肪酸、牛磺酸和赖氨酸等必需氨基酸以及锌、硒等微量营养元素 [8] 。它们具有提高机体免疫力的作用，对于人类防病治病、强身健体、延年益寿大有裨益。
有关泥鳅多糖的化学组成、分子结构、生物活性、药理作用等已成为国内外研究的热点之一。实验研究证明 [7] :泥鳅多糖具有清除自由基、抗炎、降血糖、调节血脂、调节机体免疫功能及降黄疸等作用。泥鳅多糖的降血糖作用可能是通过增强机体清除活性氧自由基的能力，从而抑制自由基对胰岛β细胞的损伤，促进胰岛β细胞的修复与再生而实现的。泥鳅多糖能对抗自由基损伤，从而改善胰岛素相对不足及脂质过氧化所致的脂代谢紊乱，可能是降血脂的机制之一。
本文应用食品功效学实验中小鼠组织中过氧化脂质含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活力测定的方法，对本地产泥鳅有机提取物进行小鼠体外抗氧化作用的实验研究，结果表明泥鳅有机提取物实验组小白鼠的肝、肾脏器谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性高于对照组;各脏器的丙二醛(MDA)的含量低于对照组。说明泥鳅有机提取物具有抗氧化作用，并提示可能具有抗衰老功能，也验证了上述学者的研究，但还不能看出两者之间的量效关系，有关这方面的研究有待于进一步深入的探讨。
参考文献
1 Jiangsu New Medical College.The Dictionary of Chinese Traditional Medicine(中药大辞典).Shanghai:Shanghai Science andThchnology Press，1992，1457-1458.
2 Qin CG，Huang KX，Xu HB.Expenimental study on anti-inflamma-tory effects of loach and its mucus.Chin Pharm J(中国药学杂志)，2000，35(12):846-847.
3 Knight JA.The produce and theories of aging.Ann Clin Lab Sci， 1995，25:1-4.
4 Amea BN.Oxidants，antioxidants，and the degenerative disease of ag- ing.Proc Natl Acad Sci USA，1993，90:791-795.
5 Park CB，Lee JH，Park IY，et al.A novel antimicrobial peptide from the loach，Misgurnus anguillicaudatud.FEBS Lett，1997，411(2-
3):173-178.
6 Krmura M，Hama Y，Sumi T，et al.Characterization of a deaminated neuraminic acid-containing glycoprotein from the skin mucus of the loach，Misgurnus anguillicaudatus.J Biol Chem，1994，269(51):
32188-32143.
7 Qin GC，Zhou J，Zhao W，et al.Effects of the loach polysaccharide
on removal of reactive oxygen species and protection of DNA chains.
Acta Biochim Biophys Sin(生物化学与生物物理学报)，2001，33(22):215-218.
8 Qin GC，Chen ZX，Zhou J，et al.Analysis of trace elements in the loach，Misgurnus angillicaudatus and its extractives.Trace Elements Health Res(微量元素与键康研究)，2001，18(1):49-50.
作者单位:510224广州广东药学院基础学院, 百拇医药(李红枝 黄清松 陈伟强 黄思翔)
方法 应用食品功效学实验中小鼠组织中过氧化脂质含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活力测定的方法。
结果 泥鳅有机提取物实验组小白鼠的肝、肾脏器谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性高于对照组;各脏器的丙二醛(MDA)的含量低于对照组。
结论 泥鳅有机提取物具有一定的抗氧化作用，并提示可能具有延缓衰老作用。
【关键词】 泥鳅 有机提取物 抗氧化 GSH-Px SOD MDA
Experimental study on antioxidation effects of organic extracts of misgurnus anguillicaudatus cantor Li Hongzhi，Huang Qingsong，Chen Weiqiang，et al.
College of Basic，Guangdong Pharmaceutical College，Guangzhou510224.
【Abstract】 Objective To search the effects of organic extracts of misgurnus anguillicaudatus cantor on the antioxidation of mice organs.Methods Three different concentration groups and a control group were selected.After one month MDA content，SOD and GSH-Px activites of mice in liver，kidney and heart were observed.Results Mice fed with misgurnus anguillicaudatus cantor，the activities of SOD and GSH-Px in liver，kidney and heartwere high than the control group's，the level of MDA in liver，kidney and heart were decreased than the control group's.Conclusion The results suggested that organic extracts of misgurnus anguillicaudatus cantor had the action of antioxi-dation.
【Key words】 misgurnus anguillicaudatus cantor organic extracts antioxidation GSH-Px SOD MDA
泥鳅(misgurnus anguillicaudatus cantor)是鳅科动物，肉或全体入药，收载于《中药大辞典》 [1] 。其主要功效为补脾益气、滋阴壮阳、清热解毒、祛湿邪、治消渴、水肿、黄疸、痢疾、阳痿等症。民间常用其粘液治痈肿、中耳炎，用活泥鳅捣碎外敷治疗乳癌、骨髓炎等，疗效显著，近代用于治疗传染性肝炎和糖尿病 [2] 。本研究通过对广东产泥鳅有机提取物进行小鼠的体外抗氧化作用的实验研究，为其在医药和保健食品中的应用提供科学依据。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 泥鳅有机提取物的提取 新鲜状态的活泥鳅去内脏、剔骨除刺后，将肉剪碎备用。每组泥鳅样品称取200g剪碎的肉，加入经过干燥处理的无水硫酸钠研磨脱水，放置12h后筛出干燥的泥鳅肉，包入预先经乙醚处理过的滤纸中，放入索氏提取器内，用分析纯乙醚提取8h。提取液经KD浓缩、真空干燥后用花生油溶解，定容至10ml，放入冰箱备检。
1.1.2 实验动物 昆明种小白鼠，13月龄，均为雌性，体重20～22g，由中山大学中山医学院医学动物中心提供。
1.1.3 实验试剂 二甲砷酸钠，四乙氧基丙烷，5，5'-二硫代二硝基苯甲酸均为Fluka产品;L-谷胱甘肽为进口分装产品;牛血清白蛋白为军事医学科学院产品;二乙三氨五乙酸和叠氮化钠为上海化学试剂采购供应站供应;三羟甲基氨基甲烷及硫代巴比妥酸为上海酵母厂产品。
1.1.4 实验仪器 721—分光光度计、匀浆器、离心机、恒温水浴箱、电子天平。
1.2 方法
1.2.1 分组及饲养 将小鼠按体重随机分为3个实验组和1个对照组，每组10只。各组小鼠均食普通饲料和自来水，对照组给予花生油，实验组小鼠给予不同剂量的泥鳅有机提取物，分别为每千克体重200、100、50mg泥鳅肉(湿重)。以灌饲方式给予。
1.2.2 测定方法 小鼠喂养30天后，颈椎脱位法处死，取心、肝、肾组织，用冷生理盐水冲洗，拭干，放入小玻璃瓶中冷冻备用。
1.2.3 测定指标 以5，5'-双硫代对硝基苯甲酸直接比色法(DTNB法)测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;经邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力;以硫代巴比妥酸比色法测定丙二醛(MDA)含量水平。
1.2.4 统计学处理 实验结果以(ˉx±s)表示，，组间显著性检验采用方差分析法中的t检验。
2 结果
2.1 灌饲不同剂量泥鳅有机提取物后小鼠心、肝、肾脏器组织GSH-Px氧化酶活力测定(见表1)。
由表1可见，与对照组比较，低、中、高剂量组心肌组织的GSH-Px活力明显提高;肝脏、肾脏组织中的高、中剂量组的GSH-Px活力提高显著。
2.2 灌饲不同剂量泥鳅有机提取物后小鼠心、肝、肾脏组织SOD氧化酶活力测定(见表2)。
表1 灌饲不同剂量泥鳅有机提取物小鼠心、肝、肾脏器组织GSH-Px(U/mg蛋白)活力比较(ˉx±s)(表略)
注:与对照组比较 * P<0.05
表2 灌饲不同剂量泥鳅有机提取物小鼠心、肝、肾脏器组织SOD(U/mg蛋白)活力比较(ˉx±s)(表略)
注:与对照组比较 * P<0.05
由表2可见，与对照组比较，心肌组织、肝脏和肾脏组织各剂量组的SOD活力明显提高。
2.3 灌饲不同剂量泥鳅有机提取物后小鼠心、肝、肾脏组织MDA含量测定(见表3)
表3 灌饲不同剂量泥鳅有机提取物后小鼠心、肝、肾脏器组织MDA(mmol/g湿组织)含量比较(ˉx±s)(表略)
注:与对照组比较 * P<0.05
由表3可见，与对照组比较，肝脏组织中、高剂量组的MDA含量显著降低;心肌和肾脏组织各剂量组的MDA含量明显降低。
3 讨论
在稳态平衡失调的情况下，体内过剩自由基和活性氧的产生及引发的脂质过氧化反应与衰老过程及许多疾病的发生发展密切相关 [3，4] ，降低脂质过氧化物的生成和(或)加速氧化物的清除，防止过氧化脂质对组织细胞的损伤作用，有利于延缓衰老进程和某些疾患的防治。近年来的研究成果表明:泥鳅中含有大量对人体有益的生物活性物质，如蛋白质、抗菌肽 [5] 、糖蛋白 [6] 、泥鳅多糖 [7] 、不饱和多烯脂肪酸、牛磺酸和赖氨酸等必需氨基酸以及锌、硒等微量营养元素 [8] 。它们具有提高机体免疫力的作用，对于人类防病治病、强身健体、延年益寿大有裨益。
有关泥鳅多糖的化学组成、分子结构、生物活性、药理作用等已成为国内外研究的热点之一。实验研究证明 [7] :泥鳅多糖具有清除自由基、抗炎、降血糖、调节血脂、调节机体免疫功能及降黄疸等作用。泥鳅多糖的降血糖作用可能是通过增强机体清除活性氧自由基的能力，从而抑制自由基对胰岛β细胞的损伤，促进胰岛β细胞的修复与再生而实现的。泥鳅多糖能对抗自由基损伤，从而改善胰岛素相对不足及脂质过氧化所致的脂代谢紊乱，可能是降血脂的机制之一。
本文应用食品功效学实验中小鼠组织中过氧化脂质含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活力测定的方法，对本地产泥鳅有机提取物进行小鼠体外抗氧化作用的实验研究，结果表明泥鳅有机提取物实验组小白鼠的肝、肾脏器谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性高于对照组;各脏器的丙二醛(MDA)的含量低于对照组。说明泥鳅有机提取物具有抗氧化作用，并提示可能具有抗衰老功能，也验证了上述学者的研究，但还不能看出两者之间的量效关系，有关这方面的研究有待于进一步深入的探讨。
参考文献
1 Jiangsu New Medical College.The Dictionary of Chinese Traditional Medicine(中药大辞典).Shanghai:Shanghai Science andThchnology Press，1992，1457-1458.
2 Qin CG，Huang KX，Xu HB.Expenimental study on anti-inflamma-tory effects of loach and its mucus.Chin Pharm J(中国药学杂志)，2000，35(12):846-847.
3 Knight JA.The produce and theories of aging.Ann Clin Lab Sci， 1995，25:1-4.
4 Amea BN.Oxidants，antioxidants，and the degenerative disease of ag- ing.Proc Natl Acad Sci USA，1993，90:791-795.
5 Park CB，Lee JH，Park IY，et al.A novel antimicrobial peptide from the loach，Misgurnus anguillicaudatud.FEBS Lett，1997，411(2-
3):173-178.
6 Krmura M，Hama Y，Sumi T，et al.Characterization of a deaminated neuraminic acid-containing glycoprotein from the skin mucus of the loach，Misgurnus anguillicaudatus.J Biol Chem，1994，269(51):
32188-32143.
7 Qin GC，Zhou J，Zhao W，et al.Effects of the loach polysaccharide
on removal of reactive oxygen species and protection of DNA chains.
Acta Biochim Biophys Sin(生物化学与生物物理学报)，2001，33(22):215-218.
8 Qin GC，Chen ZX，Zhou J，et al.Analysis of trace elements in the loach，Misgurnus angillicaudatus and its extractives.Trace Elements Health Res(微量元素与键康研究)，2001，18(1):49-50.
作者单位:510224广州广东药学院基础学院, 百拇医药(李红枝 黄清松 陈伟强 黄思翔)