GAP-43原核表达载体的构建、表达及抗GAP-43单克隆抗体的制备
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段小莉；黄文晋；王百忍；宋俊峰；金卫林；郭翔；鞠躬
GAP-43|原核表达|单克隆抗体,关键词：
参见附件(55kb)。
段小莉；黄文晋；王百忍；宋俊峰；金卫林；郭翔；鞠躬 第四军医大学神经科学研究所 陕西西安710032 细胞与分子免疫学杂志 2003 5
关键词：GAP-43；原核表达；单克隆抗体
目的:原核表达神经生长相关蛋白 4 3(GAP 4 3) ,并制备抗GAP 4 3的单克隆抗体(mAb)。方法:从含有GAP 4 3cDNA的质粒中,用PCR扩增GAP 4 3cDNA的全长编码序列,克隆入表达载体pGEX 4T 1中,构建GAP 4 3的高表达工程菌,并以IPTG诱导表达目的蛋白。通过亲和层析法纯化表达的GST GAP 4 3融合蛋白,并以此为抗原制备mAb。结果:酶切鉴定证明,获得含有目的基因片段的重组质粒。表达的GST GAP 4 3融合蛋白以可溶性的形式存在。ELISA检测表明,获得的抗GAP 4 3mAb效价为1∶10 8,其IgG的亚类为IgG2a,亚型为κ型。用Westernblot检测大鼠脑匀浆蛋白,在相对分子质量(Mr)为 ...
关键词：GAP-43；原核表达；单克隆抗体
目的:原核表达神经生长相关蛋白 4 3(GAP 4 3) ,并制备抗GAP 4 3的单克隆抗体(mAb)。方法:从含有GAP 4 3cDNA的质粒中,用PCR扩增GAP 4 3cDNA的全长编码序列,克隆入表达载体pGEX 4T 1中,构建GAP 4 3的高表达工程菌,并以IPTG诱导表达目的蛋白。通过亲和层析法纯化表达的GST GAP 4 3融合蛋白,并以此为抗原制备mAb。结果:酶切鉴定证明,获得含有目的基因片段的重组质粒。表达的GST GAP 4 3融合蛋白以可溶性的形式存在。ELISA检测表明,获得的抗GAP 4 3mAb效价为1∶10 8,其IgG的亚类为IgG2a,亚型为κ型。用Westernblot检测大鼠脑匀浆蛋白,在相对分子质量(Mr)为 ...
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