VEGF_(165)cDNA在酵母中的表达、纯化及其生物学活性研究
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马骊；王小宁；张智清；陈爱君；姚立红；姜忠良
血管内皮生长因子|毕赤巴斯德酵母|表达,关键词：
参见附件(479kb)。
马骊；王小宁；张智清；陈爱君；姚立红；姜忠良 第一军医大学分子免疫学研究所；广东广州510515；病毒基因工程国家重点实验室；北京100052 细胞与分子免疫学杂志 2001 1
关键词：血管内皮生长因子；毕赤巴斯德酵母；表达
目的研究人 VEGF165基因在 Pichia pastoris酵母中的表达，获得高效表达、具有生物学活性的重组hVEGF165。方法采用PCR扩增hVEGF165基因，经DNA序列分析后，插入含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的Pichia pastoris酵母表达载体中，构建重组质粒pPIC9K/hVEGF165。经转化酵母宿主菌KM71，筛选多拷贝整合转化子，摇瓶培养，用 10 mL/L甲醇诱导表达。表达产物经Heparin-Sepharose CL6B亲和层析纯化后，以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)测定其生物学活性。结果：SDS-PAGE分析显示，表达产物以可溶性分子的形式存在于上清中，诱导4d的表达量达上清中总蛋白的60%以上。Western blot表明，表达产物具有良好的抗原性和特异性。
关键词：血管内皮生长因子；毕赤巴斯德酵母；表达
目的研究人 VEGF165基因在 Pichia pastoris酵母中的表达，获得高效表达、具有生物学活性的重组hVEGF165。方法采用PCR扩增hVEGF165基因，经DNA序列分析后，插入含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的Pichia pastoris酵母表达载体中，构建重组质粒pPIC9K/hVEGF165。经转化酵母宿主菌KM71，筛选多拷贝整合转化子，摇瓶培养，用 10 mL/L甲醇诱导表达。表达产物经Heparin-Sepharose CL6B亲和层析纯化后，以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)测定其生物学活性。结果：SDS-PAGE分析显示，表达产物以可溶性分子的形式存在于上清中，诱导4d的表达量达上清中总蛋白的60%以上。Western blot表明，表达产物具有良好的抗原性和特异性。
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