多种缺损及突变的PrP蛋白在杆状病毒中的表达和纯化
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张瑾；张福萍；聂凯；陈岚；周伟；刘勇；董小平
PrP|杆状病毒|表达|信号肽,关键词：
参见附件(89kb)。
张瑾；张福萍；聂凯；陈岚；周伟；刘勇；董小平 中国医学科学院基础医学研究所；中国协和医科大学基础医学院；医学分子生物学国家重点实验室 北京100005；中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 北京100052；西安交通大学医学院 西安710061 病毒学报 2003 1
关键词：PrP；杆状病毒；表达；信号肽
PrP蛋白多肽序列上存在有不同的功能区域 ,影响着蛋白质构象、理化特性和生物学功能。为了获得不同缺损及突变的仓鼠PrP蛋白 ,以PCR方法获得不同大小的PrP基因片段 ,利用PCR大引物点诱变法获得带有突变糖基化位点PrP序列。所有PCR产物测序鉴定正确后 ,分别与pFASTBAC Hb质粒连接 ,与穿梭载体DH10BAC转座 ,构建各种重组病毒。Westernblot证实 ,8种不同长度的仓鼠PrP蛋白可在昆虫细胞Sf9中表达 ,包括全序列的PrP1 2 31,信号肽缺失的PrP2 3 2 31;N端缺损的PrP90 2 31和PrP12 0 2 31;C端缺损的PrP1 199、PrP1 174和PrP1 16 0。糖基化位点突变 :PrP2 3 2 3 ...
关键词：PrP；杆状病毒；表达；信号肽
PrP蛋白多肽序列上存在有不同的功能区域 ,影响着蛋白质构象、理化特性和生物学功能。为了获得不同缺损及突变的仓鼠PrP蛋白 ,以PCR方法获得不同大小的PrP基因片段 ,利用PCR大引物点诱变法获得带有突变糖基化位点PrP序列。所有PCR产物测序鉴定正确后 ,分别与pFASTBAC Hb质粒连接 ,与穿梭载体DH10BAC转座 ,构建各种重组病毒。Westernblot证实 ,8种不同长度的仓鼠PrP蛋白可在昆虫细胞Sf9中表达 ,包括全序列的PrP1 2 31,信号肽缺失的PrP2 3 2 31;N端缺损的PrP90 2 31和PrP12 0 2 31;C端缺损的PrP1 199、PrP1 174和PrP1 16 0。糖基化位点突变 :PrP2 3 2 3 ...
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