带6个组氨酸尾的可溶性GDNF第1受体的重组表达和活性分析
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陈立南；孙成三；陈晴；段德义；杨慧；张进禄；徐群渊
蛋白纯化|真核表达|受体|表位标记|胶质细胞源性神经营养因子|受体酪氨酸激酶,关键词：
参见附件(53kb)。
陈立南；孙成三；陈晴；段德义；杨慧；张进禄；徐群渊 首都医科大学北京神经科学研究所 北京100054 解剖学报 2002 2
关键词：蛋白纯化；真核表达；受体；表位标记；胶质细胞源性神经营养因子；受体酪氨酸激酶
目的 用DNA重组方法去除胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)受体 (GFRα 1)基因 3' 端的与细胞膜糖基化磷脂酰肌醇 (GPI)相连的信号序列 ,使表达的GFRα 1以可溶性形式介导GDNF的作用。 方法 设计一对引物 ,其中下游引物含有 6个组氨酸密码子序列 ,以人GFRα 1全长cDNA为模板 ,PCR扩增编码可溶性GFRα 1序列并亚克隆于pBK RSV真核表达载体 ,转染COS 7细胞 ,收获培养上清 ,进行SDS PAGE及Western免疫印迹分析 ;使用钴离子金属螯合层析柱进行纯化 ;检测RET酪氨酸磷酸化以鉴定其生物学活性。 结果 Western免疫印迹证实培养上清液中有分子量为 6 0kD的 ...
关键词：蛋白纯化；真核表达；受体；表位标记；胶质细胞源性神经营养因子；受体酪氨酸激酶
目的 用DNA重组方法去除胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)受体 (GFRα 1)基因 3' 端的与细胞膜糖基化磷脂酰肌醇 (GPI)相连的信号序列 ,使表达的GFRα 1以可溶性形式介导GDNF的作用。 方法 设计一对引物 ,其中下游引物含有 6个组氨酸密码子序列 ,以人GFRα 1全长cDNA为模板 ,PCR扩增编码可溶性GFRα 1序列并亚克隆于pBK RSV真核表达载体 ,转染COS 7细胞 ,收获培养上清 ,进行SDS PAGE及Western免疫印迹分析 ;使用钴离子金属螯合层析柱进行纯化 ;检测RET酪氨酸磷酸化以鉴定其生物学活性。 结果 Western免疫印迹证实培养上清液中有分子量为 6 0kD的 ...
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