基因工程技术制备的人源性抗M_r48×10~3角蛋白抗体Fab片段的纯化与活性鉴定
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李承新；刘玉峰；王刚；李春英；万业宏
角蛋白|人源性抗体|Fab|制备|鉴定,关键词：
参见附件(125kb)。
李承新；刘玉峰；王刚；李春英；万业宏 第四军医大学西京医院皮肤科；陕西西安710033 第四军医大学学报 2001 13
关键词：角蛋白；人源性抗体；Fab；制备；鉴定
目的 用基因工程技术制备人源性抗角蛋白抗体Fab片段 ,并对其纯度、抗原结合活性及特异性等进行鉴定 .方法 将从半合成噬菌体抗体库中成功地筛选到的特异表达抗角蛋白 Fab片段的阳性克隆转化大肠杆菌 ,IPTG诱导表达 ,产物经金属鏊合层析纯化 ,并用 EL ISA鉴定抗原结合活性和特异性、SDS- PAGE鉴定纯度和蛋白印迹检测抗角蛋白抗体 Fab片段识别的抗原组分 .结果 可溶性表达的抗角蛋白抗体 Fab片段经金属鏊合层析可有效地纯化 ,蛋白印迹明确纯化产物为人 Fab片段 .所纯化的 Fab片段在非还原 SDS-PAGE中形成 Mr5 0× 10 3单一条带 ,在还原 SDS- PAGE中可溶性片段，为人源性抗角蛋白质抗体工程化、进一步研究该抗体的生物活性并提高其临床应用价值奠定了良好的基础。
关键词：角蛋白；人源性抗体；Fab；制备；鉴定
目的 用基因工程技术制备人源性抗角蛋白抗体Fab片段 ,并对其纯度、抗原结合活性及特异性等进行鉴定 .方法 将从半合成噬菌体抗体库中成功地筛选到的特异表达抗角蛋白 Fab片段的阳性克隆转化大肠杆菌 ,IPTG诱导表达 ,产物经金属鏊合层析纯化 ,并用 EL ISA鉴定抗原结合活性和特异性、SDS- PAGE鉴定纯度和蛋白印迹检测抗角蛋白抗体 Fab片段识别的抗原组分 .结果 可溶性表达的抗角蛋白抗体 Fab片段经金属鏊合层析可有效地纯化 ,蛋白印迹明确纯化产物为人 Fab片段 .所纯化的 Fab片段在非还原 SDS-PAGE中形成 Mr5 0× 10 3单一条带 ,在还原 SDS- PAGE中可溶性片段，为人源性抗角蛋白质抗体工程化、进一步研究该抗体的生物活性并提高其临床应用价值奠定了良好的基础。
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