IA-2基因的克隆及原核表达研究
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宗阳；罗敏；丁伟；金群燕；陈源；陈刚；蔡东升；刘优萍；谢超
自身抗原|基因表达|IA-2,关键词：
参见附件(31kb)。
宗阳；罗敏；丁伟；金群燕；陈源；陈刚；蔡东升；刘优萍；谢超 浙江大学医学院附属第二医院内分泌科310009；上海第二医科大学附属瑞金医院200025 中华内分泌代谢杂志 2001 1
关键词：自身抗原；基因表达；IA-2
目的 应用基因工程技术获取足量且具有免疫活性的IA 2重组蛋白,为建立IA 2抗体检测方法奠定基础。方法 通过逆转录聚合酶链反应(RT PCR)法从小鼠脑组织RNA中扩增编码IA 2胞内结构域的cDNA,构建表达型重组质粒,经DNA序列分析确证后,在大肠杆菌中表达,用亲和层析纯化融合目的蛋白,并以斑点印迹技术(Dotbkot)鉴定其免疫原性。结果 所获特异PCR产物正确重组至PinpointXa 1表达载体中。经异丙基硫代半乳糖苷诱导的原核表达及亲和层析得到了纯度较高、相对分子质量约56000的融合目的蛋白,表达量约1mg蛋白/升菌液,且表达产物与谷氨酸脱羧酶抗体阳性的糖尿病患者血清及健康对照血清发生的显色反应差异有显著性(P<0.05)。结论 原核表达的IA 2融合蛋白具有免疫学活性,可用于糖尿病患者血清中相关抗体的检测。
关键词：自身抗原；基因表达；IA-2
目的 应用基因工程技术获取足量且具有免疫活性的IA 2重组蛋白,为建立IA 2抗体检测方法奠定基础。方法 通过逆转录聚合酶链反应(RT PCR)法从小鼠脑组织RNA中扩增编码IA 2胞内结构域的cDNA,构建表达型重组质粒,经DNA序列分析确证后,在大肠杆菌中表达,用亲和层析纯化融合目的蛋白,并以斑点印迹技术(Dotbkot)鉴定其免疫原性。结果 所获特异PCR产物正确重组至PinpointXa 1表达载体中。经异丙基硫代半乳糖苷诱导的原核表达及亲和层析得到了纯度较高、相对分子质量约56000的融合目的蛋白,表达量约1mg蛋白/升菌液,且表达产物与谷氨酸脱羧酶抗体阳性的糖尿病患者血清及健康对照血清发生的显色反应差异有显著性(P<0.05)。结论 原核表达的IA 2融合蛋白具有免疫学活性,可用于糖尿病患者血清中相关抗体的检测。
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