HPV16 L1/E6-E7基因嵌和DNA疫苗质粒构建及其在CHO细胞表达的初步研究
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郑瑾；张福萍；司履生；董小平；王一理；
乳头状瘤病毒|人|疫苗|DNA|诱变|定点,HPV16L1,E6-E7基因嵌和DNA疫苗质粒构建及其在CHO细胞表达的初步研究,关键词：
参见附件(68kb)。
郑瑾；张福萍；司履生；董小平；王一理； 中国预防医学科学院病毒学研究所形态室 100052北京；西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所 710061 中华实验和临床病毒学杂志 2003 1
关键词：乳头状瘤病毒；人；疫苗；DNA；诱变；定点
目的 构建HPV 16L1 E6、HPV16L1 E7预防、治疗性DNA疫苗质粒。方法 运用PCR大引物定点诱变法逐个突变E6、E7基因与转化作用有关的位点 ,PCR产物连接至pGEMT Easy质粒 ,测序鉴定突变基因正确后 ,分别均与L1基因共同连接并至真核表达载体pVAX1,得到真核表达质粒1MpVAX1 L1E6,2MpVAX1 L1E6,1MpVAX1 L1E7,2MpVAX1 L1E7,3MpVAX1 L1E7。运用磷酸钙法将所获得的质粒转染CHO细胞 ,以HPV 16L1特异性单克隆抗体进行转染细胞中L1蛋白表达的ELISA和免疫组化的检测。结果 ELISA检测显示转染各种L1 E6、L1 E7融合蛋白表达质粒的细胞提取物的P N值均 >2 .1;免疫组化...
关键词：乳头状瘤病毒；人；疫苗；DNA；诱变；定点
目的 构建HPV 16L1 E6、HPV16L1 E7预防、治疗性DNA疫苗质粒。方法 运用PCR大引物定点诱变法逐个突变E6、E7基因与转化作用有关的位点 ,PCR产物连接至pGEMT Easy质粒 ,测序鉴定突变基因正确后 ,分别均与L1基因共同连接并至真核表达载体pVAX1,得到真核表达质粒1MpVAX1 L1E6,2MpVAX1 L1E6,1MpVAX1 L1E7,2MpVAX1 L1E7,3MpVAX1 L1E7。运用磷酸钙法将所获得的质粒转染CHO细胞 ,以HPV 16L1特异性单克隆抗体进行转染细胞中L1蛋白表达的ELISA和免疫组化的检测。结果 ELISA检测显示转染各种L1 E6、L1 E7融合蛋白表达质粒的细胞提取物的P N值均 >2 .1;免疫组化...
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