HCV E1基因序列的原核高效表达及表达产物的初步应用
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高建恩；陶其敏；马大龙；冯百芳；纪和平
肝炎病毒|丙型|基因表达|病毒包膜蛋白|质粒,HCVE1基因序列的原核高效表达及表达产物的初步应用,关键词：
参见附件(49kb)。
高建恩；陶其敏；马大龙；冯百芳；纪和平 北京医科大学人民医院肝病研究所；北京医科大学基础医学院免疫学系 中华实验和临床病毒学杂志 2001 1
关键词：肝炎病毒；丙型；基因表达；病毒包膜蛋白；质粒
目的 在原核表达系统中对HCVE1基因进行克隆和高效表达 ,并初步探讨表达产物在抗 HCV筛选中的作用。方法 通过RT PCR法从HCVRNA阳性的血清标本中扩增出HCVEI片段 ,并在扩增用的引物中引入克隆所需的酶切位点 ,克隆产物经XbaⅠ和EcoRⅠ酶切后 ,在T4DNA连接酶的作用下克降入经同样双酶切的原核表达载体PMS 31b中 ,并用此连接产物转化大肠埃希菌POP2 136 ,挑取具有氨苄抗性的菌落扩大培养后提取质粒进行酶切鉴定 ,鉴定出的阳性菌经42℃诱导后用SDS PAGE检查其表达状况 ,并用Westernblot鉴定表达产物的特异性 ,同时用初步纯化的表达产物用ELISA法检测病。
关键词：肝炎病毒；丙型；基因表达；病毒包膜蛋白；质粒
目的 在原核表达系统中对HCVE1基因进行克隆和高效表达 ,并初步探讨表达产物在抗 HCV筛选中的作用。方法 通过RT PCR法从HCVRNA阳性的血清标本中扩增出HCVEI片段 ,并在扩增用的引物中引入克隆所需的酶切位点 ,克隆产物经XbaⅠ和EcoRⅠ酶切后 ,在T4DNA连接酶的作用下克降入经同样双酶切的原核表达载体PMS 31b中 ,并用此连接产物转化大肠埃希菌POP2 136 ,挑取具有氨苄抗性的菌落扩大培养后提取质粒进行酶切鉴定 ,鉴定出的阳性菌经42℃诱导后用SDS PAGE检查其表达状况 ,并用Westernblot鉴定表达产物的特异性 ,同时用初步纯化的表达产物用ELISA法检测病。
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