人护骨素-谷胱甘肽转硫酶融合蛋白基因的构建与表达
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刘继中；纪宗玲；胡蕴玉；陈苏民；陶惠人
护骨素|克隆|分子|基因表达,关键词：
参见附件(33kb)。
刘继中；纪宗玲；胡蕴玉；陈苏民；陶惠人 第四军医大学生物化学和分子生物学教研室；第四军医大学附属西京医院骨科 710032西安 中华内分泌代谢杂志 2003 4
关键词：护骨素；克隆；分子；基因表达
目的 克隆人护骨素(OPG)成熟肽段编码区基因并研究在大肠杆菌中OPG 谷胱甘肽转硫酶(GST)的融合蛋白的表达。方法 采用RT PCR从人骨肉瘤细胞系MG63的总RNA中扩增OPG成熟肽段编码区cDNA ,构建原核表达载体pGEX 4T 1,转化大肠杆菌后经0 .1mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,以SDS PAGE电泳及Western印迹鉴定蛋白表达,应用谷胱甘肽 Sepharose4B柱亲和层析纯化目的蛋白。结果 获得人OPG成熟肽段编码区cDNA ,转化菌株可表达人OPG GST融合蛋白,蛋白表达量约为菌体总蛋白的15 .5 %。Western印迹表明在相对分子质量660 0 0处融合蛋白能与人OP ...
关键词：护骨素；克隆；分子；基因表达
目的 克隆人护骨素(OPG)成熟肽段编码区基因并研究在大肠杆菌中OPG 谷胱甘肽转硫酶(GST)的融合蛋白的表达。方法 采用RT PCR从人骨肉瘤细胞系MG63的总RNA中扩增OPG成熟肽段编码区cDNA ,构建原核表达载体pGEX 4T 1,转化大肠杆菌后经0 .1mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,以SDS PAGE电泳及Western印迹鉴定蛋白表达,应用谷胱甘肽 Sepharose4B柱亲和层析纯化目的蛋白。结果 获得人OPG成熟肽段编码区cDNA ,转化菌株可表达人OPG GST融合蛋白,蛋白表达量约为菌体总蛋白的15 .5 %。Western印迹表明在相对分子质量660 0 0处融合蛋白能与人OP ...
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