人肺表面活性物质相关蛋白A1基因在大肠杆菌中的表达及产物的分离纯化
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兰和魁；封志纯；黄建生；郑维扬；姬毅；任大明
肺表面活性剂|蛋白脂质类|基因表达|大肠杆菌,关键词：
参见附件(57kb)。
兰和魁；封志纯；黄建生；郑维扬；姬毅；任大明 复旦大学遗传研究所；第一军医大学附属南方医院血液科；第一军医大学附属珠江医院儿科 中华儿科杂志 2001 4
关键词：肺表面活性剂；蛋白脂质类；基因表达；大肠杆菌
目的 研究人肺表面活性物质相关蛋白A1(SP A1)在大肠杆菌中的表达、产物纯化及免疫原性。方法 将人SP A1基因克隆至表达载体pGEX 2T上,分别转化至大肠杆菌JM101、JM105、JM109、XL1 bkue和BL21(DE3)等不同宿主,并在不同温度中的表达,采用包涵体纯化方法及亲和层析法纯化目的蛋白,用ELISA及Westertbkot初步分析SP A1蛋白的免疫原性,融合蛋白质经凝血酶酶切分析。结果 SP A1基因在前4种宿主中表达有完整蛋白质和不完整蛋白质,目的蛋白质分别占总蛋白的6 7%、9 8%、9 3%、14 8%;于28℃时,该基因在BL21(DE3)宿主中表达产物均为完整蛋白质,占总蛋白质的10%。经包涵体纯化和GkutathioneSepharose4B亲和层析纯化,可获得纯度达95%以上的纯化蛋白。目的蛋白可被抗SP A多克隆抗体特异识别,凝血酶作用后可切出相对分子质量为26000的目的蛋白质片段。结论 人组织特异性蛋白质SP A1可在大肠杆菌中表达,表达产物具有良好的免疫原性。
关键词：肺表面活性剂；蛋白脂质类；基因表达；大肠杆菌
目的 研究人肺表面活性物质相关蛋白A1(SP A1)在大肠杆菌中的表达、产物纯化及免疫原性。方法 将人SP A1基因克隆至表达载体pGEX 2T上,分别转化至大肠杆菌JM101、JM105、JM109、XL1 bkue和BL21(DE3)等不同宿主,并在不同温度中的表达,采用包涵体纯化方法及亲和层析法纯化目的蛋白,用ELISA及Westertbkot初步分析SP A1蛋白的免疫原性,融合蛋白质经凝血酶酶切分析。结果 SP A1基因在前4种宿主中表达有完整蛋白质和不完整蛋白质,目的蛋白质分别占总蛋白的6 7%、9 8%、9 3%、14 8%;于28℃时,该基因在BL21(DE3)宿主中表达产物均为完整蛋白质,占总蛋白质的10%。经包涵体纯化和GkutathioneSepharose4B亲和层析纯化,可获得纯度达95%以上的纯化蛋白。目的蛋白可被抗SP A多克隆抗体特异识别,凝血酶作用后可切出相对分子质量为26000的目的蛋白质片段。结论 人组织特异性蛋白质SP A1可在大肠杆菌中表达,表达产物具有良好的免疫原性。
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