人心肌组织中M型胆碱能受体的含量和分布
关键词：
M-毒蕈碱受体(Muscarinic receptor)又称M型乙酰胆碱能受体,与β肾上腺能受体均为广泛分布于心肌组织的主要心肌受体。被激活的受体偶联相应的G蛋白,通过改变心肌细胞内腺苷酸环化酶活性来发挥其生理作用。在病理状态下,心肌M型受体的密度、亲和力及与其偶联的信号传递系统都可发生变化。与β肾上腺能受体相比,对于M型受体的研究较少。而M型受体的激活具重要生理功能,增加迷走神经张力,对抗交感神经的兴奋。在心肌梗死及各种心力衰竭中,可减少心肌的氧耗量,减弱儿茶酚胺大量分泌产生的心脏毒性,减少心律失常的发生和患者的死亡率。因而研究心肌M型受体密度、亲和力及其偶联的信号传递通路在各种心脏疾病中的变化,对于我们了解终末期心力衰竭患者迷走神经功能障碍的机制,并为进一步提供治疗方案提供帮助。
本课题以[3 H]-quinuclidinyl benzylate ([3 H]-QNB)为放射性配基,采用冰冻切片技术建立对人心肌M受体的微量测定法。旨在对人类心脏各部位M型受体的密度、活性进行定量检测,明确心肌M型受体在心肌的区域分布并为进一步研究病理状态下M型受体密度、亲和力及其偶联的信号传递通路的变化提供依据。步骤为：获取意外事故死亡4 h内的人心脏标本,清除血液,剥离心包及脂肪组织。按照心脏解剖部位仔细分离出心脏窦房结、房室交界区及心房、心室肌组织。将心肌组织修整为5 mm×5 mm规则平面,OCT包埋。于-60℃恒冷切片机柜内行连续切片,厚约16 μm。融裱于预冷的载玻片上。将反应液[3 H]-QNB 0.125～8 nmol/L Tris-HCl pH7.4滴加于组织片上,26℃孵育30 min,弃孵育液,0℃环境下洗脱20 min。非特异性结合于[3 H]-QNB中加10-4 mol/L阿托品。结果显示人心肌各部位M受体Bmax 及K0 值分别为:窦房结为229.80±17.88 fmol/mg及0.54±0.22 nmol/L;房室结为113.0±8.2 fmol/mg及0.62±0.21 nmol/L;心房肌为79.94±2.74 fmol/mg及0.42±0.11 nmol/L;心室肌为51.4±6.0 fmol/mg及0.68±0.09 nmol/L(n=5)。统计表明各部位Bmax 值具显著性差异而K0 值无差异。结合既往研究发现M受体在心脏的密度分布与心脏各部位对迷走刺激的反应性呈平行关系。作者认为,心脏对迷走神经刺激的反应性与M受体的区域分布相关。 , http://www.100md.com