关键词：青蒿琥酯/分析；分光光度法，紫外线；水解作用
摘要： 目的：建立青蒿琥酯的紫外分析方法。方法：探讨了青蒿琥酯水解温度、碱浓度以及水解时间对青蒿琥酯水解产物的影响，同时进行紫外测定法的方法学考察。结果：青蒿琥酯的最佳水解条件为：83℃，0.1 mol/L 氢氧化钠，水解 1 h 可得到完全稳定的水解产物，并确定 238 nm 为紫外最大吸收波长。线性范围 13～195 mg/L，最低检测限为 5 mg/L。结论：青蒿琥酯在碱性条件下水解后进行紫外测定，是一稳定可行的分析方法。
中图分类号： R284.1 文献标识码： A
文章编号： 1003-9783(2000)02-0113-03
Studies of Ultraviolet Assay for Artesunate
Hou Haixia Zhou Liling Li Rui
(Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510405)
Abstract ：Objectives:To establish ultraviolet(UV)assay for artesunate.Methods:the effects of temperature,time and alkaline concentration of artesunate hydrolysis on its hydrolytic product were studied and the methodology of UV assay was explored.Results:The best hydrolytic conditions are 83℃,0.1mol/L sodium hydroxide and 1 hour.The maximum UV absorption wavelength is 238nm,linear range is 13_195 mg/L,and minimum detecting limit 5 mg/L.Conclusion:UV assay for artesunate under alkaline conditions after hydrolysis is a simple and reproducible method.
Key words： artesunate/analysis;spectrophotometry,ultraviolet;hydrolysis
青蒿琥酯的分析测定方法，已报道的有：RP-HPLC法[1] 、HPLC-碱水解-UV法[2] 、TLCS法[3] 、荧光法[4] 、放免法[5] 以及HPLC-ECD法[6] 等。对于HPLC-UV法，由于青蒿琥酯本身紫外吸收波长在近紫外区(210nm左右)，所以青蒿琥酯的测定比较困难。HPLC-ECD及放免法是比较灵敏的测定方法，常用来进行青蒿琥酯的体内分析，但HPLC-ECD还原法对设备及无氧的条件要求极高，而放免法青蒿琥酯标记物及抗血清不易得到，所以进行常规体外分析很少采用。在碱性条件下水解，并于290nm处测紫外吸收值是《中国药典》九五版收载的方法，本研究曾按照该法即50℃，0.1mol/LNaOH水解1h，但发现在290nm处的峰极小，而且水解产物相当不稳定(必须在20min内测定)，这说明该法有待进一步完善。我们在此基础上对影响青蒿琥酯的水解因素进行考察，建立了新的紫外测定方法。
1 材料与仪器
6010紫外/可见分光光度计(惠普上海分析仪器部)，恒温水浴锅(北京医疗用品厂)，青蒿琥酯对照品(桂林制药厂提供)，氢氧化钠(分析纯)，甲醇(分析纯)。
2 实验方法与结果
2.1 青蒿琥酯贮备液的配制
精密称取已恒重的青蒿琥酯对照品13mg于10mL瓶中，配制成浓度为1.3×103 mg/L的贮备液，冰箱保存备用。
2.2 氢氧化钠溶液的配制
按照《中国药典》(1995版一部附录XVB试液)氢氧化钠试液配制项下，将氢氧化钠配制成1mol/L的试液，氢氧化钠液分别稀释成浓度为0.05mol/L、0.1mol/L、0.2mol/L及0.5mol/L的试液。
2.3 水解温度的考察
精密吸取贮备液0.1mL于带塞试管中，水浴蒸干至无甲醇味，精密加入0.1mol/L氢氧化钠5mL,分别于53℃、63℃、73℃、83℃、93℃水解0.5h后取出，冷却，紫外/可见分光光度计作图谱扫描。并以温度为横坐标，吸收度(ABS值)为纵坐标，作吸收度-温度曲线，确定最佳水解温度(见图1)。
图1 吸收度-温度曲线
2.4 碱浓度对水解的影响
精密吸取贮备液0.1mL于带塞试管中，水浴蒸干至无甲醇味。精密加入0.05mol/L，0.1mol/L,0.2mol/L,0.5mol/L的氢氧化钠液各5mL，在83℃水解0.5h后，取出冷却，作紫外图谱扫描，确定最佳碱浓度(见图2)。
图2 不同碱浓度水解后的青蒿琥酯扫描图谱
2.5 水解时间的考察
精密吸取贮备液0.1mL于带塞刻度试管中，水浴蒸干至无甲醇味，精密加入0.1mol/L的氢氧化钠液5mL，83℃水解。分别于15min、30min、45min、60min、75min、90min、105min、120min取出水解样品，冷却，作紫外图谱扫描，以水解时间为横坐标，最大吸收度为纵坐标，作吸收度-时间曲线以确定最佳水解时间(见图3)。
图3 青蒿琥酯吸收度-时间曲线
2.6 最大吸收波长的确定
精密吸取贮备液0.1mL于带塞刻度试管中，水浴蒸干至无甲醇味，精密加入0.1g/L氢氧化钠液5mL，83℃水解1h，冷却，作紫外图谱扫描。同时精密吸取0.1mL贮备液，甲醇稀释至5mL，作其紫外图谱扫描，比较两份图谱，确定最大吸收波长(见图4)。
图4 青蒿琥酯水解后的紫外扫描图谱
由实验结果确定青蒿琥酯的最佳水解条件为：0.1mol/L的氢氧化钠溶液，83℃水解1h，最大吸收波长为238nm。
2.7 标准曲线的绘制
精密吸取贮备液一定量，配成浓度为13g/L，26g/L，65g/L，130g/L，195g/L的系列标准液。精密吸取1mL，40℃～50℃氮气吹干至无甲醇味。加入0.1mol/L氢氧化钠5mL，83℃水解1h，冷却，于238nm处测紫外吸收，以吸收度值为纵坐标，青蒿琥酯浓度为横坐标，进行线性回归，并绘制标准曲线。曲线方程为Y=0.0046X-0.0421,r=0.9992。标准曲线见图5。
图5 青蒿琥酯标准曲线
2.8 精密度考察
精密吸取100g/L的贮备液1mL于带塞刻度试管中，40℃～50℃水浴并以氮气吹干至无甲醇味，精密加入0.1mol/L的氢氧化钠5mL，83℃水解1h，紫外238nm测其紫外吸收，连续测8次，结果：RSD=0.033%。说明仪器精密度良好。
2.9 加样回收率测定
精密称取一定量青蒿琥酯对照品，加入青蒿琥酯甲醇液中，溶解，于40℃～50℃水浴中氮气吹干至无甲醇味，水解，测定，同时取已配好的相同浓度的青蒿琥酯甲醇液吹干，水解，测定，按下式计算回收率：
上式：AO 为未加样样品紫外吸收度值
Ae为加样样品紫外吸收度值
所测得的加样回收率为98±8.3%(N=3)。
3 讨论
3.1 青蒿琥酯水解过程中的碱液，作者曾考察对氢氧化钠水溶液及氢氧化钠甲醇液，在同温度下，同样时间内，相同浓度的甲醇液水解效果优于水溶液，但水解峰形较差，且水解产物不稳定，故选择氢氧化钠水溶液。对氢氧化钠浓度的考察显示随着浓度的增加，水解产物量增加，但浓度越大，峰形紊乱，产物不稳定。通过对峰形、水解强度、产物的稳定性等的综合比较，确定0.1mol/L的氢氧化钠为最佳浓度。对于水解温度，水解0.5h的曲线显示，83℃为最佳温度。
3.2 对83℃，0.1mol/LNaOH，水解1h的产物稳定性考察显示：水解产物在12h内稳定。
3.3 测定波长 文献报导多选择290nm。作者经过对水解条件的考察，发现水解产物的最大吸收波长为238nm。
基金项目：广东省自然科学基金课题(970224)
参考文献：
[1]崔志平，陆培康，孙月琴，等.反相高效液相法测定青蒿琥酯脂质体含量.现代应用药学，1990，7(1)：31.
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收稿日期：1999-05-25 , 百拇医药