关键词：转化生长因子-α；类胰岛素样生长因子-Ⅱ；血液透析；放射免疫分析；透析膜
摘 要： 目的 研究多肽生长因子TGF-α与IGF-Ⅱ在长期血透(HD)患者血清及体液中的表达特征。方法 采用放射免疫分析法，检测45例维持性HD患者血清及12h尿液中TGF-α与IGF-Ⅱ的水平。结果 TGF-α水平明显低于正常组，IGF-Ⅱ则明显高于正常组。HD后血清中两项指标水平均明显高于HD前，测定12h尿液TGF-α和IGF-Ⅱ含量均较正常组明显增高(P<0.05；P<0.01)。结论 尿毒症状态或血透过程透析膜等因素可激活单核细胞，使产生TGF-α和IGF-Ⅱ增多
分类号： R448.6 文献标识码： A
文章编号： 1000-8861(2000)02-01-36-02
Changes of TGF-α and IGF-Ⅱ levels in patients pre-and post-heme-dialysis and its application
LUO Nan-ping ,YANG Dao-li
(Department of Immunology ， Jinan General Hospital of PLA,Jinan 250031 ， China)
MENG Jian-zhong
(Center of Boold Dialysis,Jinan General Hospital of PLA,Jinan ,250031 ， China)
XU Jun ,WU Cui-hua
(Department of Immunology ， Jinan General Hospital of PLA,Jinan 250031 ， China)
Abstract ： Objective To study the expression claracteristic of TGF-α and IGF-Ⅱin perennial homedialysis patient.Methods TGF-αand IGF-Ⅱlevels in sera and 12 h urine of 45 maintenance homedialysis patients were detected by radio-immunity analysis.Results Compared with normal control . Serum TGF-α decreased significantly(P<0 . 01) . And IGF-Ⅱ in-creased significantly. Both of TGF-α and IGF-Ⅱ levels in sera and 12 h increased significantly after homedialysis(P < 0 . 05 ； P<0 . 01) . Conclusion The starus of urinaemia and dialyser can stimulate mononuclear cell to sythesis more TGF-α and IGF-Ⅱ .
Keywords ： transforming growth factor-α ， insulin-like growth factor ， homedialysis ， radio-immunity analysis . Dialyser
近年来研究发现[1]，血液透析过程外周血单个核细胞可产生细胞因子增多。转化生长因子-α(Transforminggrowthfactor-α，TGF-α)呈一种由人类肿瘤细胞及正常细胞产生的小肽分子,亦是表皮生长因子(EGF)家族中的一个成员，它与EGF受体结合后发挥其生物效应。类胰岛素样生长因子(Insulin-likegrowthfactor，IGP-Ⅱ)是由67个氨基酸组成的多肽生长因子,主要存在于血液中，哺乳动物几乎所有细胞和组织都能分泌IGF蛋白，表达IGF受体[2]。为研究这两种多肽生长因子在慢性肾功能衰竭(CRF)患者血液透析(HD)过程中的变化，我们采用放射免疫分析法，对45例维持性HD患者进行了血清及12h时尿液中TGF-α和IGF-Ⅱ水平检测，旨在探讨它们在CRF中的表达特征，进一步阐明多肽生长因子在HD过程中的重要病理生理作用。
1材料与方法
1.1临床资料维持性HD患者45例，男26例，女19例，平均年龄42.5±1.05岁。均来自本院血液净化中心。原发病分别为慢性肾炎26例，肾小动脉硬化7例，糖尿病肾病6例，肾盂肾炎4例,多囊肾2例。全部患者内生肌酐清除率Ccr<10ml/min。本组患者均采用碳酸盐透析液，每次透析5h，每周2～3次。对照组30例,男18例，女12例，平均年龄38.2±6.5岁。均来自本院健康查体者。
1.2方法分别于HD前和HD后即刻采血3ml，(对照组采取空腹静脉血)，分离血清后置-20℃保存待测。尿液标本留取：嘱患者留取12h尿液,记录总尿量后取1ml于试管内置20℃。实验前将血清和尿液放置室温复溶后，于4℃下离心10min,取上清进行TGF-α与IGF-Ⅱ定量分析。采用放射免疫非平衡法，两步温育，4℃下分离抗原抗体复合物。TGF-α与IGF-Ⅱ试剂盒均由解放军总医院东亚免疫技术研究所提供。采用北京核仪器厂生产的FT-630G微机多探头γ计数仪进行测定。
1.3统计学处理实验数据以x±s表示,组间差异的显著性采用t检验，以P<0.05为差异显著。
2结果
2.1血清TGF-α与IGF-Ⅱ水平与对照组比较，45例HD患者血清TGF-α水平明显降低(P<0.01)，IGF-Ⅱ水下则明显高于对照组(P<0.01)。与HD前比较，TGF-α水下在HD后明显增高(P<0.01).IGF-Ⅰ水平亦明显升高，但无统计学意义(P>0.05)，见表1。
表1HD前后血清TGF-α、IGF-Ⅰ的水牛变化(x-±s)
Tab1.SerumlevelsofTGF-αandIGF-Ⅰpre-andpostHD
*P<0.01,Comparedwithcontrol;**P<0.01,**>0.05.ComparedwithPreHD
2.212h尿液中FGF-α与IGF-Ⅱ水平本组HD患者中有尿者为25例，占56%，12h尿量为50～1200ml。尿液TGF-α水平较对照组明显增高(P<0.05)。IGF-Ⅱ显著高于对照组,并具显著性差异。见表2。
表2HD患者12h尿液TGF-α与IGF-Ⅱ水平(x±s)
Tab212hurineTGF-αandIGF-ⅡLevelsinHDpatients
*P<0.05;**P<0.01Comparedwithcontrol
3讨论
正常人受到感染等外界刺激后将导致机体单核细胞、T细胞激活产生一系列细胞因子，参与机体自稳功能的调节[3]。这种积极反应对机体是有益的，而终末期肾衰患者细胞免疫反应受损，由于HD过程长期、反复刺激使机体单核细胞激活并产生细胞因子增多。本组实验观察到45例HD患者血清TGF-α水平在HD后明显高于HD前，IGF-Ⅱ水下在HD后也有明显增高。其原因是在HD时血液与透析膜接触直接刺激单核细胞或通过激活补体、透析液溶出的葡聚糖、体外循环路的溶出物或透析液中物质进入血液导致单核细胞激活。另外,血透本身改善尿毒症的内环境，使单核细胞易于接受刺激而激活，是造成TGF-α。与IGF-Ⅱ在HD患者体内一过性增高的重要原因。
TGF-α的生物学效应是通过和相应的受体结合后，激活酪氨酸激酶，产生广泛的生物学活性，本组结果显示：HD患者TGF-α在血清中的表达水平明显低于对照组，这是由于在TGF-α合成过程中，TGF-α前体由细胞膜表面的糖蛋白水解、裂解而成。有实验表明，贮存于组织细胞膜内的前体物当受到某种酶催化作用时，分泌出具有生物活性的TGF-α[4]。HD患者血清TGF-α。水平的减少，标志着HD患者残留肾组织细胞分泌TGF-α的能力下降，在CRF病理过程中，机体内环境发生改变，所致蛋白水解酶活性降低，使TGF-α前体不能积聚在细胞浆内，导致合成障碍，分泌TGF-α减少。
IGF-Ⅱ是通过细胞表面的受体发挥生物作用的，IGF-Ⅱ受体没有酪氨酸激酶活性，但通过G蛋白通道参与钙离子流入过程[5]。本组HD患者血清IGF-Ⅱ水平明显高于对照组，并具显著性差异(P<0.01)。HD患者体内细胞因子代谢紊乱能促进IGF-Ⅱ及其受体复合物激活G蛋白，通过G蛋白与Ca通道偶联，引起Ca内流，使血清Ca浓度减少。同时，HD患者血清IGF-Ⅱ水平增高是由于肾衰患者肾功能减退后排泄减少和系膜细胞产生增加所致。而IGF-Ⅱ增高能刺激系膜细胞增生，可能是导致细胞增生和系膜基质及胶原沉积的因素。
表2所示，终末期肾衰患者有尿者12h尿液中的TGF-α与IGF-Ⅱ水平均明显高于对照组，与HD后血清浓度升高呈正比，表明在尿液中FGF-α。与IGF-Ⅱ均来自HD后血清中的浓度，两者在HD患者体内短暂增高有利于自身组织的更新和组织细胞的转化，引起细胞钙的释放，增加肾血浆流量，降低肾血管阻力，故HD过程TGF-α。与IGF-Ⅱ增高对机体具有保护作用，其机制还有待于进—步深入研究。
参考文献：
[1]鹊岛邦浩，秋泽思雨.血液透析与细胞因子[J].国外医学免疫学分册，1994，6：322～325.
[2]刘宝英.胰岛素样生长因子研究进展[J].国外医学分子生物学分册.1996，18：103～106.
[3]余志远.尿毒症非透析患者外周血单个核细胞IL-1β、TNF-α与IL-6基因表达[J]，中华肾脏病杂志.1997，10：276～278.
[4]周廷冲.多肽生长因子[M].北京：科学技术出版社，1992，88～89.
[5]沈钰如.胰岛素样生长因子的生理病理意义[J].国外医学内分泌学分册,1993.13：84～88.
收稿日期：1999-06-07
修稿日期：1999-10-14
(孟建中 罗南萍 杨道理 徐 军 武翠华)