甲型血友病是凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因缺陷导致的一种遗传性出血性疾病。近年来已发现大量甲型血友病的基因缺陷。我们应用聚合酶链反应(PCR)技术，分析了云南省傣、彝、汉族人ST14(DXS52)可变数目串联重复序列(VNTR)的多态性特点，现报道如下。

1 研究对象 傣族人标本来源于云南省三代纯傣族43个不相关个体，男15名，女28名；彝族人标本来源于云南省三代纯彝族40个不相关个体，男16名，女24名；汉族人标本来源于云南省籍纯汉族49个不相关个体，男23名，女26名。
2 基因扩增 引物由中国科学院上海生物化学研究所合成，其序列为：
ST-1：5′-GGCATGTCATCACTTCTCTCATGTT-3′；
ST-2：5′-CACCACTGCCCTCACGTCACTT-3′
扩增于50μl总体积中进行，其中含基因组DNA 1μg、dNTP 200μmol/L、引物各20pmol。94℃变性10分钟后加TaqDNA聚合酶(Sangon)2U。PCR条件为：94℃30秒，60℃30秒，72℃3分钟，每一循环加2秒，共30个循环，最后一次延伸7分钟。1.2%琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色，紫外灯下观察结果。
3 统计学处理 实验数据进行χ² 检验。

云南省3个民族210条X染色体ST14(DXS 52)VNTR/PCR研究结果见附图和附表。云南省傣族人ST14VNTR显示6个等位基因，其构成比与彝族人群及云南省汉族人相比，有显著性差异，总的理论杂合率为38.82%，也明显低于彝、汉族人(P<0.001)。云南省彝族人ST14VNTR显示5个等位基因，总的理论杂合率为65.46%。其构成比和理论杂合率与汉族人比较，有显著性差异，P值分别<0.001和<0.05。云南省籍汉族人ST14VNTR显示7个等位基因片段，理论杂合率为70.04%。

1和9为DNA标记：λ DNA的EcoRⅠ/HindⅢ酶解产物；2：700+700bp;3:1300+1220bp;4:1300+700bp;5:1690+1390bp;6:1690+1630bp；7:1630+1570bp;8:1300+700bp

附图 ST14 VNTR/PCR琼脂糖凝胶电泳分析(1.2%)

人类FⅧ基因多态性在不同民族、不同地区可存在差异^[1] 。ST14(DXS52) VNTR位点距FⅧ基因2Mbp，至少有14个等位基因，它的基本构成为60bp的DNA片段重复1～17次^[2] 。据国外报道用PCR方法对该多态性进行快速分析，大约90%的家系能作出遗传分析。但在中国汉族人群中高分子量的等位基因片段频率下降，理论杂合率也较低^[3] 。本研究显示在云南省傣、彝、汉族人中，ST14VNTR也以小分子量片段的等位基因为主。但彝族人和云南籍汉族人小分子量的等位基因较分散，因此，总理论杂合率较高，分别为65.46%和70.04%。另外云南籍汉族人ST14VNTR总的理论杂合率高于已报道的苏州汉族人^[3] ，这是否提示该位点的多态性特点即使在同一民族中也存在着一定的地区差异，值得进一步研究。

本课题受云南省科委应用基础研究基金资助

1 石奇珍，吕联煌，张学敏，等.PCR技术在甲型血友病基因诊断中的应用.血液病实验与临床，1995，6：131-134.
2 Grahain JB,Green PP,McGraw RA,et al.Application of molecular genetics to prenataldiagnosis an carrier detection in the hemophilias:some limitations.Blood,1985,66:759-764.
3 Wang X,Chu X,Ruan C.ST14(DXS 52)VNTR in the Chinese population and its application togenetic diagnosis of hemophilia A.Nouv Rev Fr Hematol,1995,37:183-185.

(收稿：1996-12-18 修回：1997-05-16)