关键词：单纯疱疹病毒Ⅰ型；角膜；炎症；T-淋巴细胞亚群；可溶性白细胞介素2受体
【摘要】 目的 研究复发性单纯疱疹性角膜炎患者外周血T-淋巴细胞亚群变化与血清可溶性白细胞介素-2受体(SIL-2R)水平的关系。方法 测定了30例复发性单纯疱疹性角膜炎患者外周血T-淋巴细胞亚群，同时用酶联免疫吸附试验检测SIL-2R水平。结果 复发性单纯疱疹性角膜炎患者CD3、CD4/CD8均值与正常对照组相比明显降低；SIL-2R与对照组比较显著增高。结论 复发性单纯疱疹性角膜炎患者体内免疫功能低下，SIL-2R水平升高可能是其原因之一，这也为免疫治疗提供了一定依据。
Relationship between T-lymphocyte subpopulation and soluble interleukin-2 receptor (SIL-2R) in recurrent herpetic keratitis
Zhang Hua, Song Hongwen,Chi Fuchang,et al.Department of Ophthalmology,the First Teaching Hospital of Jining Medical College,Shandong Province,Jining 272111
Abstract This article is to study the relationship between T-lymphocyte subpopulation and soluble interleukin-2 recepeor (SIL-2R)in recurrent herpetic keratitis.We detected the T-lymphocyte subpopulation of peripheral blood and soluble interleukin-2 receptor(SIL-2R)in 30 cases of recurrent herpetic keratitis, 25 cases of healthy people were set as contrast. The results showed that there were obvious decrease and of CD3、CD4/CD8, and magnificant elevation of soluble interleukin-2 receptor(SIL-2R)in sera of recurrent herpetic kevatitis cases when compared with the contrasts.we hold that the lower immune function in recurrent herpetic keratitis cases may attribute to the high level of soluble interleukin-2receptor(SIL-2R)in the serum.The discovery can provide foundation for immunotherapy.
Key words: Herpes simplex virus,type I Corneal T-lymphocyte subpopulation Soluble interleukin-2 receptor(SIL-2R)
单纯疱疹性角膜炎发病率日益增多，且治疗困难，已成为世界性的眼科棘手问题〔1〕 。近年来，临床观察和研究表明，复发性单纯疱疹性角膜炎患者存在着免疫功能低下〔2，3〕 。为进一步了解复发性单纯疱疹性角膜炎患者的免疫状态，为其提供新的治疗方法，我们在对复发性单纯疱疹性角膜炎患者进行深入研究的基础上〔4～9〕 ，继续探讨该病患者外周血T-淋巴细胞亚群变化与SIL-2R水平关系。
1 材料和方法
1.1 研究对象 30例单纯疱疹性角膜炎患者(树枝状角膜炎或地图状角膜炎)全部具有复发史，就诊后均经裂隙灯显微镜角膜荧光素染色检查确诊30例30只眼，其中男17例，女13例；右眼16例，左眼14例；年龄≤20岁者3例 ，21～40岁者12例，41～60岁者13例，≥61岁者2例；最小者11岁，最大者67岁，平均35.40±15.47岁。25例健康人外周血由我济宁市第一人民医院血站提供，25例25只眼，其中男15例，女10例；右眼13例，左眼12例；年龄≤20岁者2例，21～40岁者11例，41～60岁者10例，≥60岁者2例；最小者12岁，最大者65，平均34.60±13.57岁。
1.2 T-淋巴细胞亚群的检测
1.2.1 试剂 植物血凝素(PHA)由广州医学工业研究所生产；RPMI-1 640培养液购于GIBCO公司；鼠抗人T细胞OKT单克隆抗体由洛阳华夏生物工程公司提供；羊抗鼠荧光标记抗体自制。
1.2.2 植物血凝素淋巴细胞条件培养液(PHA-LCM)的制备 采静脉血，分离出单个核细胞，调整细胞浓度为1×106 /ml，培养体系为含10% FCS，1%PHA的RPMI-1 640完全培养液，置37℃5%CO2 培养72h，收集上清液，用0.22μm的滤器抽滤。置于-20℃冰箱内储存备用。
1.2.3 检测方法 采患者外周静脉血分离出单个核细胞，用Hank's液洗2次，用RPMI-1 640调整细胞浓度为1 ×106 /ml。取3支试管，分别加细胞悬液每管1 ×106 ，分别加OKT3、OKT4、及OKT8单克隆抗体每管100μl、4℃作用40分钟后洗2次，分别滴片，置荧光显微镜下，计阳性细胞和单个核细胞数。每个样本至少计200个细胞，算出百分率。
1.3 血清SIL-2R的检测 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法，加抗白细胞介素-2受体(IL-2R)单抗于聚乙烯板(5μg/ml)，4℃48h后加封闭液200μl/孔，37℃1.5h后洗涤，每孔加样品稀释液100μl及待测血清50μl混匀。同时设空白对照及标准品系列孔，37℃2h后洗3遍，各孔加多克隆抗IL-2R多抗100μl，37℃2h后洗3遍，各孔加驴抗兔抗体100μl，37℃2h后洗3遍，加底物液100μl，10min后加50ml终止液，用酶标仪于490nm波长处测吸光度A值(曾称光密度OD值)，绘制标准曲线，查出SIL-2R含量。
2 结果
2.1 T-淋巴细胞亚群的测定结果 见表1。 结果表明，复发性单纯疱疹性角膜炎患者CD3、CD4/CD8均值与正常对照组相比明显降低；而CD4、CD8均值与正常对照组相比差异无显著性意义(P>0.1)。正常对照组SIL-2R水平为90.86±17.90μg/ml，实验组171.46±19.30μg/ml，两组比较t=1.94,p<0.01。
表1 外周血T淋巴细胞亚群的测定结果(%)
Tab.1 Detection of T-lymphocyte subpopulation in peripheral blood (%)
| 组别 Group | 例数 Cases | OKT3 | OKT4 | OKT8 | T4/T8 |
| 实验组 | 30 | 58.30±7.20* | 42.40±8.50 | 39.00±10.10 | 1.15±0.35** |
| Experimental | |||||
| 对照组 | 25 | 65.70±4.60* | 44.60±3.50 | 26.10± 3.50 | 1.73±0.23** |
| Control |
Compared with the control: * t=2.62， P< 0.05； ** t=1.84， P< 0.01
3 讨论
单纯疱疹性角膜炎为一种潜伏性病毒感染性疾病，机体细胞免疫功能缺陷或降低已成为该病公认的发病机理。自70年代以来许多学者发现复发性单纯疱疹性角膜炎患者，其周围血中淋巴细胞细胞转化率及活性玫瑰花结形成细胞数量明显下降，随着病情好转，细胞免疫指数也回升〔4,5,8〕 。近年来，研究较多的是关于T细胞亚群改变与单纯疱疹性角膜炎的关联〔6,7〕 。本研究结果表明，复发性单纯疱疹性角膜炎辅助性T细胞的比例明显低于抑制性T细胞，说明复发性单纯疱疹性角膜炎细胞免疫力功能是低下的，而这种低下是由于免疫调节细胞TH的数量减少。
IL-2是由CD3(辅助T-淋巴细胞，TH)产生的一种多肽类淋巴因子，是体内重要的免疫调节因子，具有维持T细胞生长、增殖、分化，增强NK细胞活性，促进B细胞分化和增殖，诱导干扰素分泌等重要功能。IL-2功能的发挥有赖于细胞膜上的白细胞介素-2受体(mIL-2R)的表达数量和质量的正常。mIL-2R由2个亚单位组成，分别称为α、β单位。α链不仅存在于细胞膜上，而且从游离状态存在于血浆和体液中，称可溶性白细胞介素-2受体SIL-2R，IL-2和mIL-2R结合后方可发挥其生理效应，启动IL-2R阳性细胞(细胞膜粘附有mIL-2R的细胞)的增殖，促进其活化，发挥免疫效应。淋巴细胞是否表达足够的IL-2R，是细胞能否进入增殖状态的决定因素，而血液中游离的SIL-2R来自细胞膜mIL-2R中低亲和力P55蛋白，可与mIL-2R竞争结合IL-2；当SIL-2R处于高水平时，可起到IL-2单抗的作用，其结果抑制或减弱了IL-2对淋巴细胞(主要是T细胞)增殖的刺激作用，同时SIL-2R亦能中和活化T细胞周围的IL-2，减少细胞的自泌作用。
复发性单纯疱疹性角膜炎患者外周血CD3，CD4/CD8的减少与SIL-2R水平增高有一定的关系。单纯疱疹性角膜炎反复发作，使淋巴细胞活化，细胞表达mIL-2R程度增强，而SIL-2R是mIL-2R主要廓清方式，因而产生增多；反过来与mIL-2R竞争结合IL-2，导致IL-2活性受抑制，另外，单纯疱疹性角膜炎可诱导巨噬细胞产生IL-2抑制因子，进一步使IL-2活性受抑制，从而使CD3，CD4/CD8细胞减少。
复发性单纯疱疹性角膜炎患者体内免疫功能紊乱由多因素造成，SIL-2R水平升高可能为其中之一，这也为免疫冶疗提供了一定依据。
(感谢中国中医研究院广安门医院杨钧教授对该研究提出许多宝贵意见。)
1997年4月13日收稿 8月30日修回
参 考 文 献
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8 Zhang H,Chi FC, Wang ZA, et al.Measurement of serum trace element and immune function before and after treatment with traditional Chinese medicine in simple herpetic keratitis and its significance. Second International Ophthalmologic Conference.Beijing,China.July4-8,1995.
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