通用型腺病毒伴随病毒载体的构建
腺病毒伴随病毒|载体,关键词:
关键词:腺病毒伴随病毒;载体
【摘要】 目的 构建含腺病毒伴随病毒(AAV)基因组两端的反向重复序列(ITRs)和表达必须元件如启动子、多克隆位点和PolyA信号的通用型载体质粒pACR-Neo,并获得重组AAV(rVV/ACR-Neo)。方法 通过DNA重组技术,将SV40 PolyA、Neo基因、CMV-IE启动子和多克隆位点组成表达盒子,取代含AAV全基因组质粒pSSV9中AAV结构基因部分,构建成质粒pACR-Neo。用pACR-Neo转染5型腺病毒(Ad5)感染的重组AAV包装细胞系AE1201,能获得重组病毒rAAV/ACR-Neo。提取rAAV/ACR-Neo感染细胞的染色体,用Southem杂交分析重组病毒基因组在感染细胞中的存在情况。结果 质粒pACR-Neo转染包装细胞系后所得rAAV/ACR-Neo滴度为4.2×105 CFU/ml,并且rAAV/ACR-Neo能在转导细胞内实现其基因组与细胞染色体的整合。结论 成功地构建了通用型AAV载体,为今后的AAV载体研究、基因治疗和临床应用打下了基础。
The construction of a general adeno-associated virus vector Yao Ermei,Feng Zehua,Zheng Yi,et al.National Lab of Molecular Virology and Genetic Engineering,Beijing 100052
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