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目前多采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增方法检测肝炎病人血清中的庚型肝炎病毒(HGV)，此技术需要病毒在血液中存在时才会出现阳性结果，同时临床也需要通过特异性免疫测定方法来跟踪感染及恢复过程。由于GBV-C在培养中不能成功地获得，没有天然抗原可供血清学检测之用，近年来国外一种GBV-CE2蛋白被克隆并在CHO细胞中成功地表达，这种分泌型E2蛋白被纯化后在固相ELISA中应用，可用于确定人群血清GBV-CE2抗体水平、探讨这种抗体的产生在庚型肝炎临床流行病学中的意义。我们对18例庚型肝炎病毒感染患者血清进行了检测。
1 材料和方法
1.1 研究对象 选择1998年3月～1999年3月在解放军302医院住院的庚型肝炎病毒感染患者(均两次以上HGVRNA阳性)，其中男性15例，女性3例，平均年龄(37±4.8)岁，入院后每1～2周留取1次血清，共留取血清43份，统一检测HGVE2抗体。
1.2 检测方法 检测试剂购自302医院科卫试剂厂。检测程序：用50 mmol/L pH9.6碳酸盐缓冲液稀释抗原至工作浓度，包被丹麦产NUNC反应板，50μl/孔，置37℃ 2 h，甩干，每孔加封闭液100 μl，37℃ 1 h，甩干，加血清稀释液100μl，血清标本5 μl，设空白对照1孔，阴、阳性对照各2孔，37℃ 30 min，洗板，加TMB底物A、B液各1滴，37℃显色10min，加终止液1滴终止反应，经酶联仪测吸光度(450 nm)A值，以标本A值大于等于临界值为阳性，反之为阴性。临界值＝0.1×P+N。
2 结果
18例患者中有9例(27份血清)HGVE2抗体阳性，其阳性率为50%，抗体出现后其滴度呈明显逐渐增高趋势。见表1。4例急性庚型肝炎情况见表2。
表1 18例庚肝患者病型及感染情况
| 病型 | 例数 (%) | 抗-HGV E2 阳性数 |
| 急性肝炎 | 4(22.22) | 3 |
| G | 3 | |
| G+A | 1 | |
| 慢性肝炎 | 5(27.78) | 1 |
| G+B | 3 | |
| G+A+B | 1 | |
| G+B+E | 1 | |
| 慢重肝，肝硬化 | 9(50.0) | 5 |
| G+B | 8 | |
| G+酒精肝 | 1 | |
| 合计 | 18 | 9 |
我们通过对18例庚型肝炎患者的研究发现：①单纯HGV感染可致肝功损害，表现单项ALT增高，但恢复快，预后好，E2抗体出现时间为发病后的2～6周左右，E2抗体出现同时或1周左右，HGVRNA阴转，本研究尚未见单纯HGV感染所致慢性肝炎病例。②急性HGV合并甲型肝炎病毒感染可使肝功损害明显加重，且可能影响E2抗体的表达以及疾病的恢复，由此也看出E2抗体可成为疾病康复的指标之一〔1，2〕 。③从表1中可以看出HGV感染患者中，慢重肝及肝硬化患者明显多于急慢性肝炎，提示随病情加重及病程延长，HGV重叠感染率可能有所升高。另外，从研究中也发现，在慢重肝及慢性肝炎乙/庚重叠感染患者中，随着E2抗体的出现往往伴随HGVRNA阴转，但未见伴随肝功能的改善，考虑乙型肝炎病毒仍为影响疾病的主要因素。总之，从本文研究发现E2抗体与HGVRNA两项指标呈明显的负相关，此与国外文献报道一致〔3〕 。此项检测项目有较高的特异性和敏感性，且不受血清保存时间的影响，但由于本文例数较少，需今后进一步继续观察其临床意义。
表2 急性庚肝抗-HGV E2及临床恢复情况
| 病例 编号 | 病型 | 发病后E2 抗体出现 时间(d) | 抗-HGV E2出 现后HGV RNA 阴转时间 (d) | ALT 最高值 (U/L) | 血清 胆红素 (μmol/L) | 临床治愈 时间(d) |
| 1 | 单纯急性庚肝 | 17 | 7 | 438 | 正常 | 24 |
| 2 | 单纯急性庚肝 | 40 | 同时 | 293 | 正常 | 43 |
| 3 | 单纯急性庚肝 | 21 | 7 | 208 | 正常 | 30 |
| 4 | 急性庚肝+甲肝 | - | 持续阳性 | >500 | 428 | >90 |
参 考 文 献
1，Gutierrez RA,Dawson GJ,Mushahwar IK,et al. ELISA for detection of antibody to the E2 protein of GB virus C. JVirol Methods,1997,69：1-6.
2，Tacke M,Kiyosawa K,Stark K,et al. Detection of antibodies to a putative hepatitis Gvirus envelope protein.Lancet,1997,349：318-320.
3，Tacke M,Schmolke S,Schlueter V,et al.Humoral immune response to the E2 protein ofhepatitis G virus in associated with long-term recovery from infection and reveals a highfrequency of hepatitis G virus exposure among healthy blood donors.Hepatology,1997,26：1626-1633.
(收稿日期：2000-03-21 )
, http://www.100md.com