微波辐照对小鼠离体淋巴细胞Ca2+、细胞内环磷酸腺苷及DNA合成的影响
关键词:
随着微波技术的广泛应用,微波污染日益严重,微波对细胞的作用已受到关注[1,2] ,但微波生物效应产生的机制尚有待深入研究。我们用2450 MHz微波辐照体外淋巴细胞,观察其DNA合成状况及相关指标,旨在较深入地探讨微波对细胞的作用机制。
一、材料与方法
1.实验分组:取健康纯系BABL/C雄性小鼠,无菌条件下取脾脏,分离并获正常脾淋巴细胞,于37℃、5%CO2 孵箱中培养24小时后,按辐照强度分为0、0.5、5.0、50.0 mW/cm2 4组,每组按辐照时间分为Ⅰ(辐照15分钟)、Ⅱ(辐照30分钟)、Ⅲ(辐照60分钟)3个时段,各组每时段样本至少5例。
2.微波暴露:参照Cleary等[3] 设计的辐照系统并略加修改,微波为2450 MHz连续波,微波强度经HP8991功率计检测符合要求后,将密度为2×106 /ml的细胞置于反射系数近似于零的暗室内接受微波辐照。
3.观察指标及方法:(1)DNA合成:采用胸腺嘧啶核苷(3 H-TdR)掺入法。(2)细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量:参照检测说明,破细胞后用放免法测定。(3)细胞内Ca2+ 浓度:细胞经Fura-2/AM负载后测定荧光强度,求Ca2+ 浓度[4] 。(4)细胞膜流动性测定:细胞经DPH荧光标记,再测荧光强度,求细胞膜粘度[5] ......
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