建立引物双标记的聚合酶链反应—酶联免疫吸附法检测军团菌mip基因
关键词：
建立一种新的检测嗜肺军团菌mip基因的引物双标记聚合酶链反应—酶联免疫吸附(PCR-ELISA)法，应用于豚鼠军团菌感染的早期检测和诊断。其方法是将一对嗜肺军团菌引物分别标记有生物素和异硫氰酸荧光素，经PCR扩增后，将标记有生物素的PCR扩增产物加入链酶亲和素包被的微孔板中，洗去未结合物后直接加入碱性磷酸酶标记的抗荧光素抗体，待与荧光素结合后，再加入底物产生显色反应，ELISA仪测得A值。通过对该系统的各项参数的优化，该方法能特异地检出嗜肺军团菌和米克戴德军团菌，检测灵敏度为150fg军团菌基因组DNA(相当于15～30个军团菌)，将不同时间经腹腔感染军团菌的22份豚鼠组织标本，应用该方法与培养法比较，结果显示在感染后3.5天培养法阳性率为88.9%(8/9)，7.5天为0(0/9)，而此方法则分别为100%(9/9)、22.2%(2/9)。引物双标记PCR-ELISA法能早期快速、敏感、特异地诊断军团菌病。与PCR-凝胶电泳法敏感性相一致，由于该方法是建立在微孔板检测基础上，故可与临床常规使用的试剂及仪器设备相配套，易于临床推广使用。
(收稿：1999-04-21) , 百拇医药