细胞色素P-450 4F新基因分离与序列分析
关键词：
已发现人类细胞色素P450氧化酶4F的两个基因。现报道从人类肝脏中分离出的新基因。
1.材料与方法：应用PCR从Clontech公司的Marathon Ready cDNA中分离出人胎肝一个cDNA克隆，用ABI 377型测序仪对cDNA进行双方向测序。从已知序列中合成一对特异引物，以成人肝组织总RNA为模板行逆转录PCR，同时用该引物对成人肝脏cDNA文库进行筛选。将cDNA重组于ESP酵母表达载体中，在EMM酵母培养液中合成GST溶合蛋白，纯化后经SDS-PAGE胶电泳、染色。
2.结果：cDNA全长1980bp，编码一个520个氨基酸大小的蛋白质，分子量59700。氨基酸序列与人类白细胞的白三烯B4W羟化酶(CYP4F3)及人类肝脏的白三烯B4W羟化酶(CYP4F2)有92%的同源性。逆转录PCR及基因文库筛选证明新基因在成人肝脏中表达。体外酵母系统蛋白质表达试验证明该基因表达一个分子量约87×103 的溶合蛋白，实际分子量约60×103 ，与理论测算一致。
3.讨论：白细胞三烯是一强有力的化学趋化物质，是炎症中的重要介质。已证实催化白三烯灭活的白三烯B4W羟化酶为细胞色素P-450的4F基因，并且肝细胞中4F基因表达的活力是白细胞中4F基因的60多倍，因此认为肝脏是白三烯灭活的主要器官，在体内的炎症中起重要作用。我们分离出的人类肝脏细胞色素P-450的另一个新的4F基因，其功能也很可能与白三烯代谢有关。
(本文编辑：袁平戈 校对：何亚玲)
(收稿：1998-05-13 修回；1998-08-05)
, http://www.100md.com