关键词：
nm23是人们研究比较多的一个肿瘤转移抑制基因。现已证实nm23基因的低表达与包括乳腺癌、肝癌、恶性黑色素瘤和胃癌在内的许多肿瘤转移和预后有关。研究发现人类基因组中有两个nm23基因，为nm23-H1和nm23-H2。普遍认为nm23-H1具有抑制癌转移作用。我们观察了nm23基因在3组8种不同转移潜能人癌细胞系中的表达，进一步探讨nm23在这些肿瘤细胞中的表达与转移的关系。
材料与方法
(1)细胞培养：PC3、PC3M(人前列腺癌细胞系)；PAa、PG(人肺癌细胞系)；WM35、WM 1341b、WM 983a、WM 451(人黑色素瘤细胞系)。前列腺癌细胞系和肺癌细胞系均采用含10%小牛血清的RPIM1 640培养基；黑色素瘤细胞系采用含15%小牛血清的RPIM 1 640培养基，进行培养。(2)异硫氰酸胍一步法提取细胞总RNA。1.2%甲醛变性凝胶电泳，RNA上样量20μg。以虹吸法转膜。(3)探针制备：PNM23-H1 cDNA重组质粒(北京医科大学分子病理实验室提供)，以PCR扩增质粒DNA，nm23-H1引物序列：上游：5′-TTGAGCGTACCTCCATTGCGATC-3′；下游：5′-TTTGCACTCTCCACAGAATCACT-3′。采用Prime-α-genelabeling system (Promega公司)。取裸探针约30 ng，以α-32 P-dCTP标记探针。(4)Northernblot杂交：预杂交为68℃30分钟。将标记探针变性后加入杂交袋，68℃继续杂交12小时以上，-70℃放射自显影14天。另以β-actin作为内参照。
结果
nm 23 Northern blot杂交结果显示：8种不同转移潜能人癌细胞系中nm23 mRNA均有表达。8种细胞系不论其转移能力高低，nm 23 mRNA的表达未见明显区别。
讨论
nm 23基因是Steeg等于1988年从鼠的黑色素瘤细胞中分离出来的一种与恶性肿瘤转移有关的基因。之后人们观察了nm23基因在多种肿瘤组织中的转移抑制作用。我们观察了8种不同转移潜能人癌细胞中nm23 mRNA的表达及其与转移潜能的关系。
PC3和PC3M为一对前列腺癌细胞系，两者均具有转移性，PC3M来自PC3的转移灶，为PC3的高转移亚系。PG为人肺巨细胞癌系，具有高转移潜能。PAa为人肺腺癌细胞系，基本无转移能力。4种人黑色素瘤细胞系WM35、WM 1341b、WM 983a、WM 451，其转移能力逐渐升高，其中WM 35无转移能力，WM451转移能力最强。以上各组癌细胞的转移能力均经裸鼠体内实验确认。结果显示：8个细胞系不论其转移能力高低，nm23 mRNA均有表达，除PAa表达稍低外，其余细胞系nm 23表达基本一致。由此可见，nm23基因可能与这些细胞系的转移抑制无关。有学者认为，nm 23基因的转移抑制作用具有组织特异性和时限性，其在人类肿瘤中的表达可因肿瘤发生器官不同而有差异。目前对nm23的作用有3种看法：(1)nm 23表达(mRNA或蛋白)的改变引起肿瘤转移能力相反或相应地改变，说明nm23是影响肿瘤转移的相关基因；(2)nm 23基因结构的改变导致肿瘤转移发生，而与nm23表达量无关；(3)nm 23与肿瘤转移抑制无关。
(收稿：1998-12-22 修回：1999-04-26) , 百拇医药