关键词：
研究证明，白细胞粘附于细静脉壁和嵌塞毛细血管是重症休克微循环灌流量不易恢复的重要原因[1] 。并证明多形核粒细胞(Polymorphonuclearleukocytes, PMNs)粘附性的升高在缺血和再灌注后的血管组织损伤中起着重要的作用。PMNs对内皮细胞的粘附由PMNs表面的CD18粘附受体复合物[包括LFA-1(LymphocyteFunction-Associated Anti gen-1,CD11a/CD18,淋巴细胞功能相关抗原-1)、Mac-1(Macrophage-1,CD11b/CD1 8，巨噬细胞分子-1)、P150，95(CD11c/CD18)]所介导[2，3] 。而有关单核白细胞在粘附中的作用报道尚少，为此我们设计了本试验以测定烧伤性休克时外周血单核白细胞表面LFA-1的表达情况。
1 材料和方法
1.1 病例选择与分组
烧伤性休克病人4例，年龄25～35岁，均为男性。临床表现血压低，脉细弱，呈昏迷或浅昏迷状态，烧伤面积大于98%，呈深Ⅱ～Ⅲ度烧伤，烧伤后6h静脉取血5ml。另设正常对照组4例，取健康志愿者静脉血6ml。
1.2 白细胞分离法 所取标本均用肝素抗凝，将抗凝血用生理盐水对倍稀释，利用Ficoll-Hypague分离液(上海荣盛生物试剂厂、中科院上海细胞生物研究所合作生产)梯度离心法一次性分离单核白细胞。
1.3 间接免疫胶体金标记法 细胞悬液(1×105 细胞/ml)30μl加入96孔圆底培养板中；加入一抗(小鼠抗人LFA-1单克隆抗体，为中国军事医学科学院产品)50μl，阴性对照加入等量PBS，4℃放置30min；5%牛血清PBS洗3遍后，加入金标羊抗鼠二抗(中国军事医学科学院产品，金颗粒直径：10nm)30μl，阴性对照亦加入30μl金标羊抗鼠二抗，5%牛血清PBS洗3遍。
1.4 标记金颗粒的计数与计算 将标记好的细胞收集在琼脂管内并离心使细胞成为一个团块，常规固定，脱水，浸透，包埋及制成超薄切片。阴性对照细胞超薄切片最后行铀铅双重染色[4] 。JEM-1200EX透射电子显微镜(日本产)观察并照片，平均每例标本照片数不少于35张[5] ；将细胞轮廓印在硫酸纸上，利用惠普彩色扫描仪(美国HP公司生产)人工计数每个细胞截面的胶体金颗粒数；用Quantimet520型图像分析仪(Leica公司生产)测定细胞面积；以下述公式计算单位细胞体积中所含有的金颗粒粒子数[6] ：Nv=Nx/Ac.t
Nv 为单位体积所含有的粒子数，Nx 为细胞中所观察到的粒子数，Ac 为细胞面积，t 为切片厚度( 本实验取其平均值为120nm)。
1.5 统计学处理 实验数据以x ±s 表示。采用t 检验。
2 结果
电镜观察发现烧伤后单核白细胞表面及细胞内胶体金颗粒数明显减少(P <0.05)。单位细胞体积所含有的金颗粒粒子数(个/μm3 )，由正常对照组的379±35，减至烧伤组的129±21。阴性对照细胞未见或偶见1～2个金颗粒。4例病人存活2例。
3 讨论
虽然休克早期细胞静脉中即有多量白细胞附壁[7] ，但我们的研究表明，烧伤后单核白细胞表面LFA-1表达量不但没有增强，反而降低。分析其原因可能有以下几方面：①LFA-1不象Mac-1和P1 50，95那样有先成分子贮存池，受刺激后分解越位至细胞表面，而必须重新合成[8] 。②烧伤后分子结构发生了变化，使LFA-1单克隆抗体不能识别。③淋巴因子使LFA-1表达下降。
根据目前粘附分子研究的进展，我们对所实验现象提出下列设想。既然已经证实其它粘附分子在细胞因子刺激表达增强后会发生脱落或以免疫沉淀查出[9，10] ，可推断在烧伤性休克时，LFA-1在受刺激后也存在着功能性片段的脱落。这些脱落片段，在细胞的粘附、聚集、转移以及其它病理过程中起何作用有待进一步查明。相信进一步对LFA-1的细致研究，将给临床烧伤性休克治疗和预后提供一个新的途径。
参考文献
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2 Walsh CJ, Carey PD, Cook DJ, et al. Anti-CD18 antibody attenuates neutro peniaand alveolar capillary-membrane injury during gram-negative sepsis. Surg ery, 1991,110:205-211.
3 Vedder NB, Fouty BW, Winn RK. Role of neutrophils in generalized reperfussion injuryassociated with resuscitation from shock. Surgery, 1989, 106:509-516.
4 小川和郎.透射电镜的基本技术-超薄切片法.见：[日]小川和郎中根一穗主编.朴英杰等翻译.组织细胞化学技术.广州：中山大学出版社，1991：6-11.
5 郑福盛.照片的拍摄与张数.见：郑福盛主编.细胞形态立体计量学.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1990:26-27.
6 申洪.微小粒子Nv的测算.见：申洪，沈忠英主编.实用生物体视学技术.广州：中山大学出版社，1991：99-100.
7 赵克森.失血性休克时白细胞附壁粘着机理的实验研究.中华医学杂志，1990，10：587.
8 Bainton DF, Miller LJ, Kishimoto TK, et al . Leukocyte adhesion receptors arestored in peroxidase-negaive granules of human neutrophils. J Exp Med, 1987 ,166:1641-1653.
9 Jackson AM, Alexandrov AB, Gribben SC, et al. Expression and shedding of ICAM-1in bladder cancer and its immunotherapy. Int J Cancer, 1993, 55:921.
10 George ED.The Mac-1 and P150,95 β2 integrins bind denatured proteins tomediate leukocyte cell-substrate adhesion. Exp Cell Res, 1992, 200:242.
(收稿：1998-06-23 修回：1999-04-07) , 百拇医药