逆转录病毒介导高效的白血病细胞基因转移
白血病 逆转录病毒 基因转移 基因治疗 转染 聚合酶链反应,关键词：
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关键词：白血病 逆转录病毒 基因转移 基因治疗 转染 聚合酶链反应
【摘要 】 目的 建立安全高效的逆转录病毒介导的基因转移系统，为白血病基因治疗提供实验基础。方法 分别用脂质体转染和小鼠逆转录病毒转导方法，将含标志基因 NeoR 的逆转录病毒载体 pLXSN 导入双嗜型包装细胞 GP+envAm12，获得重组逆转录病毒；用含病毒上清感染白血病细胞系( NB4、 U937和 THP-1)，并分析对 K562细胞的转导效率。结果 脂质体 DOSPER 转染法获得病毒滴度为 8.0×105 CFU/ml，而病毒感染法高达 1.6×107 CFU/ml。经 G418选择， PCR证实 NeoR 基因被整合到白血病细胞基因组中，巢式 PCR 与补救分析均未检测到辅助病毒存在。单个集落 K562细胞的 PCR 分析证实，基因转移效率可达 93.3%～ 100%。结论 逆转录病毒介导的基因转移系统是高效、安全的 ......
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