【摘要】 目的 建立竞争性聚合酶链反应( PCR )定量检测幽门螺杆菌(Hp)细胞毒素相关蛋白基因A(cagA)的方法。方法 以重组PCR将乳糖操纵子中乳糖调节蛋白(LacI)的特异性结合序列(21bp)插入cagA基因的一段序列(400 bp)中得到重组cagA基因片段(rfcagA)。体外克隆并表达谷胱甘肽转硫酶-LacI(GST-LacI)的融合蛋白，其一端具有GST活性，另一端可特异性地与rfcagA结合。在定量PCR中，以rfcagA为内参标模板，pMC3或Hp基因组cagA作为竞争性模板，PCR产物的5′-端标记了生物素，可与包被了亲和素的微孔板结合。只有rfcagA的PCR产物可与融合蛋白结合而显色。结果 GST底物的显色程度与样本的cagA含量呈负相关，当反应体系中的起始模板量为10～10⁵ 拷贝，循环次数小于或等于20次,原始模板数以指数方式增长,并建立了原始模板的对数与A₃₄₀ 值间的标准曲线 ......