地高辛掺入聚合酶链反应检测白血病多药耐药基因
白血病|聚合酶链反应|药物耐受性|基因,关键词:
关键词:白血病;聚合酶链反应;药物耐受性;基因
【摘要】 目的 建立灵敏、客观和量化的检测白血病细胞中多药耐药基因(MDR1)表达的方法和判定MDR1基因表达阳性的标准,合理评价MDR1基因在白血病耐药表型中所起的作用。方法 用地高辛标记的脱氧三磷酸尿苷(DIG-11-dUTP)掺入逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测耐长春新碱的多药耐药细胞株HL-60/VCR细胞中MDR1表达,设立MDR1表达的半定量稀释曲线,以此为标准检测了9种不同类型的肿瘤细胞株和43例初治急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者MDR1的表达。结果 梯度稀释HL-60/VCR的RNA含量与其相对应MDR1基因扩增产物有较好的线性关系,将RNA稀释27 倍时所扩增出的MDR1/β-actin产物量之比0.2作为MDR1表达阳性的界定。9种细胞株中,HL-60/VCRMDR1表达高水平,KG-1有一定水平的表达,其它细胞株中未检测到MDR1基因的表达。所检测的43例ANLL标本中,共有13例MDR1阳性,占总数的30.2%,MDR1阳性与MDR1阴性患者的完全缓解率分别为23.1%和86.7%(P<0.005),不同ANLL亚型中MDR1表达率依次为M1 >M5 >M4 >M2 >M3 ,杂合性白血病中也有较高的表达率 ......
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